SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T4378—2015 化肥中三聚氰胺含量的测定 高效液相色谱法和离子色谱法 Determinationofmelamineinfertilizer- High performance liquid chromatography and ion chromatography 2015-12-04发布 2016-07-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T4378—2015 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国上海出人境检验检疫局 本标准主要起草人：孙明星、邱丰、蔡婧、闵红、王文青、屠虹、赵雨薇、张继东、沈国清 I SN/T4378—2015 化肥中三聚氰胺含量的测定 高效液相色谱法和离子色谱法 1范围 本标准规定了化肥中三聚氰胺含量的两种测定方法，即第一法高效液相色谱法和第二法离子色谱 法。其中第一法高效液相色谱法为仲裁方法。 谱法测定含量范围为0.5mg/kg~3000mg/kg，离子色谱法测定含量范围为5.0mg/kg~10°mg/kg。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3方法提要 试样经氨水甲醇水溶液提取。提取液振荡、离心后，取上清液氮气吹干，重新溶解定容，采用高效液 相色谱进行检测，外标法定量。 试样经三氯乙酸溶液提取，提取液振荡、离心，取上清液经阳离子交换固相萃取柱净化，洗脱液经氮 气吹干后溶解定容，注人配有电导检测器的离子色谱仪检测，外标法定量。 注：试样中三聚氰胺质量分数含量在5.0mg/kg~3000mg/kg范围时，高效液相色谱法和离子色谱法都可以用于 测定。 4试剂和材料 除非另有规定，均使用分析纯试剂，实验用水为GB/T6682规定的一级水 4.1 甲醇：色谱纯。 4.2 乙腈：色谱纯。 4.3 庚烷磺酸钠：色谱纯。 4.4 甲基磺酸：色谱纯。 柠檬酸。 4.5 4.6 氨水：含量为25%~28%。 4.7 三氯乙酸。 4.8 三聚氰胺标准品，纯度大于99.9%，CAS号：108-78-1。 4.9 三氯乙酸溶液（1%）：称取10g三氯乙酸（4.7）于1L容量瓶中，用水溶解并定容至刻度，混匀后 备用。 4.10 氨水甲醇水溶液：量取20mL氨水（4.6），70mL甲醇（4.1)和10mL纯水，混匀。使用前配制。 4.11 液相色谱流动相：称取2.02g庚烷磺酸钠（4.3）和2.10g柠檬酸（4.5）于1L容量瓶中，加人 1 SN/T4378—2015 150mL乙腈（4.2），用水溶解并稀释至刻度。 4.12离子色谱淋洗液：称取0.29g甲基磺酸（4.4)于1L容量瓶中，加入150mL乙腈（4.2），用水溶解 并稀释至刻度 4.13标准储备液：称取1g（精确到0.1mg）三聚氰胺标准品（4.8），用纯水溶解定容于1L容量瓶中， 配制成浓度为1000mg/L的标准储备溶液，于4℃冰箱内贮存，有效期3个月。 4.14标准中间液：吸取标准储备液（4.13)10mL，于100mL容量瓶内，用纯水定容至100mL，该溶液 三聚氰胺浓度为100mg/L。 5高效液相色谱标准工作溶液：用移液管分别移取标准中间液（4.14)1.0mL、5.0mL、10mL、 4.15 25mL、50mL于5个100mL容量瓶内，用液相色谱流动相（4.11)定容至100mL，该溶液三聚氰胺浓 4.16离子色谱标准工作溶液：由三聚氰胺标准中间液（4.14)）和标准储备溶液（4.13）用离子色谱淋洗液 （4.12）稀释至0.5mg/L、1.0mg /L.5.0mg/L10mg/L、20mg/L.50mg/L、100mg/L、250mg/L一系 列浓度的标准工作溶液。于4℃冰箱内贮存，有效期1周。 4.17有机相滤膜：0.45μm。 4.18阳离子交换固相萃取柱：混合型阳离子交换固相萃取柱，基质为苯磺酸化的聚苯乙烯-二乙烯基 苯高聚物，60mg，3mL，或相当者 仪器和设备 5.1 高效液相色谱仪：配有紫外检测器 5.2 离子色谱仪：配有数字型电导检测器 5.3 循环往复振荡器：转速不低于109 /min。 5.4 超声波清洗器，功率≥100 5.5 离心机：转速不低于5000r/min。 5.6 固相萃取装置。 5.7 具塞试管：可与固相萃取装置以及氮吹仪配套使用。 5.8 分析天平：感量0.0001g。 5.9 氮气吹干仪。 6 试样制备与保存 取化肥代表性试样约500g，充分捣碎过筛，装人样品瓶中，并标明标记，置于干燥器中。 