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SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 4612—2016 国境口岸丙型肝炎病毒荧光 RT-PCR 检测方法 Detection of viral hepatitis C by real-time fluorescence RT-PCR at frontier ports 行业标准信息服务平台 2016-08-23发布 2017-03-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T4612—2016 前言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位:中华人民共和国四川出人境检验检疫局、中华人民共和国深圳出入境检验检 疫局。 本标准主要起草人:田绿波、樊学军、史蕾、高国龙、陈肖潇、石莹。 行业标准信息服务平台 1 SN/T 4612—2016 国境口岸内型肝炎病毒荧光 RT-PCR检测方法 1范围 本标准规定了国境口岸丙型肝炎病毒荧光RT-PCR检测的对象,标本的采集、运输和保存,检测程 序及结果报告 本标准适用于国境口岸人出境人员丙型肝炎病毒的实验室检测。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB19489实验室生物安全通用要求 SN/T1193基因检验实验室技术要求 WS/T230临床诊断中聚合酶链反应(PCR)技术的应用 人间传染的病原微生物名录(卫生部2006年) 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件 3.1 丙型肝炎病毒viral hepatitisC 属于黄病毒科,是一种有包膜的RNA病毒 注:主要通过血液、性生活、母婴垂直传播引起丙型病毒性肝炎,其中血液传播是丙肝病毒的主要传播方式。丙型 肝炎呈全球性流行,可导致肝脏慢性炎症坏死和纤维化,部分患者可发展为肝硬化甚至肝细胞癌。临床上急性 丙肝表现为谷丙转氨酶升高,恶心、食欲下降、尿黄、眼黄等症状,慢性丙型肝炎表现为容易疲劳、食欲欠佳、腹 胀等。 3.2 荧光 RT-PCRreal-time fluorescence RT-PCR 在常规RT-PCR的基础上,加入一条特异性的荧光探针,该探针为一条寡核苷酸,两边分别标记一 扩增时,利用Taq酶的5,一3外切酶活性将探针酶切水解,使荧光报告基团和荧光率灭基团分离,从而 荧光监测系统可以接收到荧光信号。每经过一个PCR循环,荧光信号也和目的片段一样,有一个同步 指数增长的过程,信号的强度与检测对象的核酸含量成正比,可根据数学模型计算出检测对象的含量。 3.3 Ct 值 cycle threshold 在荧光RT-PCR扩增过程中,处于指数增长区范围之内的荧光信号值称为阈值(threshold),当扩 增产物的荧光信号达到设定的阈值时所经过的扩增循环次数称为Ct值 1 SN/T 4612—2016 4缩略语 下列缩略语适用于本文件: HCV:丙型肝炎病毒(HepatitisCVirus); RT-PCR:逆转录聚合酶链反应(reversetranscription-polymerasechainreaction); RNA:核糖核酸(ribonucleicacid); DEPC:焦碳酸二乙酯(diethylpyrocarbonate); FAM:6-羧基荧光素(6-carboxyfiuorescein); MGB:小沟结合物,一种荧光淬灭基团(minorgroovebinder)。 5检测对象 5.1人出境体检人员。 5.2其他申请检验的人员。 6生物安全和PCR防污染要求 6.1按照《人间传染的病原微生物名录》中规定,丙型肝炎病毒属第三类病原微生物,病毒培养、未经培 养的感染材料的操作应在生物安全二级(BSL-2)实验室中进行,灭活材料的操作、无感染性材料的操作 可在生物安全一级(BSL-1)实验室中进行。 6.2遵循GB19489处置实验室废弃物。 6.3 3PCR防污染措施按WS/T230和SN/T1193的规定执行。 7 主要仪器 7.1 荧光定量PCR仪及配套PCR反应管。 7.2 生物安全柜。 7.3 冰箱(4℃、-20℃和-70℃)。 7.4普通台式离心机。 高速冷冻离心机(最高离心力12000g以上)。 7.6微量可调移液器(10μL、100μL、200μL、1000μL)及配套带滤芯吸头。 息服务平台 7.7 Eppendorf 管(1.5 mL)。 7.8 涡旋器。 8 主要试剂 8.1核酸提取试剂 用上海之江生物科技股份有限公司核糖核酸(RNA)抽提试剂盒1),内含离心管、收集管、吸附柱、 RNA助沉剂、蛋白酶K、结合缓冲液VG、洗涤液VD、洗涤液VG、洗脱液VG等组分 1)给出这一信息是为了方便本标准的使用者,并不表示对该产品的认可和推荐。如果其他等效产品具有相同的 效果,则可使用这些等效产品。 2
SN-T 4612-2016 国境口岸丙型肝炎病毒荧光RT-PCR检测方法
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