SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T4318—2015 出口食品中香豆素、6-甲基香豆素、二氢 香豆素、7-甲氧基香豆素、醋硝香豆素、 7-乙氧基-4-甲基香豆素含量的测定 液相色谱-质谱/质谱法 Determination of coumarin, 6-methylcoumarin,dihydrocoumarin, 7-methoxycoumarin,acenocoumarol,7-ethoxy-4-methylcoumarin residues in foods for export-LC/MS/MS method 2015-09-02发布 2016-04-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 中华人民共和国出人境检验检疫 行业标准 出口食品中香豆素、6-甲基香豆素、二氢 香豆素、7-甲氧基香豆素、醋硝香豆素 7-乙氧基-4-甲基香豆素含量的测定 液相色谱-质谱/质谱法 SN/T4318—2015 * 中国标准出版社出版 北京市朝阳区和平里西街甲2号（100029） 北京市西城区三里河北街16号（100045) 总编室：(010)68533533 网址www.spc.net.cn 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷 * 开本880×12301/16 印张2.25 字数62千字 2016年8月第一版 2016年8月第一次印刷 印数1—1100 书号：155066·2-29879 定价33.00元 SN/T4318—2015 前言 本标准按照GB/T1.1-2009、GB/T20001.4—2001和SN/T0001—1995给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国湖北出人境检验检疫局。 本标准主要起草人：赵晓亚、付晓芳、张剑锋、王鹏、李晶、叶诚、尚吟竹、胡小钟。 SN/T 43182015 出口食品中香豆素、6-甲基香豆素、二氢 香豆素、7-甲氧基香豆素、醋硝香豆素、 7-乙氧基-4-甲基香豆素含量的测定 液相色谱-质谱/质谱法 1范围 本标准规定了出口食品中香豆素、6-甲基香豆素、二氢香豆素、7-甲氧基香豆素、醋硝香豆素和7-乙 氧基-4-甲基香豆素的液相色谱-质谱/质谱测定方法 本标准适用于出口饼干、饮料（包括含酒精饮料）冰淇淋和口香糖中香豆素、6-甲基香豆素、二氢香 2方法提要 饼干、饮料（包括含酒精饮料）、冰淇淋样品中的香豆素、6-甲基香豆素二氢香豆素、7-甲氧基香豆 氢香豆素、7-甲氧基香豆素、醋硝香豆素和7-乙氧基-4-甲基香豆素用甲醇和水提取；固相萃取小柱净化 后，用液相色谱串联质谱法进行测定，外标法定量。 3试剂和材料 除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为超纯水。 3.1甲醇：色谱纯。 3.2无水乙醇。 3.3乙腈：色谱纯。 3.4无水硫酸钠。 3.5甲醇-水（1十9，体积比）：10mL甲醇，用水定容至100mL。 3.6甲醇-水（1十1，体积比）：50mL甲醇，用水定容至100mL。 3.70.005mol/L醋酸铵溶液：称取0.3854g醋酸铵，以水溶解定容至1000mL。 3.80.1%甲酸的0.005moL/L醋酸铵溶液：取0.1mL甲酸，以0.005moL/L醋酸铵溶液定容 至100mL。 3.9香豆素、6-甲基香豆素、二氢香豆素、7-甲氧基香豆素、醋硝香豆素和7-乙氧基-4-甲基香豆素标准 物质：纯度大于或等于95%，其他信息参见附录A。 准储备液，保存于一18℃冰箱内。 3.11中间标准溶液：移取1.0mL标准储备液于10mL容量瓶中，用甲醇定容，配成100.0μg/mL，保 存于4℃冰箱内。 3.12基质标准工作液：临用前根据需要，移取适量的中间标准溶液，用空白基质溶液稀释至适当浓度。 3.13HLB固相萃取柱（3mL，60mg）或相当者：使用前用5mL甲醇、5mL水淋洗活化。 1 SN/T4318—2015 3.14 微孔滤膜：0.22μm，有机相型。 