7测定步骤 7.1 第一法：高效液相色谱法 7.1.1提取 称取制备好的化肥试样1g（精确至0.01g），置于100mL锥形瓶中，加人25mL氨水甲醇水溶液 （4.10），用循环往复振荡器（5.3）以100r/min高速振荡30min，然后在离心机（5.5）上于5000r/min离 心5min。将上清液移入50mL容量瓶中。于残留物中再次加人25mL氨水甲醇水溶液（4.10），重复 上述振荡离心操作，将上清液移入上述容量瓶中，用液相色谱流动相（4.11)定容至50mL(V。）。 2 学兔兔wwwbzfxWcon SN/T4378—2015 7.1.2净化 取10mL(V,）提取液（7.1.1)于70℃下氮气吹干，准确加人5mL(V，）液相色谱流动相（4.11)充分 溶解，过0.45um有机相滤膜（4.17），用高效液相色谱仪测定。 7.1.3 测定 7.1.3.1 高效液相色谱参考条件 参考条件如下： a) 色谱柱：Cis柱（5μm，250mmX4.6mm）或相当者 b) 流动相：0.01mol/L庚烷磺酸钠+0.01mol/L柠檬酸缓冲盐 +15%（体积比）乙睛（4.11）。 c) 流速：0.8mL/min。 d) 进样量：10μL。 e) 柱温：常温。 f) 波长：240nm。 7.1.3.2 定量测定 根据试样中被测物的含量，以保留时间进行定性，选取响应值相近的标准工作液进行分析。以目标 化合物的峰面积为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准工作曲线，外标法定量。标准工作溶液和样液中待测 物的响应值均应在仪器线性响应范围内，如果含量超过标准曲线范围， ，应用液相色谱流动相（4.11）稀释 到适当浓度后分析。在上述色谱条件下，三聚氰胺标准溶液的液相色谱图参见附录A中图A.1。 7.1.3.3 空白试验 除不加试样外，均按上述操作步骤进行 厅。 7.1.4 结果计算和表述 试样中三聚氰胺的含量按式（1）计算，计算结果需扣除空白值。 式中 X, 试样中三聚氰胺含量，单位为毫克每千克（mg/kg） c; 从标准曲线上得到的样液中三聚氰胺的浓度，单位为毫克每升（mg/L）； 称取的试样质量，单位为克（g）； m V2 净化后加人液相色谱定溶液（4.11)的体积，单位为毫升（mL)； K 样品前处理过程中的稀释倍数，按式（2)计算。 V. K = ...........(2 ) V 式中： V。- 样品提取过程（7.1.1)中加人提取液的总体积，单位为毫升（mL)； V. 样品净化过程（7.1.2）中吸取的提取液的体积，单位为毫升（mL）。 计算结果以两次平行试验结果的算术平均值表示，保留3位有效数字。 7.1.5 定量限 本方法对化肥中三聚氰胺的定量限为0.5mg/kg。 3 学兔兔wwbzfxWcom SN/T43782015 7.1.6 精密度 7.1.6.1 重复性 同一操作者用同一仪器在相同的实验条件下对同一个样品进行测定，获得的两个连续测定结果之 差，不大于这两个测定值的算术平均值的10%。 7.1.6.2 再现性 不同操作者，不同实验室对同一样品，按正常的实验方法进行测定，获得的两个连续测定结果之差， 不大于这两个测定值的算术平均值的15%。 7.2第二法：离子色谱法 7.2.1提取 称取制备好的化肥试样1g（精确至0.01g），准确加入50mL（V3）三氯乙酸溶液（4.9）。超声 5min，用循环往复振荡器（5.3）以100r/min高速振荡30min，然后在离心机（5.5）上于5000r/min离 心5min。 7.2.2净化 依次用3mL甲醇，3mL水活化阳离子交换固相萃取柱（4.18），准确移取6mL（V.）提取液（7.2.1） 过柱，控制过柱速度在1mL/min以内。依次用3mL水和3mL甲醇洗涤固相萃取柱，最后用氨水甲 醇水溶液（4.10)6mL洗脱，洗脱液收集于具塞试管（5.7）中。将洗脱液置于70℃的氮吹仪（5.9）中吹 干，准确加人5mL（V，）离子色谱淋洗液（4.12），过0.45um有机相滤膜（4.17），用离子色谱仪测定。准 确移取离心液中三聚氰胺的离心液体积，可以根据三聚氰胺的浓度高低进行调整，应保证移取的离心液 中三聚氰胺的量不超过1mg。 7.2.3测定 7.2.3.1 离子色谱参考条件 参考条件为： a） 色谱柱：分离柱为IonPacRSCSIseparator(4X250mm）或相当者。保护柱为lonPacRSCS) Guard（4X450mm）或相当者。 淋洗液：3mmol/L甲基磺酸+十15%（体积比）乙腈水溶液（4.11）。 c) 流速：0.9mL/min。 (P 进样量：20μL。 e) 柱温：30℃。 f) 氮气：纯度大于99.99%