ICS 67. 050 SN 53 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T5144--2019 出口食品中酮脲磺草盼酯残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法 Determination of thiencarbazone-methyl residues in foodsfor export- LC-MS/MSmethod 2019-10-25发布 2020-05-01实施 武中司南司出版社有限公司 HG944440042975 中华人民共和国海关总馨 发布 副开徐层教语密码 SN/T 51442019 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由中华人民共和国海关总署提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国石家庄海关。 本标准主要起草人：马育松、张海超、艾连峰、窦彩云、李玮、王敬、陈瑞春、郭春海。 T SN/T5144—2019 出口食品中酮脲磺草盼酯残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法 1范围 本标准规定了出口食品中酮脲磺草盼酯残留量的液相色谱-质谱/质谱测定方法。 本标准适用于玉米、小麦、大豆、糙米、马铃薯、菠菜、梨、葡萄、茶叶、鸡肉、猪肉、鱼肉、鸡肝、牛奶中 酮脲磺草酯的确证和定量测定。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3方法提要 试样中的酮脲磺草盼酯采用乙腈提取，提取液经石墨化炭黑固相萃取柱或C18固相萃取柱净化，用 液相色谱-质谱/质谱仪检测和确证，外标法定量。 4试剂和材料 除非另有说明，所用试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682规定的一级水。 4.12 乙腈：色谱级。 4.2月 甲醇：色谱级。 4. 3 二氯甲烷：色谱级。 4.4日 甲酸：色谱级。 4.5 氯化钠。 4.6 无水硫酸钠：650℃烘烤4h，在干燥器内冷却至室温，贮于密封瓶中备用。 4.7 甲醇-二氯甲烷（3：7，体积比）：量取300mL甲醇（4.2），加人700mL二氯甲烷（4.3），混匀备用。 4.80.2%甲酸水溶液：量取2mL甲酸（4.4），用水定容至1000mL。 4.9酮磺草吩酯标准物质：CAS号为317815-83-1，纯度大于或等于98%。 4.10酮脲磺草吩酯标准储备溶液：准确称取适量的酮脲磺草酯标准物质（4.9），用甲醇（4.2)配制成 浓度为1.0mg/mL的标准储备溶液，4℃下避光保存。 4.11酮脲磺草吩酯标准中间溶液：取上述标准储备溶液（4.10)适量，用甲醇(4.2)配制成1μg/mL的 标准中间溶液，4℃下避光保存。 4.12基质空白溶液：将不同基质的阴性空白样品分别按照7.1和7.2处理后得到的溶液。 4.13基质标准工作溶液：根据实验需要吸取适量的标准中间溶液（4.11），用基质空白溶液（4.12)稀释 成适当浓度的标准工作溶液，现用现配。 4.14.石墨化炭黑固相萃取柱：250mg，3mL或相当者。 1 SN/T 51442019 4.15C18固相萃取柱：500mg，3mL或相当者。 4.16微孔滤膜：0.22um，有机相型。 5仪器和设备 5.1 高效液相色谱-质谱/质谱仪：配电喷雾正离子源（ESI+）。 5.2 组织捣碎机。 5.3电子天平：感量分别为0.1mg和0.01g。 5.4 离心机：转速不低于5000r/min。 5.5均质器：转速不低于100001/mi。 5.6 涡旋混匀器。 5.7 氮气吹干仪。 5.8 固相萃取装置。 6 样品制备和保存 6.1制样要求 在制样的过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。 6.2试样制备 6.2.1梨、葡萄、菠菜和马铃薯 取有代表性样品500g，梨取全果去柄；葡萄取全果；菠菜取整棵去除根部；马铃薯取全薯。将其切 碎后用捣碎机将样品加工成浆状。混匀，装人洁净的盛样容器内，密封并标明标记。 6.2.2玉米、小麦、大豆、糙米和茶叶 取有代表性样品500g，玉米、小麦、大豆取整粒，用组织捣碎机粉碎，混匀，装人洁净的盛样容器内， 密封并标明标记。 6.2.3猪肉、鸡肉、鱼肉和鸡肝 取有代表性样品500g，猪肉去除骨，包括脂肪含量小于10%的脂肪组；鸡肉去除骨；鱼肉去除骨和 鳞；鸡肝取整付。用组织捣碎机（5.2)充分捣碎均匀，装入洁净的盛样容器内，密封并标明标记。 6.3试样保存 玉米、小麦、大豆、糙米和茶叶于0℃4℃下保存，梨、葡萄、菠菜、马铃薯、猪肉、鸡肉、鱼肉、鸡肝 和牛奶于-18℃下保存。 