ICS 65. 150 B 50 河 DB1 3 北 省 地 方 标 准 DB13/ T 1127- 2009 中华鳖穿孔病防治技术规范 2009-08-10发布 2009-08-25实施 河d 匕省质量技术监督局发布 DB1 3 汀1 1 2 7 - 2 0 0 9 月 i j 青 本标准由河北省水产局提出。 本标准起草单位：保定市水产技术推）’‘站、廊坊市水产技术推广站。 本标准主要起草人：张耀红、刘学军、杨方辉、徐彩利、李盼刚、王艳池、葛京、张修建、韩占江、 高倩 DB13/ T 1127- 2009 中华鳖穿孔病防治技术规范 范围 本标准规定了由嗜水气单胞菌、产碱假单胞菌引起的中华鳖穿孔病的诊断和防治技术。 本标准适用T－中华鳖养殖生产中穿孔病的诊断和防治。 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的 修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB汀6682-1992分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 18088-2000出入境动物检疫采样 SC/T 1010中华鳖池塘养殖技术规范 SC/T 1047中华鳖配合饲料 NY 5051无公害食品淡水养殖用水水质 NY/T 5067无公害食品中华鳖养殖技术规范 NY 5070无公害食品水产品中渔药残留限量 NY 5071无公害食品渔用药物使用准则 NY 5072无公害食品渔用配合饲料安全限量 3流行特点及病因 发病期4月一10月，5月一7月为高发期，流行水温25 C--30¡ãC；可感染任一阶段的中华鳖，尤其 对温室幼鳖危害最大，发病率可达50%；常与腐皮、疖疮病并发：具有流行面广‘、传染性强、病程长、 伴随继发感染等特点；饲养环境恶化、饲料腐败变质、受伤等导致鳖体抗病力下降，是该病发生的主要 原因。 4 病原 中华鳖穿孔病的致病菌为气单胞菌属的嗜水气单胞菌（Aeromonashydr叩hila)和产碱假单胞菌 (Pseudomonas pseudoalcaligenes) o 5样品采集、保存 选择症状明显的中华鳖，按GB/T18088-2000进行产地采样、保存：在无菌操作下挑取病灶放入盛 有无菌水和玻璃珠的二角烧瓶中，120rpm振荡，4℃保存。实验室用水符合GB汀6682-1992要求。 6 诊断 6. 1临床诊断 发病初期，病鳖的背甲、腹甲及裙边出现直径大约为0. 2 cm-1.0 cm的白色疮痴，其周围出血， 疮痴挑开后，内容物呈脓汁状，并伴有腥臭味；随着病情的发展，患部溃烂成洞穴，深者通达体腔，病 鳖行动缓慢，反应迟钝，拒食，头不能缩回背甲内；解剖观察，病鳖肝、胰、脾肿大，呈化脓性淤血， 颜色趋紫黑色，口腔、咽部淤血发黑，肠充血，肺呈紫黑色，有的腹腔内有腹水。 DB13/ T 1127- 2009 6.2病理诊断 6.2. 1血细胞形态及生理指标 病鳖血液中红细胞总数减少，低于4.5X105个／mm3，且形态不规则、破碎的、不成熟的红细胞增 多。白细胞总数明显增多，高于1.5X10丬个／mm3，其中单核细胞明显增加，占白细胞总数的2％以上； 嗜中性粒细胞明显增加，变形较大，部分细胞内特殊颗粒排列疏松，有的颗粒散落一边；部分淋巴细胞 个体增大。 