ICS11.100 CCSC04 团体标准 T/CRHA019—2023 ———————————————————————————————— ———————— 人胆系上皮组织类器官构建、质量控制与 保藏操作指南 Guidelinesfortheestablishment，qualitycontrolandstorage ofBiliaryepithelialtissueorganoids 中国研究型医院学会发布2023-08-01实施 2023-07-14发布 全国团体标准信息平台 全国团体标准信息平台 I目次 前言...................................................................................................................................................II 引言.................................................................................................................................................III 1范围...............................................................................................................................................1 2规范性引用文件...........................................................................................................................1 3术语和定义...................................................................................................................................1 4缩略语...........................................................................................................................................3 5基本原则.......................................................................................................................................3 6操作流程与方法...........................................................................................................................4 7检测指标与检测方法...................................................................................................................6 附录A（资料性）胆系上皮类器官培养用主要试剂材料与操作要点.........................................9 附录B（资料性）短串联重复序列（STR）检测.........................................................................11 附录C（资料性）染色体核型检测...............................................................................................12 附录D（资料性）胆系上皮类器官鉴定.......................................................................................13 附录E（资料性）标志基因检测实时荧光定量PCR法.............................................................16 参考文献...........................................................................................................................................18 全国团体标准信息平台 T/CRHA019—2023 II前言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第一部分：标准化文件的结构和起草规则》 给出的规则起草。 本文件由中国研究型医院学会肝胆胰外科专业委员会提出。 本文件由中国研究型医院学会归口。 本文件起草单位：清华大学附属北京清华长庚医院、中国食品药品检定研究院、中国计 量科学研究院、中国医学科学院药物研究所、中国科学院上海药物研究所、上海美迪西生物 医药股份有限公司。 本文件主要起草人：王韫芳、李迪、刁金美、陈昱安、王璇、耿兴超、王晶、傅博强、 强桂芬、潘国宇、彭双清、李桦。 全国团体标准信息平台 III引言 类器官（organoids）是具有器官关键性特征的三维（3D）细胞培养物，它包括一个自 我更新干细胞群，可分化为多个器官特异性的细胞类型，与相对应的器官拥有类似的空间组 织并能够重现对应器官的部分功能，从而提供一个高度生理相关系统。类器官与传统模型相 比，具备细胞增殖分化、自我更新、自组装、可长期培养、遗传稳定性等特点，因此可以模 拟体内器官发育和生理过程，是一种可用来开发模拟人类疾病的更好模型，和高效、低成本、 精准的药筛平台。 作为近10年来生物学界和临床医学最热门的前沿技术之一，类器官技术取得突飞猛进 的发展，人体各个器官均有其类器官建立的报道，同样胆系上皮类器官的建立及应用也是研 究的热点。尤其是作为浓缩和贮存胆汁的胆囊，相较于其他肝外胆道系统，它的摘除不会对 机体造成重大的生理影响，临床已经广泛开展胆囊摘除手术，肝移植手术的常规操作会舍弃 供体胆囊。由于胆囊上皮干性细胞获取更为容易，因此临床切除的胆囊组织是良好的胆系上 皮类器官起始细胞来源。但是人胆系上皮组织的来源可能涉及的风险和伦理敏感性，运送的 冷链保持，类器官建立所涉及的原代细胞分离、培养、扩增、冻存、复苏、质量控制、功能 分析检测等具体试验操作的标准规范，以及整个过程中的污染控制，都体现了胆系上皮类器 官建立及检测方案的多样性、复杂性和特殊性。 鉴于此，制定实验室人胆系上皮组织类器官的构建、保藏及检测应遵循的技术通用要求， 有助于规范人胆系上皮组织类器官的研究、开发与评价，从而推动其在基础医学和临床研究 (包括疾病模型的建立、药物的筛选、细胞治疗、基因治疗和器官芯片的研发等)应用中的发 展。 全国团体标准信息平台 全国团体标准信息平台 1人胆系上皮组织类器官构建、质量控制与保藏操作指南 1范围 本文件提供了人胆系上皮细胞构建、质量控制和保藏的基本原则、操作流程方法以及检测指标与检 测方法的指导与建议。 本文件适用于人胆系上皮活组织类器官的培养、传代、储存、复苏和质量控制。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T37864—2019生物样本库质量和能力通用要求（ISO20387:2018） GB/T38736—2020人类生物样本保藏伦理要求 GB/T42060—2022医学实验室样品采集、运送、接收和处理指南（ISO/TS20658:2017） WS233—2017病原微生物实验室生物安全通用准则 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 类器官organoids 类器官是干细胞、前体细胞和/或分化细胞通过细胞-细胞间以及细胞-基质间的互作而自发组织形成 的体外三维结构，能在多个方面再现体内相应组织或器官的结构与功能。 3.2 胆系上皮biliaryepithelium 胆道系统主要包括肝总管、胆总管和胆囊。胆系上皮为肝外胆道系统上皮组织和胆囊粘膜上皮组织。 3.3 3D细胞培养three-dimensionalcellculture 将具有三维结构不同材料的载体与各种不同种类的细胞在体外共同培养,使细胞能够在载体的三 维立体空间结构中迁移、生长,构成三维的细胞-载体复合物。 3.4 胆系上皮类器官培养基culturemediumofbiliaryepitheliumorganoids 全国团体标准信息平台 T/CRHA019—2023 2适合胆系上皮干细胞生长及分化所需微环境，能维持胆系上皮细胞长期体外扩增培养，保持胆管上 皮细胞/胆囊粘膜层上皮细胞特性，实现体外胆系上皮细胞类器官长期存活的培养介质。