ICS71.040.40 SN G09 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T4155—2015 化学品 用加标水或加标沉积物的 沉积物-水摇蚊生命周期毒性试验 Chemicals-Sediment-waterchironomid life-cycletoxicity test usingspikedwaterorspikedsediment 2015-02-09发布 2015-09-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T4155—2015 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准与联合国经济合作与发展组织（OECD)化学品测试方法No.233（2010）《沉积物-水摇蚊生 命周期毒性试验-用加标水或加标沉积物》（英文版）有关技术内容一致。 本标准做了下列结构和编辑性修改： 增加了“范围”一章； 将简介改为引言； 增加了“规范性引用文件”一章； - 将附录1改为术语和定义一章； 调整了附录顺序； 删除OECD的参考文献部分。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国天津出入境检验检疫局、中华人民共和国宁波出入境检验检 疫局。 本标准主要起草人：贾晓川、王华、于智睿、谭曜、李宁涛、张园、徐斌、刘凤娟、赵琢、刘伟、柳明、 王晨光。 1 SN/T4155—2015 引言 代）和第2代早期（F1代）。是现存的采用加标-水暴露或加标沉积物的OECD测试方法219或218的 延伸。现有的Chironomusriparius和Chironomusdilutus（以前称为C.tentans）毒性测试方案在欧洲 和北美发展迅速。还有其他有记载的摇蚊种类，如Chironomusyoshimatsui。C.riparius和C.yoshi- matsui完整的暴露周期是大约44天，C.dilutus是约100天。 本标准给出了水和沉积物的暴露方案。合适的暴露方案取决于试验的预期应用。与水的接触情况 下，水柱的加标，用于模拟杀虫剂喷雾和覆盖于地表水的初始峰浓度。加标水也用于其他类型的暴露 （包括化学品溢出），但不能用于检测持续长于试验周期的沉积物中的蓄积过程。在这种情况下，当径流 是农药进人水体的主要途径时，加标沉积物的设计可能是比较合适的。若对其他暴露方案感兴趣，试验 设计是很容易调整的。例如，如果不考虑分布在水相和沉积物层之间的受试物，并且沉积物的吸收已经 被最小化，那么可以考虑使用人工沉积物（例如石英砂）。 试验所需的沉积物所在地的有机体物质可能在沉积物中存在很长时间。沉积物所在地有机体可能 通过许多途径暴露。每个暴露途径和时间的相对重要性有助于整体毒性效应，这依赖于物质的物理-化 学特性。对于强吸附剂或可与沉积物共价结合的物质来说，摄取被污染的食物也许是最主要的暴露途 径。为了不低估高亲脂物质的毒性，可以考虑在给予受试物之前在沉积物中加人食物。所以，它可以包 括所有的暴露途径和生命阶段。 测试终点时羽化成虫的总数（包括第1代和第2代），发育速度（包括第1代和第2代），完全羽化并 存活的成年个体的性别比率（包括第1代和第2代），每个雌性的卵串的数量（仅第1代）和卵串的生育 力（仅第1代）。 强烈建议配制沉积物。配制沉积物相与自然沉积物相比有很多优点： 减少试验差异性，因为它形成一个可重复的“标准化基质”，并且不需要寻找未被污染的清洁 沉积物； 可以在任何时间开始试验，而且不会遇到季节性差异，并且不需要预处理沉积物； 比现场收集足够日常测试所需的数量降低了成本； 配制沉积物可以通过研究毒性数据，进行毒性分类。 = SN/T4155—2015 化学品用加标水或加标沉积物的 沉积物-水摇蚊生命周期毒性试验 1范围 本标准规定了化学品用加标水或加标沉积物的沉积物-水摇蚊生命周期毒性试验的术语和定义、试 验准则、试验方法、试验设计、试验步骤、观察、分析方法、数据和报告。 本标准适用于化学品检验用的沉积物-水摇蚊生命周期毒性试验。 规范性引用文件 2 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T278582011 化学品 沉积物-水系统中摇蚊毒性试验 加标于水法 GB/T27859—2011 化学品 沉积物-水系统中摇蚊毒性试验 加标于流积物法 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 配制沉积物formulatedsediment 用来模拟天然沉积物物理组分的混合物，也可称作再生沉积物、人工沉积物或合成的沉积物。 