6.2.2血液生化特性 病鳖的血液中谷草转氨酶、葡萄糖、钙均值分别大于900 IUL一‘, 5 mmolL一，, 2.2 mmolL`；血液 氯、钠、尿素氮均值分别小于80 mmol¡¤ L', 110 mmol¡¤ L一，、2.8 mmol¡¤ L' ¡ã 6.2.3器官组织显微观察特性 6.2.3. 1肺 局部坏死，肺泡壁上皮细胞和毛细血管内皮细胞肿胀、变性，胞核固缩、碎裂乃至坏死解体。肺泡 壁毛细血管破裂、出血。肺泡隔内血管充血，部分红细胞核消失、解体，仅留残骸；并有血浆渗出和嗜 中性白细胞。肺泡内有许多组织渗出液、红细胞及嗜中性白细胞。肺组织间嗜中性白细胞大量浸润，核 碎裂，坏死成脓细胞，肺组织呈局部化脓灶。 6.2.3.2肝脏 肝内黑色素增多，淤血：肝细胞混浊肿胀；肝血管充血，血浆渗出；进而细胞核碎裂，溶解，胞质水 样变性，并有嗜中性自细胞浸润，白细胞核碎裂，坏死成脓细胞，形成化脓灶。 6.2.3.3肾脏 肾小管上皮细胞混浊肿胀。随着病情的发展，’肾局部坏死，肾小管上皮细胞核碎裂、溶解，管腔内 有嗜伊红的蛋自及红细胞。有大量红细胞从血管中渗出，嗜中性白细胞浸润，坏死，形成化脓灶。肾小 球萎缩，囊腔相对扩大，并有嗜伊红的浆液渗出物。 6.2.3.4脾脏 脾包膜出血，脾小叶界限模糊，红髓扩大并聚集大量红细胞，白髓明显缩小。 6. 2. 3. 5肠 肠壁充血、出血。肠腔内大量嗜中性白细胞浸润，核固缩、碎裂，变成脓细胞。 6. 2. 3. 6心 心肌间有大量渗出液和红细胞；部分心肌纤维弯曲、断裂。 6.3病原学诊断 6.3. 1嗜水气单胞菌 6.3.1.1分离培养 在无菌状态下，取病鳖的肺、脾、肝、血液等病料分别接种于普通肉汤培养基中（接种前加30¦Ìg/mL 氨苄青霉素），置28¡ãC^-30¡ãC培养6 h--8 h，分别移植普通琼脂平板，再继续培养18 h-24 h，挑选纯 化单独大菌落分别移植厌氧培养基、M培养基、SS培养基、EMB培养基、RS培养基、血平板培养基， 革兰氏染色，分离菌保存，按Bergey's系统细菌学分类鉴定和检索表程序对分离菌株进行鉴定。 6.3.1.2鉴定 菌体短杆状，直形略有弯，大小（(0.6-0.9)林mX (1.0-2.0)林m，两端钝圆，单个或两个相连， 无英膜、无芽抱，极生单鞭毛，有运动性。结合生理生化特性鉴定分离菌为嗜水气单胞菌。 6.3.1.3分离菌的人工感染 将分离菌株用无菌生理盐水稀释到5X 10'个／ml'--5. 5 X 10'个／ml。之后取巧g'-20 g的健康幼鳖各 10只进行腿部肌肉注射和腹甲划痕后涂抹，每只0.1ml,1h后分别置于不同的水族箱中，于（30士1) ℃水温中饲养。对照组注射或涂抹相同剂量的生理盐水。6-7 d后试验组幼鳖出现于自然病历相同的 感染结果。并从其肝脏、’肾脏、皮肤病灶分离出与接种菌相同的细菌。而观察期内对照鳖无异常表现。 因此嗜水气单胞菌是穿孔病的致病菌。 DB 13汀1127-2009 6.3.2产碱假单胞菌 6.3.2. 1分离培养 在无菌状态下，取病鳖的肝、脾、肾等病料接种普通营养琼脂平板28¡ãC培养24 h，挑取单个菌落接 种普通营养琼脂斜面进行纯培养，28℃培养24h。取纯化的细菌接种于肉汤培养基，28℃培养24h。观 察分离得到的菌落形态并进行革兰氏染色。按Bergey' s系统细菌学分类鉴定和检索表程序对分离菌株 进行鉴定。 6.3.2.2鉴定 革兰氏阴性短杆菌，单个或成双排列，链状较少，一般大小为（(0.4-0-6)卩mX(1.0-1.5)阝mo 无芽胞，无荚膜，极生单鞭毛，有运动力。