ICS 67.120.30 CCS X20 T/ZNZ 浙 江 省 农 产 品 质 量 安 全 学 会 团 体 标 准 T /ZNZ 189—2023 水产品中生物胺的测定 液相色谱 -串联质谱法 Determination of bioge nic amines in aquatic products by liquid chromatography -tandem mass spectrometric method 2023 - 05 - 11发布 2023 - 06 - 11实施 浙江省农产品质量安全学会 发布 全国团体标准信息平台 T/ZNZ 189—2023 I 前 言 本文件按 照GB/T 1.1 -2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起 草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由浙江省农产品质量安全学会 提出并归口。 本文件起草单位： 绿城农科检测技术有限公司、浙江工业大学、岛津企业管理（中国）有限公司、 丽水蓝城农科检测技术有限公司、浙江农都农产品供应链有限公司。 本文件主要起草人： 洪琳、关荣发、余鹏飞、陈蓉、傅诗敏、何晓明、卢劼、郑锌、何誉、董叶箐、 陈志民、卢军、孙文闪。 全国团体标准信息平台 T/ZNZ 189—2023 1 水产品中生物胺的测定 液相色谱 -串联质谱法 1 范围 本文件描述了用液相色谱 -串联质谱测定 水产品中色胺、β-苯乙胺、腐胺、尸胺、组胺、章鱼胺、 酪胺、亚精胺和精胺 等9种生物胺 的方法。 本文件适用于鱼、虾、蟹 和鳖等水产品中9种生物胺 的测定。 2 规范性引用文件 下列文件 中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 原理 试样中生物 胺经酸化乙腈水 溶液超声提取，用通过型 固相萃取柱 净化，液相色谱 -串联质谱法测定， 基质外标法定量 。 5 试剂和材料 5.1 试剂和材料 除非另有说明 ，所有试剂均为色谱纯 ，水为符合 GB/T 6682 规定的一级水。 5.1.1 乙腈（CH 3CN）。 5.1.2 甲醇（CH 3OH）。 5.1.3 甲酸（HCO 2H）。 5.1.4 盐酸（HCl）：优级纯。 5.1.5 通过型 HLB固相萃取小柱 ：60 mg/3 mL ，或性能相当者 。 5.1.6 滤膜： 0.22 μm，尼龙膜 。 5.2 溶液配制 5.2.1 盐酸溶液 （0.1 mol/L ）：移取 9.0 mL盐酸（ 5.1.4），加水定容至 1000 mL，混匀。 全国团体标准信息平台 T/ZNZ 189—2023 2 5.2.2 酸化乙腈水溶液 ：量取 800 mL乙腈（ 5.1.1）于 1000 mL 容量瓶中，加入 2 mL甲酸（ 5.1.3）， 用水定容，混匀。 5.2.3 甲酸水溶液（ 1 mol/L）：量取 37.7 mL甲酸（ 5.1.3），加水定容至 1000 mL，混匀。 5.3 标准品 5.3.1 色胺（C10H12N2，CAS：61-54-1），纯度：≥92%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准 物质。 5.3.2 β-苯乙胺（C8H11N，CAS：64-04-0），纯度：≥92%，或经国家认证并授予标准物质证书的标 准物质。 5.3.3 腐胺（C4H12N2，CAS：110-60-1），纯度：≥92%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准 物质。 5.3.4 尸胺（C5H14N2，CAS：462-94-2），纯度：≥92%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准 物质。 5.3.5 组胺（C5H9N3，CAS：51-45-6），纯度：≥92%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物 质。 5.3.6 章鱼胺（C8H11NO 2，CAS：104-14-3），纯度：≥92%，或经国家认证并授予标准物质证书的标 准物质。 5.3.7 酪胺（C8H11NO，CAS：51-67-2），纯度：≥92%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准 物质。 5.3.8 亚精胺（C7H19N3，CAS：124-20-9），纯度：≥92%，或经国家认证并授予标准物质证书的标 准物质。 