SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 4396—2015 出口食品中荧光增白剂85、 荧光增白剂71和荧光增白剂113的测定 液相色谱-质谱/质谱法 Determination of fluorescent whitening agent 85,fluorescent whitening agent 71 and fluorescent whitening agent 113 in foodstuffs for export-LC-MS/MS method 2015-12-04发布 2016-07-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T 4396-2015 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国深圳出人境检验检疫局、深圳市检验检疫科学研究院。 本标准主要起草人：张建莹、叶刚、肖锋、张恒、赵琼晖、罗耀、岳振峰。 SN/T4396—2015 出口食品中荧光增白剂85、 荧光增白剂71和荧光增白剂113的测定 液相色谱-质谱/质谱法 1范围 本标准规定了金针菇、平菇、鸡腿菇、大米、小麦粉、淀粉和牛奶等食品中荧光增白剂85（VBL）、荧 光增白剂71(CXT)及荧光增白剂113(BA)等3种荧光增白剂的液相色谱-质谱/质谱定量测定方法。 本标准适用于金针菇、平菇、鸡腿菇、大米、小麦粉、淀粉和牛奶等食品中荧光增白剂85（VBL）、荧 光增白剂71(CXT)及荧光增白剂113(BA)的定量测定和确证。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3方法提要 采用60%甲醇-水溶液，75℃水浴振荡提取试样中的荧光增白剂，经弱阴离子固相萃取柱净化， 2.0%氨水-甲醇溶液洗脱，液相色谱-质谱/质谱法检测，内标法定量。 4试剂和材料 除另有说明外，所用试剂均为分析纯，试验用水采用GB/T6682规定的一级水。 4.1甲醇：高效液相色谱纯。 4.2氨水：浓度为25%~28%。 4.30.1%氨水溶液：吸取0.100mL氨水（4.2），加入100mL去离子水中，混匀。 4.460%甲醇-水溶液：吸取60mL甲醇（4.1），加人40mL去离子水中，混勾。 4.52.0%氨水-甲醇溶液：吸取2.0mL氨水，加人98.0mL甲醇中，混匀。 4.6标准物质：荧光增白剂85（VBL）、荧光增白剂71(CXT)和荧光增白剂113（BA），4，4'-双（4-氨基 1-萘基偶氮）-2，2'-芪二磺酸（4，4'-bis[4-amino-1-naphthylazo]-2，2'-stilbenesulfonicacid，内标物）；纯 度≥97%（荧光增白剂及内标物的基本信息参见附录A中的表A.1）。 4.7标准储备溶液：准确称取适量的各种荧光增白剂标准物质（4.6），用0.1%氨水溶液（4.3）配制成浓 度为100mg/L的标准储备溶液，避光0℃～4℃保存，可使用3个月。 4.8内标液：称取适量的4，4'-双（4-氨基-1-萘基偶氮)-2,2'-芪二磺酸，用0.1%氨水溶液配制成浓度为 100mg/L的储备溶液，避光0℃～4℃保存，可使用3个月；用60%甲醇-水溶液（4.4）稀释为 10.0mg/L的内标工作液，避光0℃～4℃保存，可使用1个月。 4.9混合标准工作溶液：吸取每种适量标准储备溶液（4.7），用60%甲醇-水溶液稀释成10.0mg/L和 1 SN/T4396—2015 1.00mg/L的混合标准工作溶液，避光0℃～4℃保存，可使用1个月。 4.10混合标准系列溶液：吸取适量的混合标准工作溶液（4.9）和内标工作液（4.8），用空白样品基质溶 液配成浓度为0.0100mg/L、0.0250mg/L、0.0500mg/L、0.100mg/L、0.250mg/L、0.500mg/L的基 质混合标准工作溶液（内标液浓度为0.100mg/L）。当天配制。 4.11弱阴离子固相萃取柱：60mg，3mL。使用前3mL甲醇和3mL水活化，保持柱体湿润。 5仪器和设备 5.1 液相色谱-质谱/质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI）。 5.2 固相萃取装置。 5.3 氮吹浓缩仪。 5.4 涡旋混匀器。 5.5 玻璃离心管：15mL，具塞，带刻度 5.6 离心机：转速可达2500r/min。 6 试样制备与保存 在制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化 6.1金针菇、平菇、鸡腿菇 取代表性样品约500g，将其可食用部分（不可用水洗）切碎后，用捣碎机将样品加工成浆状，混匀。 试样均分为两份，装人洁净容器，密封，并标明标记。 18℃以下冷冻存放。 6.2大米、小麦粉、淀粉 取代表性样品约500g，用粉碎机充分粉碎，混勾，试样均分为两份，装入洁净容器，密封，并标明标 记。常温下保存。 6.3牛奶 从所取全部样品中取出有代表性样品约500名，装人洁净容器中，密封，并标明标记，于4℃冷藏 存放。 7分析步骤 7.1试样提取 7.1.1金针菇、平菇、鸡腿菇 称取约2g（精确至0.01g)样品于15mL具塞玻璃离心管中，加入内标液（10.0mg/L)100uL，加 人10mL60%甲醇-水溶液，涡旋3min，75℃水浴振荡提取1h，2500r/min离心5min。 7.1.2大米、小麦粉、淀粉 称取约1g（精确至0.01g）样品于15mL具塞玻璃离心管中，加人内标液（10.0mg/L）100μL，加 人10mL60%甲醇-水溶液，涡旋3min，75℃水浴振荡提取1h，2500r/min离心5min。 2 SN/T4396-2015 7.1.3牛奶 称取约1g（精确至0.01g)样品于15mL具塞玻璃离心管中，加人内标液（10.0mg/L)100μL，加 人9.0mL60%甲醇-水溶液，涡旋3min，75℃水浴振荡提取1h，2500r/min离心5min。 7.2净化 吸取1.00mL上清液于加人活化处理过的弱阴离子固相萃取柱（4.11）中，待样液以低于1.0mL/ min的流速全部通过固相萃取柱，再分别用3mL去离子水和3mL甲醇淋洗以1mL/min的流速淋 洗，最后用10mL2.0%氨水-甲醇溶液（4.5)洗脱，收集洗脱液于45℃水浴中氮吹至近干，用60%甲醇- 水溶液定容至1.00mL，涡旋混匀lmin上机测定。 7.3测定 7.3.1 液相色谱条件 7.3.1.1 色谱柱：WatersBEHCs1，2.1mmX100mm，1.7μm，或相当者。 7.3.1.2 柱温：30℃。 7.3.1.3 进样量：5.00μL。 7.3.1.4 流动相、流速及梯度洗脱条件见表1。 表1流动相、流速及梯度洗脱条件 时间 流速 5mmol/L乙酸铵水溶液（pH9.0） 由 mL/min min % 0 0.30 80 20 1.00 0.30 80 20 4.00 0.30 95 5.00 0.30 95 5.10 0.30 20 9.00 0.30 20 7.3.2 质谱条件 7.3.2.1 离子化模式：电喷雾离子源（ESI），负离子扫描。 7.3.2.2 质谱扫描方式：多反应监测（MRM）。 7.3.2.3分辨率：单位分辨率。 其他参考质谱条件参见附录B。 7.3.3 液相色谱-质谱/质谱测定 定性测定 7.3.3.1 在相同实验条件下，样品中待测物质的保留时间，与基质标准溶液的保留时间偏差在士2.5%之内； 1）非商业性声明：此处列出色谱柱型号仅是为了提供参考，不涉及商业目的，鼓励标准使用者尝试采用不同厂家 或规格的色谱柱。 3