ICS67.080.01 CCSB31 6528 巴音郭楞蒙古自治州地方标准 DB6528/T189—2023 加工辣椒品种InDel指纹数据库构建规范 ProcessingpeppervarietiesInDelfingerprintdatabaseconstruction specification. 2023-08-01发布 2023-08-15实施 巴音郭楞蒙古自治州市场监督管理局  发布 DB6528/T189—2023 I目次 前言..................................................................................II 1范围................................................................................1 2规范性引用文件......................................................................1 3术语和定义..........................................................................1 4InDel标记鉴定程序...................................................................2 5标记类型及标记来源..................................................................2 6检测方法............................................................................2 7质量保证............................................................................2 DNA质量.........................................................................2 引物序列........................................................................2 酶及PCR反应相关试剂............................................................3 PCR扩增反应.....................................................................3 8样品的来源及性质....................................................................3 品种来源........................................................................3 样品类型........................................................................3 样品分析数量....................................................................3 9引物及流程的评估....................................................................3 评估用的品种数量及名单的确定....................................................3 引物评估的取舍..................................................................4 10不同来源数据的有效整合.............................................................4 固定一套核心引物...............................................................4 提供标准品的要求...............................................................4 提供标准DNA的要求............................................................4 确定引物等位基因BIN的要求.....................................................4 异常带型的数据处理方式.........................................................4 数据的编码方式.................................................................4 11构建品种DNA指纹模式库............................................................5 12构建品种DNA指纹扩展库............................................................5 13数据库数据的随机盲测...............................................................5 DB6528/T189—2023 II前言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件由新疆巴音郭楞蒙古自治州农业农村局提出并归口。 本文件起草单位：新疆巴音郭楞蒙古自治州农业科学研究院、新疆维吾尔自治区农业科学研究院园 艺所。 本文件主要起草人：张建文、张国儒、杨生保、唐亚萍、杨涛、李辉玲、帕提古丽·艾斯穆托拉、 火顺利、董洁、叶远荣。 本文件实施应用中的疑问，请咨询新疆巴音郭楞蒙古自治州农业科学研究院。 对本文件的修改意见或建议，请反馈至新疆巴音郭楞蒙古自治州农业农村局（新疆库尔勒市石化大 道64号小区）、新疆巴音郭楞蒙古自治州农业科学研究院（新疆库尔勒市英下路巴州农科院）、新疆维 吾尔自治区农业科学研究院园艺所（新疆乌鲁木齐市沙依巴克区新疆南昌路403号）、新疆巴音郭楞蒙 古自治州市场监督管理局（新疆库尔勒市延安路27-1号）。 新疆巴音郭楞蒙古自治州农业科学研究院联系电话：0996-2695780；邮编：841000 新疆维吾尔自治区农业科学研究院园艺所联系电话：0991-4590390；邮编：830091 新疆巴音郭楞蒙古自治州市场监督管理局联系电话：0996-2266036；邮编：841000 DB6528/T189—2023 1加工辣椒品种InDel指纹数据库构建规范 1范围 本文件规定了加工辣椒品种InDel标记方法及标记来源、检测方法、质量保证、样品的来源及性质、 引物及流程的评估、不同来源数据的有效整合、构建品种DNA指纹模式库、构建品种DNA指纹扩展库、数 据库数据的随机盲测的要求。 本文件适用于加工辣椒品种鉴定及DNA指纹库的建立。 2规范性引用文件 本文件没有规范性引用文件。 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 InDel标记Insertion-deletion 根据基因组中插入缺失位点，设计一些扩增这些插入缺失位点的PCR引物，这就InDel标记。 DNA指纹DNAfingerprint 具有完全个体特异的DNA多态性，同个体核DNA的酶切片段杂交，获得了由多个位点上的等位基因组 成的长度不等的杂交带图纹。 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳PAGEPolyacrylamidegelelectrophoresis 是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术。 注：根据寡核苷酸的大小来分离，因此可将全长产物与不完整的短分子分开，适合变性蛋白的处理。 引物primer 是一小段单链DNA或RNA，作为DNA复制的起始点，在核酸合成反应时，作为每个多核苷酸链进行延 伸的出发点而起作用的多核苷酸链，在引物的3’-0H上，核苷酸以一酯链形式进行合成，因此引物的 3’-0H，必须是游离的。 核心引物coreprimers 指多态性、稳定性、重复性等综合特性好、可作为DNA指纹鉴定优先选用的一套引物。 注：包括基本核心引物和扩展辅助核心引物。其中基本核心引物作为固定用于品种鉴定和建库的引物，保证不同实 验室数据具有可比性并可进行数据整合。扩展辅助核心引物相对固定，并可根据引物的最新研究结果和特殊鉴 定性状进行调整。 标准品种standardvariety DB6528/T189—2023 2DNA指纹库构建过程中作为谱带分型的参照标准，并辅助判断试验的稳定性和可靠性。 注：以一套典型的遗传基础广泛的高度纯合自交系为试材，对拟建库的引物进行DNA指纹分析，就可确定代表每个 引物不同谱带的标准品种名单。 标准DNAstandardDNA 由一个实验室统一按规定的DNA提取方法一次性提取足量的标准品种的DNA，经DNA指纹分析验证其 真实的指纹带型后