SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T4891-2017 出口食品中螺虫乙酯残留量的测定 高效液相色谱和液相色谱-质谱/质谱法 Determination of Spirotetramat residue in foodstuffs for export-HPLC and LC-MS/MS method 2017-08-29发布 2018-04-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 刮涂层查真价 SN/T 4891—2017 前言 本标准按照GB/T1.12009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国重庆出人境检验检疫局、中华人民共和国万州出人境检验检 疫局。 本标准主要起草人：唐柏彬、夏明星、李光满、都存显、曹淑瑞、郑小玲、张雷、李贤良、王国民。 SN/T 48912017 (4.7)稀释成1.0μg/mL标准中间液。 4.12混合标准工作液：临用前取适量1.0uμg/mL标准中间液（4.11），用50%乙睛稀释至0.5ng/mL、 1.0ng/mL、2.0ng/mL、5.0ng/mL、10ng/mL、20ng/mL和50ng/mL标准工作液。 4.13微孔滤膜：尼龙66或相当者，0.22μm。 5仪器和设备 5.1 液相色谱-质谱/质谱仪：配电喷雾离子源（ESI）。 5.2 分析天平：感量为0.01g和0.1mg 5.3 均质器，20000r/min。 旋涡混合器。 5.5 离心机：10000r/min。 5.6 组织捣碎机。 5.7 氮吹浓缩仪。 5.8 超声波清洗器。 6试样的制备与保存 6.1荔枝、白菜、猪肉、猪肝、鸡蛋 取有代表性样品约500g，荔枝去皮去核，猪肉、猪肝去脂肪，鸡蛋去壳后，用高速匀浆机绞碎，装人 洁净容器，密闭并标明标记，于一18℃保存。 6.2 大豆、小麦 取整粒有代表性样品约500g，用高速粉碎机粉碎，装人洁净容器，密闭并标明标记，于阴凉干燥处 保存。 6.3葡萄干 取有代表性样品约500g，加人等量水，密封浸泡过夜，用高速匀浆机绞碎，装入洁净容器，密闭并标 明标记，于一18℃保存。 6.4牛奶、蜂蜜 取有代表性样品约500ml.，混合均匀，装入洁净容器，密闭并标明标记，于4℃保存。 6.5 猪脂肪 取有代表性样品约500g，加热熬制，弃去油渣，冷却后装人洁净容器，密闭并标明标记，于4℃保存。 在制样操作过程中应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。 7样品处理 7.1提取 7.1.1荔枝、白菜、葡萄干 准确称取10g（精确至0.01g，葡萄干样品相当于5g样品）样品.置于50ml.离心管中，加人 2 SN/T4891—2017 20mL乙腈（4.1），20000r/min均质提取3min，加入6.0g无水硫酸镁（4.5），1.0g无水乙酸钠（4.6）， 混匀：静置2min，7000r/min离心3min，将上清液转移至50mL比色管中。用20mL乙睛清洗均质 器刀头，将清洗液转移至残渣中，并将残渣捣碎，置于超声波中超声提取30min（每隔10min取出振摇 一次），7000r/min离心3min：合并提取液至50mL比色管中并用乙睛定容至刻度，混匀后待净化。 7.1.2大豆、小麦 准确称取5g（精确至0.01g）样品，置于50mL离心管中，加人8ml水，混匀：静置30min，接下来 按照7.1.1中“加人20mL乙睛....”的步骤进行。 7.1.3鸡蛋、牛奶 准确称取10g（精确至0.01g）样品，置于50mL离心管中，加人20mL乙睛，置于超声波中超声提 进行。 7.1.4蜂蜜 准确称取10g（精确至0.01g）样品，置于50mL离心管中，加人10ml.水，混匀，加入20mL乙， 涡旋混合提取2min，7000r/min离心3min，将上清液转移至50mL比色管中，样品再用20mL乙睛 涡旋提取一次，合并提取液至50mL比色管中并用乙睛定容至刻度，混匀后待净化。 7.1.5猪脂肪 准确称取10g（精确至0.01g）样品，置于50mL离心管中，加人10mL正已烷（4.2），混匀，加人 20mL乙腈，涡旋混合提取2min，7000r/min离心3min，将下层溶液转移至50mL比色管中，样品再 用20mI乙睛涡旋提取一次，合并提取液至50mL比色管申并用乙睛定容至刻度，混匀后待净化 7.2净化 涡旋混合30s，4000r/min离心3min，取下层溶液过微孔滤膜（4.13），用液相色谱-质谱/质谱仪测定。 7.3基质标准工作溶液的制备 渣”，加人1mL正已烷，涡旋混合30s，4000r/min离心3min，取下层溶液过微孔滤膜，用液相色谱-质 谱/质谱仪测定。 7.4测定 7.4.1液相色谱-质谱/质谱条件 液相色谱-质谱/质谱条件如下： a） 色谱柱：Cls柱，100mm（柱长）×2.1mm（内径），粒度1.7μm，或相当者； b) 流动相：乙腈（A）-2mmol/L乙酸铵（含0.1%甲酸）（4.8），梯度洗脱程序见表1； c) 流速：0.3mL/min; d）柱温：40℃； e） 进样量：5μL； 3 SN/T4891—2017 f) 离子源：电喷雾离子源； g) 扫描方式：正离子； h) 检测方式：多反应监测（MRM)； i) 质谱/质谱参考条件参见附录B。 表1 流动相梯度洗脱程序 梯度时间/min 流动相A/% 流动相B/% 0.0 10 90 0.5 10 90 2.0 80 20 4.0 80 20 4.5 10 90 5 10 90 注：柱前平衡2min。 7.4.2定性测定 按照7.4.1仪器条件测定基质标准工作溶液和样液，在相同实验条件下，样品中待测物质的保留时 间与标准溶液的保留时间偏差在2.5%之内：且样品中各组分定性离子的相对丰度与浓度接近的标准 工作溶液中对应的定性离子的相对丰度进行比较，偏差不超过表2规定的范围，则可判定为样品中存在 对应的待测物。 表2定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度/% >50 >20~50 10~20 允许的相对偏差/% ±20 ±25 ±30 ±50 7.4.3定量测定 在仪器最佳工作条件下，对基质标准工作溶和样液进行测定、外标法定量，样液中待分析物的响应 值均应在仪器测定的线性范围内，若超出线性范围应适当稀释，同时用相同稀释倍数的基质标准工作溶 进行定量。在上述色谱条件下.螺虫乙酯及其代谢物的色谱峰保留时间分别为BYI08330-enol- glucoside:2.50min,BYI08330-mono-hydroxy:2.93 min.BYI08330-cis-enol:3.05min,BY10-8330-cis- keto-hydroxy：3.12min，螺虫乙酯：3.43min。标准溶液多反应监测（MRM）色谱图参见附录C 中图C.1。 8 空白试验 除不加试样外，均按上述操作步骤进行。 9结果计算与表述 9.1用色谱数据处理机或按照式（1)计算样品中螺虫乙酯及其代谢物的残留量。