ICS 67.050 X 04 备案号：35802-2013 吉 林 DB22 省 地 方 标 准 DB 22/T 1668—2012 人参食品中人参总皂苷的测定 分光光度法 Determination of total ginseng saponin component in Ginseng foods—— Spectrophotometric method 2012 - 12 - 17 发布 吉林省质量技术监督局 2013 - 01 - 01 实施 发 布 DB22/T 1668—2012 前 言 本标准按照GB/T1.1-2009和GB/T 20001.4-2001给出的规则起草。 本标准由吉林省卫生厅提出并归口。 本标准起草单位：吉林省卫生监测检验中心。 本标准起草人： 李青、范明、刘思洁、石矛、张博、郭金芝。 I DB22/T 1668—2012 人参食品中人参总皂苷的测定 分光光度法 1 范围 本标准规定了人参食品中人参总皂苷含量的分光光度测定方法。 本标准适用于人参食品中人参总皂苷的测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 试料中的人参总皂苷经溶剂提取，层析柱净化和富集，在酸性条件下人参皂苷与香草醛发生显色反 应，用分光光度法比色定量。 4 试剂与材料 除另有规定外，所用试剂均为分析纯，实验用水符合GB/T 6682规定的三级水要求。 4.1 甲醇（CH3OH）。 4.2 无水乙醇（CH3CH2OH）。 4.3 高氯酸（HClO4） 。 4.4 冰醋酸（CH3COOH）。 4.5 70%乙醇溶液：取 70 mL 无水乙醇加水定容至 100 mL。 4.6 大孔吸附树脂。 4.7 中性氧化铝: 层析用粒径为 148 µm-200 µm。 4.8 人参皂苷 Re 标准品（C48H82O18，CAS 号：257-814-6）：纯度≥98%。 4.9 标准储备液： 准确称取人参皂苷 Re 标准品（4.8）10mg，精确到 0.00001g，配成 1 mg/mL 标准 储备液，置 4 ℃冰箱保存 6 个月。 4.10 标准工作液：取标准储备液溶液 0 µL、20 µL、40 µL、60 µL、80 µL、100 µL(相当于 0 µg、 20 µg、40 µg、60 µg、80 µg、100 µg)分别置于 10 mL 比色管中，在 60 ℃水浴上挥干，备用。 4.11 香草醛溶液：取 0.5 g 香草醛（C8H8O3）加冰醋酸溶解并定容至 100 mL。 5 仪器 5.1 分光光度计。 5.2 分析天平：感量为 0.00001 g。 1 DB22/T 1668—2012 5.3 5.4 5.5 5.6 100 5.7 6 高速分散器。 离心机：转速≥ 5000r/min。 超声波提取仪：28 kHz。 层析柱：装载 8 mL 柱容积的大孔吸附树脂（4.6）和 1cm 中性氧化铝，最佳承载量约为 50 µg～ µg。 恒温水浴箱。 分析步骤 6.1 提取 6.1.1 固体试料 6.1.1.1 水溶性试料 称取混合均匀试料（根据试料含人参皂苷量确定取样量），精确到0.001 g，加水溶解，并定容至 250 mL。 6.1.1.2 非水溶性试料 6.1.1.2.1 普通固体试料 取500 g试料，粉粹并过740µm孔筛，充分混匀，称取试料（根据试料含人参皂苷量确定取样量）， 精确到0.001 g，置于50mL离心管中，分别加水溶液 30ml4次 40 mL、40 mL、20 mL，分别在高速分 散器上（10000 r/min）匀质2 min，再以5000 r/min离心5 min；上清液依次转移至250mL容量瓶中，加 水至刻度备用。 6.1.1.2.2 糖份含量高试料 取500 g样品，切碎后充分混匀，称取试料（根据试料含人参皂苷量确定取样量），精确到0.001 g， 置于50 mL离心管中，分别加水溶液40 mL、40 mL、20 mL，分别在高速分散器上（10000 r/min）匀质2 min，再以5000 r/min离心5 min；上清液依次转移至250 mL容量瓶中，加水至刻度，取10mL提取液于125 mL的分液漏斗中，加水饱和的正丁醇溶液萃取3次，每次10 mL，合并正丁醇层，在沸水浴上挥干，水溶 解并定容至10 mL，备用。 6.1.1.2.3 油脂含量高试料 取500 g样品，切碎后充分混匀，称取试料（根据试料含人参皂苷量确定取样量），精确到0.001 g， 置于250 mL具塞三角烧瓶中，分别加入100 mL、50 mL和50 mL石油醚，在超声波提取仪中分别提取10min， 弃去石油醚，残渣挥去石油醚后转移至50 mL离心管中，分别加水溶液40mL、40 mL、20 mL，分别在高 速分散器上（10000 r/min）匀质2min，再以5000 r/min离心5min；上清液依次转移至250 mL容量瓶中， 加水至刻度备用。 6.1.2 液体试料 6.1.2.1 含乙醇类的液体试料 准确吸取一定体积的试料（根据试料含人参皂苷量确定取样量），于蒸发皿中沸水浴挥干，用水浴 溶解残渣，转移至250 mL容量瓶中，加水至刻度备用。 2 DB22/T 1668—2012 6.1.2.2 非乙醇类的液体试料 准确吸取一定体积的试料（根据试料含人参皂苷量确定取样量），于250 mL容量瓶中，加水至刻度 备用。 6.2 净化 用15 mL层析管，内装8 mL 大孔吸附树脂,加上1cm中性氧化铝。先用25 mL70%乙醇洗柱，弃去洗脱 液，再用 25 mL水洗柱，弃去洗脱液，精确加入1.0 mL已处理好的试料溶液，用25 mL水洗柱，弃去淋 洗液，用25 mL70%乙醇洗脱人参皂苷，收集洗脱液于10 mL比色管中，置于60 ℃氮吹仪上吹干，备用。 6.3 标准工作曲线绘制 向标准工作液中（4.10）准确加入香草醛溶液0.2 mL，混匀，使残渣溶解，再加0.8 mL高氯酸，混 匀，60℃水浴上加热10 min，取出，冰浴冷却后，加入冰乙酸定容至5.0 mL，摇匀后，以1 cm比色皿于 560 nm波长处进行比色，得出吸光度值，以浓度为横坐标，以吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。 6.4 测定 在上述（6.2）试料管中， 从“准确加入香草醛溶液 0.2 mL，混匀， （6.3） ”起依法操作，由标准 曲线计算出待测样液中人参皂苷的含量。 6.5 空白试验 除不加试料外，按6.1~6.4操作步骤进行测定。 7 结果计算 X = A ´ V1 ´ 100 % ..........................(1) m ´ V 2 ´ 1000 ´ 1000 式中： X—试料中人参皂甙含量 ，单位为克每100克（g/100 g 或g/100 mL）； A—从标准曲线上计算出测定液人参皂苷的质量，单位为微克（µg）； V1—试料制备的总体积，单位为毫升（mL）； V2—测定用试料制备液体积，单位为毫升（mL）； m—试料质量或试料体积，单位为克或毫升（g或 mL）。 计算结果保留两位有效数字。 8 精密度 8.1 重复性 在重复性条件下，获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。 8.2 再现性 在再现性条件下，获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。 3 DB22/T 1668—2012 9 线性范围和检出限 本方法的线性范围为0 µg～100.0 µg，检出限为0.0075 g/100 g或0.0075 g/100 mL。 ______________________ 4