ICS 71.040.30 G 60/69 HG 中华人民共和国化工行业标准 HG/T 4850.4—2019 稳定性同位素氙标记试剂 第4部分：敌百虫-D6 Stable isotope deuterium labelled reagents Part 4: Dipterex-D6 2019-08-02发布 2020-01-01实施 中华人民共和国工业和信息化部发布 HG/T4850.4—2019 前言 本部分按照GB/T1.1一2009《标推化工作导则 第一部分：标准的结构和编写》给出的规则 起草。 HG/T4850《稳定性同位素氛标记试剂》分为6个部分： 第1部分：甲萘威-D3； 第2部分：沙丁胺醇-D3； 第3部分：恩诺沙星-Ds； 第4部分：敌百虫-Ds 第5部分：特罗类-D。试剂； 第6部分：孔雀石绿-D12。 本部分是HG/T4850的第4部分。 本部分由中国石油和化学工业联合会提出。 本部分由全国肥料和土壤调理剂标准化技术委员会（SAC/TC105）归口。 本部分起草单位：上海化工研究院有限公司、上海稳定性同位素工程技术研究中心 本部分主要起草人：李美华、罗勇、吕靖、杨维成、盛立彦、孙雯、潘洁、杜晓宁、雷雯。 I HG/T4850.4—2019 稳定性同位素氛标记试剂 第4部分：敌百虫-D6 1范围 HG/T4850的本部分规定了稳定性同位素氛标记试剂敌百虫-D。的符号、要求、试验方法、检 验规则、标识、包装、运输和贮存。 本部分适用于以三氯化磷和氛代甲醇为原料，通过有机合成法制备的稳定性同位素氛标记敌百 虫-D。产品。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T8170数值修约规则与极限数值的表示和判定 3分子结构式 Q OH D,CO—P—CH-CCl, OCD; 4符号 下列符号适用于本文件。 4. 1 同位素原子的表示："A 其中A表示元素符号，m表示该元素的同位素的相对原子质量数。例如："H表示氢元素中相对 原子质量数为2的同位素氢原子，通常以D表示。 4. 2 同位素原子标记个数的表示："An 其中A表示元素符号，m表示该元素的同位素的相对原子质量数，n表示含该元素的同位索原 子的个数。例如："H。表示氢元素中相对原子质量数为2的同位素氢原子有6个，通常以D。表示。 4. 3 同位素丰度的单位表示：atom%"A 表示A元素的相对质量数为m的原子占A元素的原子百分数。例如：atom%D表示相对原子质 1 HG/T4850.4—2019 量数为2的同位素氢原子在氢元素中所占的原子百分数。 5要求 5.1外观 白色粉末。 5.2要求 产品应符合表1的要求。 表1产品技术要求 指 标 项 I型（内标试剂） Ⅱ型(化学试剂) 95. 0 纯度（质量分数）/% 99. 0 0°66 96.0 D同位素丰度/(atom%D) 6试验方法 6. 1 般规定 除非另有规定，本部分分析过程中所用的水应符合GB/T6682中规定的一级水，试剂均为分 析纯。 6.2外观 在常温环境下，取试样在自然光条件下目测。 6.3纯度高效液相色谱法 6.3.1方法原理 高效液相色谱法测定敌百虫-D。纯度，以天然丰度敌百虫标准品作为外标，建立标准工作曲线， 测定稳定性同位素标记敌百虫-D。的纯度。 6.3.2试剂和材料 6.3.2.1乙腈：色谱纯。 6.3.2.2甲酸：色谱纯。 6.3.2.3甲酸水溶液：体积分数为0.1%。 用移液管吸取1mL甲酸，放人1L容量瓶中，加水至1L，经超声混匀15min后，过0.45μm 滤膜，待用。 6.3.2.4敌百虫标准品：纯度≥99%。 6.3.3仪器和设备 6.3.3.1通常实验室用玻璃仪器及设备。 2 HG/T4850.4—2019 6.3.3.2涡旋混合器。 6.3.3.3液相色谱仪：配紫外检测器或PDA阵列检测器。 6.3.3.4微量进样器：25μL。 6.3.3.5 分析天平：精度十万分之一。 6.3.3.6微孔滤膜：孔径0.22μm。 6.3.3.7超声波脱气仪。 6.3.4色谱条件 推荐的典型色谱条件如下，也可选择其他达到同等分离效果的条件： a) 色谱柱：VenusilHILIC(E)，150mm×2.1mmI.D.，5μm，或采用具有同等分离效率的 色谱柱； b) 柱温：30℃； c） 进样量：5μL； UV检测器波长：200nm； (P e) 流速：0.3mL/min 流动相：A为乙腈，B为0.1%甲酸水溶液； 洗脱条件：A/B=95/5，等度洗脱。 6.3.53 分析步骤 6.3.5.1外标标准储备溶液的制备 准确称取10mg（精确到0.01mg）的敌百虫标准品，溶于乙睛，转移至10mL棕色容量瓶中定 容，配制成1000mg/L的标准储备溶液，避光保存于冰箱中，可使用2个月。 