SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T4171-2015 短颈剑线虫检疫鉴定方法 Detection and identification of Xiphinema brevicollum Lordello & Da Costa 2015-02-09发布 2015-09-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T 4171—2015 前言 本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国珠海出入境检验检疫局。 本标准主要起草人：迟远丽、廖力、王岚、徐淼锋、权永兵、黄永辉、张卫东、陈其文、 一 SN/T4171—2015 短颈剑线虫检疫鉴定方法 1范围 本标准规定了出人境植物检疫中短颈剑线虫的检疫鉴定方法。 本标准适用于出人境植物、花卉、苗木、盆景及其繁殖材料、土壤及栽培介质中短颈剑线虫的检疫 鉴定。 规范性引用文件 2 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T28091一2011剑线虫属（传毒种类）检疫鉴定方法 SN/T1157进出境植物苗木检疫规程 SN/T1158 3进出境植物盆景检疫规程 SN/T2757 植物线虫检测规范 3 3符号和缩略语 下列符号和缩略语适用于本文件。 n：测计的标本数； a：体长/最大体宽； b：体长/体前端至食道与肠连接处的距离； c：体长/尾长； c"：尾长/肛门处体宽； h：尾后部的透明区长； L：体长； Lipw：头部宽度； Odontophone：齿尖针延伸部长度； Odontostyle：齿尖针长度； Tail：尾长； V：体前端至阴门的距离×100/体长； VBW：阴门处的体宽； BWGR：导环处体宽； BWOB：食道基部体宽； GR：导环至体前端的距离； Spicules：交合刺的长度。 基本信息 4 中文名称：短颈剑线虫。 1 SN/T41712015 学名：XiphinemabrevicollumLordello&.DaCosta,1961。 异名：X.saopaoloenseKhan&.Ahmad,1975,X.americanumApudCarvalho,1955,1962,X.diffu sumLamberti&.Bleve-Zacheo,1979(n.syn.),X.parvumLamberti,Ciancio,Agostinelli&.Coiro,1992 (n.syn.),X.pseudoguiraniLamberti,Ciancio,Agostinelli&.Coiro,1992(n.syn.),XguiraniApud Lamberti &Bleve-Zacheo,1979,X.Sheri Lamberti &.Bleve-Zacheo,1979(n.syn.),X.taylori Lamberti,Ciancio,Agostinelli&.Coiro,1992(n.syn.)。 分类地位：线虫门（Nematoda），无侧尾腺纲（Adenophorea），矛线目Dorylaimida），矛线亚目（Dory laimina），矛线总科（Dorylaimoidea），长针科（longidoridae），剑亚科（Xiphinematinae），剑属（Xiphine ma），美洲剑线虫组（Xiphinemaamericanum-group）。 短颈剑线虫是一种非常重要的植物寄生线虫，主要危害寄主植物的根部，引起根部组织变黑，皮层增 厚，侧根增生，长势变弱，造成根系肿大或坏死。短颈剑线虫主要通过带根苗木、土壤及栽培介质传播扩 散，雌、雄虫形态学特征是该虫检验鉴定的主要依据，寄主范围、地理分布等信息可供参考（参见附录A）。 5方法原理 根据形态特征描述和形态特征测计值采用Hunt(1993)的长针科分类系统进行线虫的分类鉴定。 6 仪器、用具和试剂 6.1仪器 生物显微镜、体视显微镜（具透射光源）、恒温培养箱、冰箱、离心机。 6.2用具 钟面皿或培养皿、盖玻片载玻片、挑针、酒精灯、线虫滤纸或纱布、500uL塑料管、漏斗、漏斗架、乳 胶管、止水夹、加热板、水桶、分样筛（60目~300目）、移液器、干燥器、记号笔。 6.3试剂 4%甲醛、甘油、指甲油、石蜡、溶液I（96%乙醇：甘油蒸馏水=20：1：79）、溶液Ⅱ（甘油： 96%乙醇=1：19)。 7现场检疫 对植物种苗的根、茎根、根状茎等地下部分材料进行检查，观察苗木的生长状况，根部为害状，以及 是否带介质、土壤等。重点选取根部组织变黑，皮层增厚，侧根增生，长势变弱，根系肿大或坏死等症状 的苗木及根际介质或土壤，如无可疑症状则按要求随机取样。取样后立即置密封塑料袋，标记后及时送 实验室检验。 具体抽样比例按SN/T1157和SN/T1158执行。 8实验室检验 8.1线虫分离 8.1.1土壤或介质中线虫的分离 线虫的分离采用改进的过筛法：将约500g土样置于水桶中，捏碎土块并加水搅拌均匀，形成土壤 2 SN/T 4171—2015 壤悬浮液经过300目的分样筛，收集筛上的残留物，然后结合漏斗法或浅盘法进行分离（具体操作按照 SN/T2757)。 8.1.2植物组织中线虫的分离 将植物材料（茎干、根、叶柄等）切成小段，大小约2cm，用漏斗法或浅盘法进行分离（具体操作按照 SN/T2757)。 8.2体视显微镜镜检 分离获得的水样在体视显微镜下检查-初步观察线虫的形态结构，挑取或吸取疑似短颈剑线虫。 8.3生物显微镜观察、摄影和测置量 将线虫置于载玻片上制成临时玻片或永久玻片，在生物显微镜不仔细观察其形态特征并对整体形 态、齿尖针、尾部形态、雌虫生殖系统及雄虫交合刺等进行摄影，并测量相应的测计值。 9形态鉴定特征 9.1美洲剑线虫组的主要鉴别特征 雌虫虫体热杀死后呈“C”形或螺旋形：唇区圆，与身体连接处平展或有不同程度缢缩；矛线型食道， 齿尖针强壮，60μm～200μm；双生殖管，子宫中无“7”分化现象，卵巢反折；V值为42%～65%；尾短， c'<2.5，宽圆或圆锥形，有的种略显有一指状突。雄虫少见，有5枚或超过5枚中腹交配乳突，最后一 枚一般位于交合刺所在区域，其他特征与雌虫相似。美洲剑线虫组线虫的分类检索表参见附录B。 9.2 短颈剑线虫形态特征（参见附录C） 9.2.1 成熟雌虫形态特征 短颈剑线虫成熟雌虫主要形态特征如下： 热杀死后虫体呈“C"形或者螺旋形，体长为1800μm~2200μm； 唇区与虫体连接处略缢缩，唇区基部宽约为12.25μm~14.75μm； 齿针和导环结构典型，齿尖针全长为136um~168μm，齿尖针长84.7μm108.2μm，齿针延 伸部分长为48μm~60μm； 一食道基部膨大，与肠分界明显，食道球呈圆柱状； 一阴门横裂，位于虫体体长的50%左右。阴道长占所在位置体宽的1/3； 双生殖腺，对生，均发育完全，卵巢转折覆盖输卵管； 尾短锥形，透明区呈轻微指状凸起，尾长为肛门处体宽的0.66～1.11倍。 9.2.2成熟雄虫形态特征 短颈剑线虫成熟雄虫主要形态特征如下： 热杀死后虫体呈螺旋形，体长为1965m～2191μm，体前部与雌虫相似； -齿尖针和导环结构典型，后导环距体前端距离为102.25μm； 一泄殖腔前一共有5个腹中交配乳突； -交合刺矛线型，长约为41μm~55μm； 一一尾呈短锥形，比雌虫的长，约是肛门处体宽的1.12倍，尾部透明区也呈轻微指状凸起。 3