4仪器和设备 4.1 高效液相色谱-质谱/质谱仪，配有电喷雾离子源（ESI）。 4.2 振荡器。 4.3 离心机，8000r/min。 4.4 快速溶剂浓缩仪。 4.5 分析天平，感量为0.1mg、0.01g。 4.6 涡旋混合器。 5试样制备和保存 取有代表性样品50g，混合混匀，分成2份，分别装入洁净容器内，密封并标识，将试样存放于4℃ 冰箱内。 在制样过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。 6测定步骤 6.1提取 6.1.1饼干、饮料（包括含酒精饮料）、冰淇淋样品的提取 准确称取样品1.00g于50mL离心管内，加人5g无水硫酸钠和10mL无水乙醇，振荡10min，在 8000r/min下离心5min，取上层于另一50mL离心管中，残渣再分别加入10mL无水乙醇重复提取 2次，合并上清液，45℃快速溶剂浓缩仪减压浓缩近干，用1mL甲醇溶解残渣，再加8mL水涡旋混匀， 8000r/min离心5min，上清液用水定容至10mL，待净化。 6.1.2口香糖样品的提取 准确称取样品0.5g（精确至0.01g）于15mL离心管中，加入2mL甲醇提取，涡旋提取2min， 10000r/min离心5min，上清液转移至另一15mL离心管中，残渣分别用2mL甲醇-水（1十1，体积 比）重复提取2次，合并提取液。提取液经氮气吹干浓缩近2mL，加人7mL水，涡旋混匀，8000r/min 离心5min，上清液用水定容至25mL，待净化。 6.2净化 将上述溶液取5mL过预淋洗好的HLB固相萃取柱，用5mL甲醇-水（1十9，体积比）淋洗柱子。 待淋洗液全部流出后，减压抽干3min。用8mL甲醇洗脱，接取全部洗脱液。在40℃下，洗脱液用氮 气吹干，再以2.5mL甲醇溶解残渣，混匀，过微孔滤膜，滤液供液相色谱串联质谱测定。 6.3测定 6.3.1 液相色谱条件 液相色谱条件如下： a) 色谱柱：Cl8柱，150mmX2.1mm（内径），粒径3.5μm，或相当者； b) 流动相1[适用于饼干、饮料（包括含酒精饮料）、冰淇淋中香豆素类化合物测定]：含0.1%甲酸 N SN/T4318—2015 的0.005moL/L醋酸铵溶液-乙腈-甲醇（20十10十70，体积比）；流动相2（适用于口香糖中香 豆素类化合物测定）：含0.1%甲酸的0.005mo1/L醋酸铵溶液-甲醇-乙腈（48十50十2，体积 比)； c) 流速：0.2mL/min； (P 进样量：5μL； e） 柱温：35℃。 6.3.2 质谱条件 质谱条件如下： a）离子源：电喷雾离子源； b) 扫描方式：正离子扫描； c) 检测方式：多反应监测（MRM）； d）其他参考质谱条件参见附录B。 6.3.3 3定量测定 在仪器最佳工作条件下，对基质标准溶液进样。用基质标准工作曲线按外标法定量，基质标准工作 溶液和样品溶液中被测物的响应值均应在仪器检测线性响应范围内。根据试样中被测样液的含量情 况，选取响应值相近的基质标准工作液进行色谱分析。对基质标准溶液和样液等体积参插进样测定。 在上述色谱条件下香豆素标准溶液多反应监测（MRM)色谱图参见附录C。 6.3.4定性测定 每种化合物的质谱定性离子至少应包括一个母离子和两个子离子，且样品中各组分定性离子的相对丰 度与浓度接近的基质混合标准工作溶液中对应的定性离子的相对丰度进行比较，偏差不超过表1规定 的范围，则可判定为样品中存在对应的待测物。 表1定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度/% >50 >20~50 >10~20 ≤10 允许的最大偏差/% ±20 ±25 ±30 ±50 6.4 空白试验 除不加试样外，均按上述操作步骤进行。 结果计算和表述 7 用色谱数据处理软件或按式（1)计算试样中被测物含量，计算结果需将空白值扣除： A;Xc;×V×1000 X; = .(1) AXm;X1000 式中： X；一一试样中被测物含量，单位为微克每千克（μg/kg)； A；一样液中被测物的峰面积； Ci- 标准工作溶液中被测物的浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）；