SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T4169-—2015 扁浒苔检疫鉴定方法 Detection and identification of Ulva compressa Linnaeus 2015-09-01实施 2015-02-09发布 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T4169—2015 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布结构不承担识别这些专利的责任。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国宁波出人境检验检疫局、中国检验检疫科学研究院、中华人民共 和国青岛出人境检验检疫局、宁波象山旭文海藻开发有限公司、宁波大学。 本标准主要起草人：段维军、郭立新、庞国兴、朱文荣、徐年军、张慧丽、顾建锋、张永江、陈炯、 陈长法、陈先锋、朱水芳。 SN/T4169—2015 扁浒苔检疫鉴定方法 1 范围 本标准规定了扁浒苔UluacompressaLinnaeus1753的检疫鉴定方法。 本标准适用于扁浒苔的检疫鉴定。 2 扁浒苷基本信息 学名：UlvacompressaLinnaeus1753 异名： Conferva compressa(Linnaeus)Roth 1797 Tubularia compressa (Linnaeus)Roussel 1806 Scytosiphoncompressus(Linnaeus)Lyngbye1819 Enteromorphacompressa(Linnaeus)Nees1820 Fistularia compressa(Linnaeus)Greville1824 Soleniacompressa(Linnaeus)C.Agardh1824 Ileacompressa(Linnaeus)Gaillon 1828 Fistulariaintestinalisvar,compressa(Linnaeus)J.P.Jones&Kingston1829 Hydrosolencompressus(Linnaeus)Martius1833 Enteronia compressa(Linnaeus)Chevallier1836 Enteromorphavulgarisvar.compressa(Linnaeus)Edmondston1845 Ulva enteromorpha var.compressa(Linnaeus)Le Jolis 1863 Enteromorpha intestinalisvar.compressa(Linnaeus)Rosenvinge1893 Enteromorphaintestinalissubsp.compressa(Linnaeus)M.W.R.N.deSilva&.E.M.Burrows1973 Enteromorpha compressavar.usneoides(Bonnemaison ex J.Agardh)Bliding Enteromorphaclathratavar.usneoides(J.Agardh)V.J.Chapman Enteromorpha compressa f.typicakjellman Enteromorpha complanata Kutzing1845 Enteromorphacompressavar.complanata(Kutzing)Rabenhorst1868 Enteromorpha usneoides Bonnemaison exJ.Agardh 1883 Enteromorphacompressaf.complanata(Kutzing)J.Agardh1883 EnteromorphachloroticaJ.Agardh1883 分类地位：真核生物域Eukaryota，植物界Plantae，绿色植物亚界Viridaeplantae，绿藻门Chloro- phyta，石莼纲Ulvophyceae，石莼目Ulvales，石莼科Ulvaceae，石莼属Ulua。 传播途径：可随压舱水等远距离传播。 该海藻的其他相关资料参见附录A、附录B和附录C。 3 方法原理 以扁浒苔的形态学特征和PCR检测结果作为鉴定依据。 SN/T4169—2015 4仪器和用具 4.1仪器 显微镜、超净工作台、人工气候箱、天平、高压灭菌锅、PCR仪、电泳系统、高速冷冻离心机、凝胶成 像系统、普通冰箱。 4.2用具 盐度计、光照计、烧杯、三角瓶、量筒、试管、玻璃培养Ⅲ（直径9cm）、酒精灯、镊子、剪刀、解剖刀、载 玻片、盖玻片、可调移液器（0.1μL2μL，1μL~10μL10μl~100μL，100~1000μL）及相应的 吸头、离心管、PCR管和研钵等。 5试剂和材料 除另有规定外，所有试剂均为分析纯。PCR缓冲液、dNTPs（dATP、dTTP、dCTP、dGTP）、Taq DNA聚合酶、引物、十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）、乙二胺四乙酸二钠（EDTA）、氯化钠（NaCI）、三羟 甲基氨基甲烷盐酸、冰乙酸、溴化乙锭、乙醇、灭菌海水、灭菌水、蒸馏水。 6 鉴定方法 6.13 分离培养 采用断藻法进行分离，将疑似石纯属绿藻用无菌水冲洗3次后，用无菌刀片切割成长度为1mm～ 10 d。 6.2形态观察 从海水样品、其他采集样品或分离培养获得纯培养物、使用无菌镊子等分离工具，挑取出藻体进行 形态学观察与PCR检测。 6.3PCR检测方法 试剂配制见附录D.PCR检测方法见附录E 7鉴定特征 7.1 形态学鉴定特征 扁浒苔藻体柔软，常漂浮于岸边，多从下部开始分枝，上部少，下部细上部宽，分枝处多继缩，下部节 状，藻体中气泡多，管状，中空；基部区具有狭窄翼；细胞排列不规则，4～6边形，有时呈小圆圈状排列； 叶绿体有时呈帽状分布于细胞中（参见附录B和附录C)。 7.2PCR鉴定 若阴性对照和空白对照正常，待检样品经过PCR扩增后电泳在330bp出现特异性片段，则判定为 阳性。 2 SN/T41692015 8结果判定 若分离物的培养特征与7.1相符，可初步判定为检出扁浒苔，需利用7.2方法进一步检测。 若PCR凝胶电泳检测结果为阳性，而且扩增片段大小与描述相符，可判定为扁浒苔。 样品保存与处理 样品经登记和经手人签字后妥善保存。对检出扁浒苔的样品应保存于4℃冰箱中，保存期为1年， 有特殊需求保存期可延长，以备复验、谈判和仲裁。保存期满，应经高压灭菌后方可处理。 10 菌株保存与处理 从检测样品中分离并鉴定为扁浒苔的藻株，应妥善保存。将藻株接种于盐度调整为20的灭菌海 水，20℃培养96h，然后4℃冰箱保存，或将培养好藻株置于一80℃长期保存。对不需要长期保存的 藻株应及时高压灭菌处理。 11 结果记录与资料保存 和审核人员签字。PCR凝胶电泳检测需有电泳结果照片。 3