SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T4393-2015 进出口化妆品中喹诺酮药物测定 液相色谱-串联质谱法 Determination of quinolones in cosmetics for import and export- LC-MS/MSmethod 2015-12-04发布 2016-07-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 除层查直伪 SN/T43932015 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国深圳出入境检验检疫局、深圳市检验检疫科学研究院。 本标准主要起草人：林黎、张毅、涂小珂、谢丽琪、岳振峰、康海宁、王宏菊、罗耀。 SN/T4393—2015 进出口化妆品中喹诺酮药物测定 液相色谱-串联质谱法 1范围 本标准规定了化妆品中25种喔诺酮药物残留量的液相色谱-串联质谱测定方法， 本标准适用于化妆水类、润肤膏类、面霜类和润肤乳液类化妆品中喹诺酮药物的定量测定和确证。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3方法提要 采用酸性乙腊超声提取试样中的喹诺酮药物，含脂类样品以正已烷脱脂，提取液经浓缩、定容后，液 相色谱-串联质谱仪检测和确证，外标法定量。 4试剂和材料 除另有说明外，所用试剂均为优级纯，实验室用水采用GB/T6682规定的一级水。 4.1 乙腈：色谱纯。 4.2 甲醇：色谱纯。 4.3 甲酸：色谱纯。 4.4 乙酸：色谱纯。 4.5 正已烷：色谱纯。 4.6氯化钠：含量≥99.5%。 4.7 0.2%甲酸的乙腈溶液：准确吸取2mL甲酸（4.3），用乙腈定容至1L，混匀。 4.80.1%甲酸溶液：准确吸取1mL甲酸，用水定容至1L，混匀。 4.910%乙腈的甲酸-水溶液（1十9，体积比）：量取10mL乙睛（4.1）和90mL0.1%甲酸溶液（4.8）， 混匀。 4.10标准物质：喹诺酮药物标准品（具体信息参见附录A），纯度均大于98%。 4.11标准储备液的配制：分别准确称取经纯度折算后的适量标准物质（精确到0.01g），用甲醇（4.2)稀 释，难溶于甲醇的标准品，加少量甲酸（4.3）溶解，再用甲醇定容至刻度，配制成浓度为2.0g/L的标准储 备溶液。于一18℃以下避光保存，有效期12个月。 4.12混合标准溶液的配制：准确吸取标准储备液0.5mL于10mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度（分 两组配制），此标准溶液浓度为100.0mg/L，于一18℃以下冰箱内储存，有效期6个月。 4.13微孔滤膜：0.22μm，有机相型。 1 SN/T4393—2015 5仪器和设备 5.1 液相色谱-串联质谱联用仪：配有电喷雾离子源（ESI）。 5.2 吹氮浓缩仪。 5.3 超声波水浴。 5.4 涡旋混合器。 5.5 低温离心机：可制冷至4℃，9500r/min。 5.6 均质器。 5.7 分析天平：感量0.1mg和0.001g。 聚丙烯离心管：15ml.和50mL，具塞。 5.9 移液枪，10μl～1000μ，10μ～100μ，1000μ～5000μ。 6 测定步骤 6.1提取 6.1.1化妆水类 乙睛溶液（4.7），均质3min，超声提取15min，9500r/min离心5min（4℃左右），取上清液。残渣再加 入8mL0.2%甲酸的乙睛，重复上述提取过程一次，9500r/min离心5min后合并上清液，用0.2%甲 酸的乙腈定容至20ml.，混匀。准确吸取1mL上述提取液，40℃吹氮近干，用乙腈一0.1%甲酸溶液 （4.9）定容至5ml，过0.22μm有机滤膜，液相色谱-质谱仪测定。 6.1.2润肤霜、膏、乳液类 称取1.0g均匀样品（精确至0.01g），置于50mL具塞离心管（5.8）中，加人2g氯化钠（4.6），准确 加入8ml0.2%甲酸的乙溶液（4.7），均质3min，超声提取15min，9500r/min离心5min（4℃左 右），取上清液。残渣再加人8mL0.2%甲酸的乙睛，重复上述提取过程一次，9500r/min离心5min 后合并上清液，用0.2%甲酸的乙腈定容至20mL，混匀。准确吸取1mL上述提取液，40℃吹氮近干， 用乙腈-0.1%甲酸溶液（4.9）定容至5mL，加人5mL正已烷溶液（4.5），混匀，9500r/min离心5min， 弃去正已烷层，下层液过0.22μm有机滤膜，液相色谱-质谱仪测定。 6.2混合基质标准工作溶液的制备 6.2.1空白试验 6.2.2基质工作曲线的配制 用基质空白（6.2.1)来配制基质标准工作曲线。 6.3测定 6.3.1 液相色谱参考条件 a) 色谱柱：Cls色谱柱，150mm×2.1mm（内径），2.7um，或相当者； 2 SN/T4393—2015 b） 柱温：40℃； c) 进样量：10μL； (P 流动相、流速及梯度洗脱条件见表1。 表1 流动相、流速及梯度洗脱条件 时间 流速 水（含0.1%甲酸） 乙腈（含0.1%甲酸） min μL/min % % 0 250 87 13 6.0 250 10 06 9.0 250 10 06 9.1 250 87 13 15.0 250 87 13 6.3.2 质谱参考条件 a) 离子化模式：电喷雾离子源（ESI)，ESI+模式； b） 扫描方式：多反应监测（MRM)； c) 分辨率：单位分辨率； （P 其他参考条件参见附录B。 6.3.3标准曲线的绘制 取空白样品按照6.1处理，用所得的样品溶液将混合标准溶液（4.12)稀释得到的浓度为0μg/L、 5μg/L、10μg/L、20μg/L、50μg/L、100μg/L、200μg/L的标准工作液，按浓度由低到高的顺序进样检 测，以定量离子峰面积-浓度作图，得到标准曲线。 6.4定性 在相同实验条件下，样品中待测物质的保留时间，与基质标准溶液的保留时间偏差在土2.5%之内； 每种化合物的质谱定性离子至少应包括一个母离子和两个子离子，且样品中各组分定性离子的相对丰 度与浓度接近的基质混合标准工作溶液中对应的定性离子的相对丰度进行比较，偏差不超过表2规定 的范围，则可判定为样品中存在对应的待测物。 表2定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度 >50% >20%~50% >10%~20% ≤10% 允许的最大偏差 ±20% ±25% ±30% ±50% 6.5 定量 待测样液中喹诺酮药物的响应值应在标准曲线线性范围内，超过线性范围则应稀释后再进样分析。 喹诺酮药物标准溶液的多反应监测（MRM)色谱图参见附录C。 3