ICS65.020.30 CCSB50 中华人民共和国国家标准 GB/T47228—2026 代替GB/T15805.1—2008 传染性胰脏坏死病诊断方法 Diagnosticmethodsforinfectiouspancreaticnecrosis 2026-02-27发布 2026-09-01实施 国家市场监督管理总局 国家标准化管理委员会发布目 次 前言 Ⅲ ………………………………………………………………………………………………………… 1 范围 1 ……………………………………………………………………………………………………… 2 规范性引用文件 1 ………………………………………………………………………………………… 3 术语和定义 1 ……………………………………………………………………………………………… 4 缩略语 1 …………………………………………………………………………………………………… 5 试剂和材料 2 ……………………………………………………………………………………………… 6 仪器设备 3 ………………………………………………………………………………………………… 7 临床症状 3 ………………………………………………………………………………………………… 8 样品 3 ……………………………………………………………………………………………………… 9 病毒分离 3 ………………………………………………………………………………………………… 10 中和试验 4 ………………………………………………………………………………………………… 11 ELISA 5 ………………………………………………………………………………………………… 12 RT-PCR检测 6 …………………………………………………………………………………………… 13 实时荧光RT-PCR检测 7 ……………………………………………………………………………… 14 综合判定 8 ………………………………………………………………………………………………… 附录A(规范性) 试剂及其配制 9 ………………………………………………………………………… 附录B(资料性) 目标扩增参考序列及引物、探针的位置 10 …………………………………………… 附录C(资料性) 传染性胰脏坏死病(IPN) 11 …………………………………………………………… 附录D(资料性) 中和试验结果记录表 12 ………………………………………………………………… 参考文献 13 …………………………………………………………………………………………………… ⅠGB/T47228—2026 前 言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件代替GB/T15805.1—2008《鱼类检疫方法 第1部分:传染性胰脏坏死病毒(IPNV)》,与 GB/T15805.1—2008相比,除结构调整和编辑性改动外,主要技术变化如下: ———更改了试剂和材料(见第5章,GB/T15805.1—2008的第3章); ———更改了仪器设备(见第6章,GB/T15805.1—2008的第4章); ———增加了临床症状(见第7章); ———更改了中和试验结果判定(见10.3,GB/T15805.1—2008的6.3); ———增加了RT-PCR检测(见第12章); ———增加了实时荧光RT-PCR检测(见第13章); ———更改了综合判定,增加了RT-PCR、实时荧光RT-PCR的判定方法(见第14章,GB/T15805.1— 2008的第8章)。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由中华人民共和国农业农村部提出。 本文件由全国水产标准化技术委员会(SAC/TC156)归口。 本文件起草单位:全国水产技术推广总站、北京市水产技术推广站、中国水产科学研究院黑龙江水 产研究所、岳阳渔美康生物科技有限公司。 本文件主要起草人:徐立蒲、张文、冯东岳、张翔、吕晓楠、徐黎明、卢彤岩、潘勇、王静波、王姝、曹欢、 王小亮、王澎、王紫阳、刘绍春、樊均德。 本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为: ———1995年首次发布为GB/T15805.1—1995,2008年第一次修订; ———本次为第二次修订,标准编号调整为GB/T47228—2026。 ⅢGB/T47228—2026 传染性胰脏坏死病诊断方法 1 范围 本文件描述了传染性胰脏坏死病诊断的试剂和材料、仪器设备、临床症状、样品、病毒分离、中和试 验、ELISA、RT-PCR检测、实时荧光RT-PCR检测和综合判定的方法。 本文件适用于鱼类的传染性胰脏坏死病的流行病学调查、诊断、检疫和监测。