7测定步骤 7.1提取 7.1.1茶叶 称取1.0g试样（精确至0.01g）于50mL离心管中，加人4mL水，于涡旋混匀器（5.6）上混匀 2 SN/T5144—2019 2min，放置30min。加人2g氯化钠（4.5）和10mL乙腈（4.1），10000r/min均质1min，以 5000r/min离心5min，取上层清液转移至25mL容量瓶中，再用10mL乙（4.1)重复以上提取过 程，最后用5mL乙腈（4.1)再次重复提取，合并3次提取液于同一容量瓶中，并用乙睛（4.1)定容至刻 度。分取5mL提取液于40℃下氮气流吹至近干，待净化。 7.1.2玉米、小麦、大豆、糙米、菠菜、马铃薯、猪肉、鸡肉、鱼肉和鸡肝 称取2.0g试样（精确至0.01g)于50mL离心管中，对玉米、小麦、大豆、糙米加人4mL水，于混 匀器上混匀2min，放置30min。加人2g氯化钠（4.5）和10mL乙睛（4.1），10000r/min均质1min， 以5000r/min离心5min，取上层清液转移至25mL容量瓶中，再用10mL乙睛（4.1）重复以上提取 过程，最后用5mL乙睛（4.1)再次重复提取，合并3次提取液于同一容量瓶中，并用乙睛（4.1）定容至 刻度。分取5mL提取液于40℃下氮气流吹至近干，待净化。 7.1.3梨、葡萄和牛奶 称取5.0g试样（精确至0.01g）于50mL离心管中，加人2g氯化钠（4.5)和10mL乙腈（4.1)， 10000r/min均质1min，以5000r/min离心5min，取上层清液转移至25mL容量瓶中，再用10mL 乙睛（4.1）重复以上提取过程，最后用5mL乙腈（4.1）再次重复提取，合并3次提取液于同一容量瓶 中，并用乙睛（4.1)定容至刻度。分取5mL提取液于40℃下氮气流吹至近干，待净化。 7.2净化 7.2.1玉米、小麦、大豆、糙米、马铃薯、猪肉、鸡肉、鱼肉和牛奶 用2mL乙腈（4.1)溶解7.1步骤中所获得的浓缩液。在Cl8固相萃取柱（4.15)上端装人1cm高 的无水硫酸钠（4.6），先用5mL乙腈（4.1)预淋洗小柱，弃去淋洗液。然后将复溶后的样品提取液过 柱，并用6mL乙腈（4.1)洗脱，控制流速为0.5mL/min，收集所有流出液，在40℃下氮吹浓缩至近干。 用1.0mL乙睛（4.1)溶解残渣，过0.22μm滤膜供液相色谱-质谱/质谱仪测定。 7.2.2梨、葡萄、菠菜、鸡肝和茶叶 用2mL甲醇-二氯甲烷混合液（4.7)溶解7.1步骤中所获得的浓缩液。在石墨化炭黑固相萃取柱 （4.14)上端装人1cm高的无水硫酸钠（4.6），先用5mL甲醇-二氯甲烷混合液（4.7)预淋洗小柱，弃去 淋洗液。然后将复溶后的样品提取液过柱，并用6mL甲醇-二氯甲烷混合液（4.7)洗脱，控制流速为 0.5mL/min，收集所有流出液，在40℃下氮吹浓缩至近干。用1.0mL乙腈（4.1）溶解残渣，过 0.22μm滤膜供液相色谱-质谱/质谱仪测定。 7.3测定 7.3.1液相色谱参考条件 液相色谱参考条件如下： a) 色谱柱：C18柱，150mm×2.1mm（内径），粒度5μm，或相当者； b) 流动相：梯度洗脱程序见表1； c) 流速：200μL/min； d）柱温：30℃： e) i 进样量：10μL。 & SN/T 51442019 表1流动相梯度洗脱程序 时问/min 0.2%甲酸/% 乙睛/% 0. 00 06 10 1. 00 90 10 3. 00 40 60 5. 00 10 90 8. 00 10 06 8. 01 06 10 10. 00 90 10 7.3.2 质谱参数 参见附录A。 7.3.3液相色谱-质谱/质谱检测 本方法采用外标校准曲线法定量测定。为减少基质对定量测定的影响，定量用标准曲线应采用基 质标准工作溶液绘制的标准工作曲线，并且保证所测样品中酮脲磺草盼酯的响应值均在线性范围内。 在上述液相色谱-质谱条件下，酮脲磺草盼酯的保留时间约为6.15min，多反应监测质量色谱图参见附 录B中图B.1。 7.3.4液相色谱-质谱/质谱确证 按照上述色谱和质谱条件进行测定，试液中待测物色谱峰保留时间与基质标准工作溶液保留时间 与浓度接近的基质标准工作液中对应的离子对的相对丰度进行比较，偏差不超过表2规定的范围，则可 判定为样品中存在对应的待测物。 表2.定性确证时相对离子丰度的最大允许误差 >50 20~50 10~~20 ≤10 相对离子丰度/% ±20 ±25 ±30 ±50 允许的相对误差/% 7. 4 空白试验 除不加样品外，按上述相同条件和步骤进行。 7.5结果计算和表述 酮脲磺草盼酯残留量的测定结果按照式(1)计算，计算结果应扣除空白值。 1000 CXV (1) X: : X m 1000 式中： 试样中酮脲磺草盼酯残留量，单位为微克每