SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T4351—2015 水生动物及其产品中乙烯雌酚、 甲孕酮液相芯片检验技术规范 DetectionprotocolofDESandMPAin aquatic animals and products with liquichip 2015-12-04发布 2016-07-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 中华人民共和国出人境检验检疫 行业标准 水生动物及其产品中乙烯雌酚、 甲孕酮液相芯片检验技术规范 SN/T4351—2015 * 中国标准出版社出版 北京市朝阳区和平里西街甲2号（100029) 北京市西城区三里河北街16号（100045) 总编室：(010)68533533 网址www.spc.net.cn 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷 开本880×12301/16 印张0.75 字数18千字 2016年8月第一版 反2016年8月第一次印刷 印数1—1100 书号：155066·2-30373 定价16.00元 SN/T 4351—2015 前 言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国上海出入境检验检疫局、上海大学。 本标准主要起草人：王艳、陈沁、任硕、李小林、林颖、李健、陈政晓、 SN/T4351—2015 水生动物及其产品中乙烯雌酚 甲孕酮液相芯片检验技术规范 1范围 本标准规定了水生动物及其产品中乙烯雌酚、甲孕酮的液相芯片检测方法，包括样品处理、液相芯 片检测方法、结果判定。 本标准适用于水生动物及其产品中乙烯雌酚、甲孕酮的快速筛选 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3缩略语 下列缩略语适用于本文件。 MPA 甲孕酮（MedroxyprogesteroneAcetate) DES 乙烯雌酚（Diethylstilbestrol) SAPE 藻红蛋白标记的链霉亲和素 (Streptayidin R-phycoerythrin conjugate) MFI 平均荧光强度（Medianfluorensceneeintensity） 仪器设备 4.1 液相芯片系统（Luminex100/200或等效设备） 4.2 微孔滤板抽滤器。 真空气泵。 4.3 4.4 倒置显微镜。 4.5 纯水仪。 4.6 离心机。 4.7 37℃摇床。 4.8 电子天平：感量0.01g。 4.9 微量移液器。 4.10 旋涡振荡仪。 4.11 血球计数板。 1）由指定单位提供，给出这一信息是为了方便本文件的使用者，并不表示对该产品的认可。如果其他等效产品具 有相同的效果，则可使用这些等效产品。 1 SN/T4351—2015 5试验原理 本方法基于免疫学抗原抗体特异性反应原理。标准品或样品中的抗原能与荧光微球上偶联的抗原 竞争性地结合定量的生物素化抗体，加人SAPE后，通过液相芯片系统读数MFI，MFI与样品中的抗原 浓度成反比，从而达到定量测定样品中MPA和DES的目的。 6主要试剂和耗材 6.1 乙酸乙酯。 6.2 乙腈。 正已烷。 6.3 6.4 磷酸二氢钠。 6.5 磷酸氢二钠。 6.6 氯化钠。 6.7 氢氧化钠。 6.8 氯化钙。 6.9 牛血清白蛋白。 6.10 叠氮化钠。 6.11 吐温-20。 6.12 生物素化标记试剂盒：BiotinLabelingKit-SH(Pierce)或等效试剂盒。 6.13 微球交联试剂盒：AmineCouplingKit（Bio-Rad）或等效试剂盒2。 6.14 DES标准品（纯度99%）。 6.15 MPA标准品（纯度为98.8%）。 6.16 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐(EDC)。 6.17 N-羟基硫代琥珀酰亚胺（Sulfo-NHS)。 6.18 SAPE(1 mg/mL)。 6.19 灭菌双蒸水，本标准所用水应符合GB/T6682中二级水的规格；其他试剂除特殊规定外，均指分 析纯试剂。 6.20 羧基化编码微球。 6.21 96孔滤板。 6.22 离心管：50mL。 6.23 消毒液：10%的次氯酸钠溶液。 6.24 其他所需缓冲溶液配制及要求见附录A。 抗原偶联编码微球和抗体生物素化 7.1MPA偶联微球[以AmineCouplingKit(Bio-Rad)为例，具体步骤参见附录B]，包被好的微球于 0℃～4℃避光保存备用，有效期1年。 7.2DES偶联微球[以AmineCouplingKit(Bio-Rad)为例，具体步骤参见附录B]，包被好的微球于 0℃～4℃避光保存备用，有效期1年。 2）由指定单位提供，给出这一信息是为了方便本文件的使用者，并不表示对该产品的认可。如果其他等效产品具 有相同的效果，则可使用这些等效产品。 2