ICS65.120 SN B 46 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T50262017 饲料中T-2毒素的测定 酶联免疫吸附法 Determination of T-2 toxin in animal feeding stuffs -Enzyme-linkedimmunosorbentassay 2017-11-07发布 2018-06-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 SN/T5026—2017 前言 本标准按照GB/T1.1—2009及SN/T0001—1995《出口商品中农药、兽药残留量及生物毒素检验 方法标准编写的基本规定》给出的规则起草。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国江苏出人境检验检疫局。 本标准主要起草人：冯民、朱臻怡、魏云计、王小晋、何健、朱亮亮、罗晓琴。 I SN/T5026—2017 饲料中T-2毒素的测定 酶联免疫吸附法 1范围 本标准规定了伺料中T-2毒素的酶联免疫吸附测定方法。 本标准适用于出人境检验检疫工作中玉米、小麦、豆粕、棉柏等饲料原料及配合饲料和浓缩饲 料中T-2毒素的初步筛选测定。 2规范性引用文件 2 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本 文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T20195一2006动物饲料试样的制备 NY/T2071一2011饲料中黄曲霉毒素、玉米赤霉烯酮和T-2毒素的测定液相色谱-串联质谱法 方法提要 3 本方法的测定是基于竞争性酶联免疫反应，用甲醇/水振荡提取试样中的T-2毒素。处理后试样 中的T-2毒素与T-2毒素酶结合物竞争结合至包被在微孔板上的T-2毒素偶联抗原。通过洗涤除去微 孔上未结合的T-2毒素与T-2毒素酶结合物，然后加入反应底物，用酶标仪测定450nm波长下吸光 度，根据吸光度值得出试样中的T-2毒素含量。 4 试剂和材料 4.1 除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水符合GB/T6682二级水的规定 4.2 2T-2毒素酶联免疫试剂盒（参见附录A）。 4.3 甲醇。 4.4氯化钠。 4.5 甲醇-水提取液：用甲醇和水以1：1的比例配制成提取液备用。 4.6 10%氯化钠溶液：称取10.0g氯化钠，加人100mL水溶解混匀勾。 5 仪器和设备 5.1 酶标仪：配备450nm滤光片。 分析天平：感量0.01g。 5.2 5.3振荡器。 5.4离心机。 5.5培养箱。 5.6 单道微量移液器：20μL~200μL，100μL~1000μL。 1 SN/T5026—2017 7.3.6加人50μL底物液A液和50μL底物液B液至各微孔，放置于培养箱中，于（25±1）℃避光孵育5min。 7.3.7 孵育完毕后加入50μ终止液至各微孔，充分混匀，用酶标仪测定450nm波长处的吸光度值。 8 结果计算 8.1 计算百分吸光率 用所获得的标准溶液或试样提取液吸光度值与浓度为0μg/L的标准溶液吸光度值的比值进行计 算，见式（1)： W = ×100% .·(1) A. 式中： W—百分吸光率，%； A—标准溶液或试样提取液的平均吸光度值； A。—浓度为0μg/L的标准溶液的平均吸光度值。 8.2绘制标准曲线 以计算的百分吸光率（%）为纵坐标，标准溶液浓度的对数值（log1o）为横坐标绘制标准曲线。 每次实验均需重新绘制标准曲线。 8.3试样结果计算 将试样的百分吸光率代入标准曲线中，从标准曲线上读出试样所对应的浓度后，试样中T-2毒素 的含量按（2）式计算： 2V X=Cx xf m 式中： Y一一试样中T2毒素的含量，单位为微克每千克（μg/kg）； 从标准曲线上查得的试样中T-2毒素的浓度，单位为微克每升（μg/L）； -甲醇-水提取液体积，单位为毫升（mL）； 试样的称取量，单位为克（g）； 超出标准曲线浓度范围的样品的再次稀释倍数。 也可以用各种酶标仪的数据处理软件进行计算。 注：所得结果保留一位小数。 6 确证实验 如被测样品中T-2毒系含量大于限量要求，额采用GB/T28718一2012或NY/T2071一2011进行确证。 10 测定低限和回收率 10.1 测定低限 ( SN/T5026—2017 本方法的测定低限为10ug/kg。 10.2回收率 本标准方法的回收实验，以玉米、小麦、豆粕、棉粕等饲料原料及配合饲料和浓缩饲料为空白 样品基质，进行3个浓度水平的添加回收实验，3-个浓度包括了测定低限，测得T-2毒素的回收率范 围参见附录B。 4