5.3.9 精胺（C10H26N4，CAS：71-44-3），纯度：≥92%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准 物质。 5.4 标准溶液配制 5.4.1 标准储备溶液 （1000 mg/L）：分别准确称取标准品 （5.3）适量，分别置于 10 mL小烧杯中， 用0.1 mol/L盐酸溶液溶解后转移至 10 mL容量瓶中，定容，混匀 ，置-20℃避光密封保存，有效期 6 个月。 5.4.2 混合标准中间溶液 （10 mg/L）：分别吸取 1.0 mL各单组分标准储备溶液，置于同一个 100 mL 容量瓶中，用 0.1 mol/L盐酸稀释至刻度，混匀，置于 4℃保存，保存期为 3个月。 5.4.3 混合标准 工作溶液：用空白样品基质溶液 配制混合标准工作溶液，浓度分别为 0.02 mg/L、0.05 mg/L、0.10 mg/L、0.20 mg/L、0.50 mg/L，基质混合标准工作溶液应现配现用 。 6 仪器和设备 6.1 液相色谱 -串联质谱仪：配有电喷雾离子源（ ESI）。 6.2 分析天平：感量 0.01 g和0.0001 g。 6.3 离心机： 转速≥8000 r/min 。 6.4 涡旋混合器 。 6.5 超声波清洗仪 。 6.6 固相萃取仪 。 6.7 氮吹仪。 全国团体标准信息平台 T/ZNZ 189—2023 3 7 试样的制备与保存 7.1 试样的制备 将抽取的样品充分搅碎和混匀。 取可食部分 200 g，均分为 2份，分别装入洁净容器内，作为试样 和 留样。密封，并标明标记。将试样于 -18℃以下冷冻保存 。 8 测定步骤 8.1 提取 称取试样 2 g（精确至 0.01 g）置于50 mL离心管中， 加酸化乙腈水 溶液（5.2.2）10 mL，涡旋混匀 5 min，超声提取 20 min，8000 r/min 离心 3 min，取提取液于另一 50 mL塑料具塞离心管 中，再用 酸化 乙腈水溶液 10 mL重复提取一次，合并提取液 。 8.2 净化 准确移取 5 mL提取液至固相萃取柱中，保持 1 mL/ min的流速，收集全部流出液 于10 mL玻璃试 管中， 40℃水浴氮气吹干， 加甲酸水溶液 （5.2.3）2.0 mL溶解，涡旋混匀 ，溶液过 0.22 µ m滤膜，供 液相色谱 -串联质谱仪测定 。 8.3 仪器参考条件 8.3.1 液相色谱条件 8.3.1.1 色谱柱： 阳离子交换柱（ 4×50 mm），或性能相当者 ； 8.3.1.2 柱温： 40℃； 8.3.1.3 流速： 1.0 mL/min； 8.3.1.4 进样量： 5 µL； 8.3.1.5 流动相： A为纯水，B为1 mol/L甲酸水溶液 （5.2.3）； 8.3.1.6 流动相梯度洗脱 条件见表 1。 表1流动相梯度洗脱 条件 时间（min） A（%） B（%） 0.00 97 3 15.00 65 35 16.00 0 100 25.00 0 100 25.10 97 3 30.00 97 3 8.3.2 质谱参考条件 8.3.2.1 离子源：电喷雾离子源 （ESI）； 8.3.2.2 扫描方式： 正离子扫描 ； 8.3.2.3 离子源温度： 300℃； 全国团体标准信息平台 T/ZNZ 189—2023 4 8.3.2.4 干燥气流量 ：10 L/min； 8.3.2.5 检测方式：多反应监测（ MRM），多反应监测条件 ，见表 2。 表2 生物胺监测离子对、碰撞能量 序号 化合物 定量离子对 定性离子对 碰撞能量 / eV 1 色胺 161.1 0/144.05 161.1 0/115.1 0 15,21 2 β-苯乙胺 122.1 0/105.05 122.1 0/77.0 0 19,30 3 腐胺 89.10/72.1 0 89.10/30.05 27,27 4 尸胺 103.1 0/86.1 0 103.1 0/41.05 16,15 5 组胺 112.1 0/95.1 0 112.1 0/68.1 0 17,27 6 章鱼胺 154.1 0/91.05 154.1 0/65.05 16,27 7 酪胺 138.1 0/121.05 138.1 0/77.0 0 24,30 8 亚精胺 146.2 0/72.05 146.2 0/112.1 0 29,21 9 精胺 203.2 0/112.15 203.2 0/84.05 20,15 8.3.3 液相色谱 -质谱测定 取试样溶液和相应浓度的 基质混合标准 工作溶液（ 5.4.3），用