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文 件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于 本文件。 GB/T18088 出入境动物检疫采样 SC/T7011.1 水生动物疾病术语与命名规则 第1部分:水生动物疾病术语 SC/T7103 水生动物产地检疫采样技术规范 3 术语和定义 SC/T7011.1界定的术语和定义适用于本文件。 4 缩略语 下列缩略语适用于本文件。 BF-2:蓝鳃太阳鱼细胞系(bluegillfrycellline) bp:碱基对(basepair) CHSE-214:大鳞大麻哈鱼胚胎细胞系(chinooksalmonembryocellline) CPE:致细胞病变效应(cytopathiceffect) CTAB:十六烷基三甲基溴化铵(hexadecyltrimethylammoniumbromide) Ct值:阈值循环数,即荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数(cycle-thresholdvalue) DEPC:焦碳酸二乙酯(diethylpyrocarbonate) dNTPs:脱氧核糖核苷三磷酸混合物(deoxy-ribonucleosidetriphosphatemixture) ELISA:酶联免疫吸附试验(enzyme-linkedimmunosorbentassay) IPN:传染性胰脏坏死病(infectiouspancreaticnecrosis) IPNV:传染性胰脏坏死病毒(infectiouspancreaticnecrosisvirus) PCR:聚合酶链式反应(polymerasechainreaction) PG:狗鱼性腺细胞系(pikegonadcellline) RTG-2:虹鳟性腺细胞系(rainbowtroutgonadcellline) RT-PCR:逆转录PCR(reversetranscriptionPCR) Taq:水生栖热菌(Thermusaquaticus) 1GB/T47228—2026 5 试剂和材料 除非另有说明,在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和蒸馏水或去离子水或相当纯度的水。 5.1 DEPC水:常温保存。 5.2 无水乙醇:常温保存。 5.3 H2O2溶液:常温保存。 5.4 辣根过氧化物酶标抗鼠抗体IgG:按说明书使用。 5.5 明胶:常温保存。 5.6 硫酸溶液:浓度2mol/L,常温保存。 5.7 5×逆转录酶缓冲液:-20℃保存。 5.8 dNTPs溶液:含dCTP、dGTP、dATP、dTTP,每种核苷酸浓度10mmol/L,-20℃保存。 5.9 RNA酶抑制剂:浓度20U/μL,-20℃保存。 5.10 AMV逆转录酶:浓度10U/μL,-20℃保存。 5.11 10×TaqDNA聚合酶缓冲液:缓冲液不含Mg2+,-20℃保存。 5.12 MgCl2溶液:浓度25mmol/L,-20℃保存。 5.13 TaqDNA聚合酶:浓度5U/μL,-20℃保存。 5.14 6×上样缓冲液:-20℃保存。 5.15 核酸染料:4℃保存。 5.16 DNA分子质量标准溶液:分子质量大小在100bp~2000bp,-20℃保存。 5.17 琼脂糖:电泳级,常温保存。 5.18 鱼类细胞:BF-2、RTG-2、CHSE-214或PG。 5.19 细胞培养液:按附录A中A.1配制,或使用其他等效商品化试剂。 5.20 包被稀释液:按A.2配制。 5.21 PBST:按A.3配制。 5.22 TMB溶液:按A.4配制。 5.23 CTAB溶液:按A.5配制。 5.24 抽提液Ⅰ:按A.6配制。 5.25 抽提液Ⅱ:按A.7配制。 5.26 1×电泳缓冲液:按A.8配制。 5.27 IPNV毒株:由动物病原微生物菌(毒)种保藏国家行政主管部门指定机构提供。 5.28 抗IPNV抗血清:由动物病原微生物菌(毒)种保藏国家行政主管部门指定机构提供或使用其他 等效商品化试剂。 5.29 羊抗IPNVIg免疫球蛋白:由动物病原微生物菌(毒)种保藏国家行政主管部门指定机构提供或 使用其他等效商品化试剂。 5.30 鼠抗IPNV单克隆抗体:由动物病原微生物菌(毒)种保藏国家行政主管部门指定机构提供或使 用其他等效商品化试剂。 5.31 RT-PCR引物,-20℃保存,序列如下,扩增序列见附录B: F:5'-CAAGGCAACCGCAACYTACT-3'; R:5'-ATKGCAGCTGTGCACCTCAT-3'。 5.32 实时荧光RT-PCR引物和探针,-20℃保存,序列如下