结合生理生化特性分离菌为产碱假单胞菌。 6.3.2.3人工再感染 方法步骤及感染结果同6.3.1.3，因此产碱假单胞菌是穿孔病的致病菌之一。 7 防治 7. 1预防 7.1.1水质调控 养殖池的水质指标符合NY5051的要求，室内池水温稳定在28℃士2¡ãC，养殖过程中采用微生态制 剂调水：室外池采用鱼鳖混养、移栽水草、接种有益微生物等措施调控水质。 7.1.2环境消毒 水体、用具、饵料台、晒背台的消毒按照Sc汀1010进行；温室采用甲醛喷雾或紫外灯光照射灭菌， 紫外灯设置密度40瓦八Om2，每天照射15min-20min. 7. 1. 3饲喂 每日投喂2--5次，定点投喂符合SC/T1047,NY5072规定的全价配合饲料，以30min内吃完为宜。 7.1.4逐级培育，合理放养 根据NY/T5067，适时分级、分池饲养，避免因争斗产生外伤。 7.1.5病鳌隔离 发现患鳖，隔离治疗。 7.1.6中草药预防 7.1.6.1芪参免疫散 将芪参免疫散按每kg鳖lg-2g（以5％投饵率计）制成药饵，投喂Id-2d，间隔15 d重复给药。 7.1.6.2六味地黄散 将六味地黄散按每kg鳖0. 1 g（以5％投饵率计）制成药饵，连续投喂5 da 7. 1.7免疫预防 扩大培养分离的嗜水气单胞菌、产碱假单胞菌，制备灭活二联菌苗，菌体浓度2.5 X 108/mL-3X 108/mL, 50g的幼鳖每只注射鳖体。.2mL^-0.3mL，可获得85％以上的保护率。 7. 2治疗 7.2. 1肌肉注射 在后腿肌肉注射庆大霉素或卡那霉素10万IU/kg-20万IU/kgo 7.2.2投喂中草药药饵 常用中草药药饵品种及用法用量见表10 DB1 3厅1127- 2009 表1 品名 银翘板蓝根散 大黄芩蓝散 三黄散 大黄五倍子散 主要成分 板蓝根、金银花、黄芪、 连翘、黄柏 大黄、大青叶、地榆、板 蓝根、黄芩 黄芩、黄柏、大黄、大青 备注 按每kg鳖0. 16 g-0. 24 g制成药饵， 1、用量均以5％投饵率 连续投喂4d-6 do 计；2、使用前加适量 按每kg鳖0.25g一。.5g制成药饵，连 粘合剂，与饵料混匀、 粘合后投喂。 续投喂3 d-5 do vi- do 大黄、五倍子 用法用量 按每kg鳌0.25g制成药饵，连续投喂7 按每kg鳖0. 5g-1. 0g制成药饵，连 续投喂5 d-7 de 7.2.3投喂抗菌药饵 7.2.3. 1有效抗菌药物筛选 通过新分离的菌株采用药敏片直接扩散法筛选对其敏感的药物，抑菌圈直径大于16 mm，可以作 为优选药物。优选药物有庆大霉素、诺氟沙星、妥布霉素、多粘菌素、氟苯尼考、阿米卡星、盐酸多西 环素等。 7.2.3.2药饵投喂 常用抗菌药饵及使用方法见表2. 表2 备注 按每kg鳌用本品0. 1 g^-0.巧g制成药饵， 1、用量均以5％投饵率计；2, 100: 10 氟苯尼考粉 一日一次，连续投喂3d-5 de 使用前加适量粘合剂，与饵料 按每kg鳌用本品0. 4 g^-0.6 g制成药饵，一 混匀、粘合后投喂。3、使用 100: 5 诺氟沙星粉 及休药期遵循NY 5071, NY ！J一次，连续投喂3 d-5 do 诺氟沙星、盐酸 100 g:诺氟沙星9 按每kg鳖用本品0.6g制成药饵，一日一次， 5070的规定。 连续投喂3 de 小劈碱预混剂 g+盐酸小劈碱2g 100: 10 (1000万单 按每kg鳖用本品0. 2 g制成药饵，一「！一次， 盐酸多西环素 位） 连续投喂3 d-