6.3.5.2外标标准工作溶液的制备 将上述标准储备溶液用乙稀释，得到浓度分别为50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL、 300μg/mL、400μg/mL和600μg/mL的标准工作溶液，避光保存于冰箱中，可使用2周。 6.3.5.3试样的溶解 做两份试料的平行测定。每份称取10mg（精确到0.01mg）敌百虫-D。试料，溶于乙睛，定容 于10mL棕色容量瓶中，得到浓度为1000mg/L的样品储备溶液。用乙腈稀释样品储备溶液，得到 200μg/mL的样品分析液。 6.3.5.4标准工作曲线的建立 待高效液相色谱仪稳定后，将6.3.5.2处理得到的系列标准工作溶液以孔径0.22μm的微孔滤膜 过滤后，用微量进样器分别注入仪器，每个浓度的标准工作溶液均重复测定3次。以标准工作溶液的 浓度为横坐标、每个浓度3次测定得到的外标物峰面积平均值为纵坐标，绘制标准工作曲线，并拟合 得到标准曲线方程。 6.3.5.5试样的测定 将6.3.5.3处理得到的溶液用孔径0.22μm的微孔滤膜过滤后，用微量进样器注人仪器，每份试 3 HG/T 4850.42019 料溶液重复测定3次。计算得出3次测定的峰面积平均值，由标准曲线方程求得试料溶液的浓度，代 人公式（1）可得试料的纯度。 6.3.6分析结果的计算与表述 6.3.6.1纯度 纯度w以质量分数计，数值以%表示，按公式（1）计算： kcVX sT ×100 （(1) w m 式中： k一—稳定同位素D标记敌百虫与敌百虫标准品的摩尔质量校正系数（k=1.02)； C——试料峰面积平均值在标准工作曲线上对应的产品溶液的浓度的数值，单位为毫克每升 (mg/L); V一一试料溶液定容体积的数值，单位为升（L)； XsT——敌百虫标准品标注纯度的数值，以质量分数（%）表示； m一—试样的质量的数值，单位为毫克（mg）。 取3次测定的算术平均值作为结果，计算结果保留1位小数。 6.3.6.2允许差 平行测定结果的绝对差值≤0.5%。 6.4D同位素丰度—液相色谱-质谱法 6.4.1方法原理 将样品用无水甲醇完全溶解后，以质谱蠕动泵进样的形式将样品导人液相色谱-质谱的电喷雾离 子源（ESI)，使样品溶液发生静电喷雾，在近大气压下的干燥气流中形成带电雾滴。随着溶剂蒸发， 通过离子蒸发等机制形成气态离子，进入质谱分析。按离子的质荷比（m/z）不同加以分离，最终由 离子收集检测器采集到相应的质谱信息，得到各m2峰强度，用“质量簇”分类计算法计算试样敌 百虫-D的D同位素丰度值。“质量簇”分类计算法原理见附录A。 6.4.2试剂和材料 6.4.2.1无水甲醇：色谱纯。 6.4.2.2 离心管：1.5mL。 6.4.2.3移液器：100μL1000μL。 6.4.3仪器和设备 6.4.3.1通常实验室用玻璃仪器及设备。 6.4.3.2液相色谱-质谱联用仪：配有蠕动泵及ESI离子源。 6.4.3.3进样针：500μL。 6.4.4质谱条件 6.4.4.1扫描模式：正离子模式（十ESI)。 4 HG/T4850.4—2019 6.4.4.2电喷雾电压：3.5kV。 6.4.4.3离子传输管温度：275℃。 6.4.4.4雾化气流量：13L/min。 6.4.4.5 单次质谱扫描时间：0.5s。 6.4.4.6质谱谱图叠加次数：>20。 6.4.4.7 扫描范围：m/z=[M+H］+士10dalton。 6.4.4.8 动泵流速：10μL/min。 6.4.5分析步骤 6.4.5.1试样的溶解 称取约1mg试料，置于1.5mL离心管中，加人1mL无水甲醇充分溶解。用移液器移取100μL 该溶液于10mL容量瓶中，用无水甲醇稀释定容，浓度约为10mg/L。同时做两份试料的平行测定。 6.4.5.2试样的测定 将6.4.5.1得到的试料溶液吸入进样针，连接到质谱仪进样系统，利用动泵将进样针内的溶液 推人质谱仪离子源，采集正离子模式扫描的m/z二257~269的信号峰，输出相应的信号峰强度数据。 通过公式计算得到试料的同位索丰度。 6.4.6分析结果的计算与表述 6.4.6.1不同D标记度的靡尔分数计算 采集质谱图中m/z=257、258、259、260、261、262、263、264、265、266、267、268、269峰 强度数据，代人下方程组（2）计算，解得lab;（j二0，1，2，3，4，5，6）。 [A257=toX0.412 A258to X0. 019+ItablX0. 412 A259 =bo X0. 399+