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SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 2615—2010 苹果边腐病菌检疫鉴定方法 Detection and identification of Phialophora malorum (Kidd & Beaumont) McColloch 行业标准信息服务平台 2010-05-27发布 2010-12-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T2615—2010 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位:中国检验检疫科学研究院,中华人民共和国新疆出入境检验检疫局,中华人民共 和国浙江出人境检验检疫局。 本标准主要起草人:吴品珊、杜洪忠、王文正、吴志毅、严进。 行业标准信息服务平台 I SN/T2615—2010 苹果边腐病菌检疫鉴定方法 1范围 本标准规定了植物检疫中苹果边腐病菌的检疫鉴定方法。 本标准适用于进出境苹果和梨果实中苹果边腐病菌的检疫和鉴定。 2原理 苹果边腐病菌在寄主上的症状、形态学特征及分子生物学特性是制定本标准的主要依据。 3仪器和用具 3.1仪器 生物显微镜(具测量功能),体视显微镜,超净工作台光照生物培养箱,天平,高压灭菌器,台式高速 离心机,pH计,水浴箱,PCR扩增仪,电泳仪,凝胶成像仪。 3.2用具 烧杯,三角瓶,量筒,试管,培养皿(直径9cm),载玻片,盖玻片,酒精灯,塑料研杆,移液器,移液器 行业标准 吸头,离心管,液氮罐。 4试剂和培养基 4.1试剂 琼脂粉,马铃薯,葡萄糖,乳酸,琼脂糖,无菌双蒸水,液氮,Tris-HCl,氧化镁,盐酸,EDTA,氢氧化 钠,乙酸钠,氯化钾,Tris,CTAB,TAE,无水乙醇,苯酚,溴化乙锭(LB),三氯甲烷,异丙醇,异戊醇,蛋白 酶K,TaqDNA聚合酶,dNTP,DNA分子量Marker,PCR特异性引物PMA-1和PMA-2,实时荧光 PCR特异性引物PMA-P1、PMA-P2及探针PMA-Probe-457。 4.2培养基 马铃薯葡萄糖培养基(PDA):马铃薯200g,葡萄糖20g,琼脂20g,1000mL蒸馏水,灭菌。 微酸性马铃薯葡萄糖培养基(APDA):制备1000mLPDA,灭菌后冷却到50℃,加人1.5mL85% 的乳酸。 5鉴定方法 5.1症状检查 病害症状参见附录A。
SN-T 2615-2010 苹果边腐病菌检疫鉴定方法
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