3.2 上覆水overlyingwater 试验容器中处于于沉积物之上的水。 3.3 间隙水interstitialwater 沉积物和土壤颗粒间的水。 3.4 加标水 spiked water 已加受试物的试验用水。 4试验准则 4.1 试验原理 4.1.1将一龄摇蚊幼虫放入沉积物-水系统中，暴露于一定的试验物质浓度范围内。 4.1.2测试开始，通过将一龄幼虫（第一代）加入含有加标沉积物试验烧杯或在加人幼虫后交替将试验 物质添加到水中。 4.1.3 3摇蚊羽化，评估存活的摇蚊开始羽化的时间，全部羽化后的性别比例。 1 SN/T4155—2015 4.1.4成虫转移到养殖网箱以方便分群、交配和产卵。评估产生的卵串的数量和它们的生育能力。从 这些卵串获得一龄幼虫的第二代。将这些幼虫放人新鲜配制的测试烧杯（加标程序与第一代相同），通 过评估第二代的羽化，羽化的时间和完全羽化后存活摇蚊性别比例（图A.4为生命周期试验的示意图） 以确定第二代的生育能力。 4.1.5对所有数据进行分析，通过回归模型评估导致X%减少的浓度的有关终点，或通过使用假设检 验，以确定无可观察效应浓度（NOEC）。后者需要将处理组与对照组比较进行统计学检测。 4.1.6应该指出的是，在添加水的情况下，如是快速降解物质，每代的最后生命阶段（如蛹阶段）可能会 暴露于比一龄幼虫低的浓度水平。考虑到这个问题，每个生命阶段的暴露水平要相一致，以下是可能需 要考虑的补充方法： 一在不同的生命阶段并行加标，或者 一在两个测试阶段（第1和第2代）.在测试系统内重复加标（或更新上覆水），加标（更新）间隔要 根据受试物特性进行调节 这些方法仅适用于加标水，不适用于加标沉积物。 4.2受试物信息 受试物在水中的溶解度，其蒸汽压力和logK·测量或计算沉淀物的分配，和在水和沉积物中的稳 定性。有效的受试物在上覆水、孔隙水和沉积物中定量的分析方法·且有已知和报告的准确度，以及检 测限。有用的信息包括结构式和受试物的纯度：受试物的化学特性（例如分散、非生物和生物降解等） 也有用。 4.3对照物 应周期性的检测对照物作为确保实验室检测敏感性没有变化的手段。可采用水蚤做48h急性检 测。但是，只有得到有效的急性试验结果作为指导.才能考虑根据GB/T27858一2011进行慢性试验。 可参考的对照物为：林丹、氟乐灵、五氯苯酚、氯化镉和氯化钾： 4.4：试验可靠性 下列条件下试验是有效的： 暴露结束时，对照组两代羽化均值至少为70%： 一对C.ripariusandC.yoshimatsui来说.对照组一龄幼虫进人试验容器后12d~23d，两代应 有85%的羽化成年摇蚊；C.dilutus为20d～65d： 完全对照组两代全羽化的性别比率和存活成虫（雌性或雄性）的均值应为至少0.4，不应超过0.6； 一对照组每个配种笼1代的受精卵串分数至少为0.6； 两代暴露结束时，应检测每个容器的pH和溶解氧。氧浓度应为空气饱和值的至少60%，上 覆水的pH值应为6~9； —水温变动不要超过土1.0℃。 5试验方法 5.1试验容器和饲养箱 5.1.1幼虫暴露于600mL直径约8.5cm玻璃烧杯（参见附录A）。也可使用其他合适容器，但要有足 够的深度容纳上覆水和沉积物。沉积物面积为每只幼虫2cm～3cm。沉积物层与上覆水深度比约 2 SN/T4155—2015 为1：4。 2L的结晶皿，装有试验水和沉积物，用于产卵。结晶血中重沉积物层与上覆水层的深度比为1：4。 5.1.3收集卵串后放人12孔微孔板（一孔一串，含有至少从加标结晶皿中吸取的2.5mL水），然后盖 上盖子以防蒸发。也可以用其他可以装卵串的适当容器。 5.1.4除了微孔板，所有检测容器和其他接触检测系统的装置都要完全采用玻璃或其他化学情性 材料。 5.2种系选择 优先采用Chironomusriparius。也可采用C.yoshimatsui，也可以使用C.dilutus，但操作比较困 难，而且试验周期较长。C.ripariu的培养方法参见附录B。培养条件同样适合C.dilutus和C.yoshi- matsui。试验开始前需要鉴定种系，如来自于同一培养容器则不需要每次试验期都鉴定。 5.3沉积物 优先采用配制沉积物（也叫再生、人工或合成沉积物）。但是，如使用天然沉积物，需检测特性（至少 为pH、有机碳含量，其他参数比如C/N比和粒度），且没有被污染、没有其他可能与摇蚊竞争或吃摇蚊 的有机体。开始试验前，沉积物在试验条件下适应7天。推荐下列配制沉积物： a）4%～5%（干重）泥炭：pH值尽可能接近5.5~6.0：泥炭为粉末形式、微粒（粒径≤1mm），只能 风干； b）20%（干重）高岭土（高岭石含量最好超过30%）； d）加去离子水，最终混合物的水含量为30%～50%： e）加人化学纯碳酸钙（CaCO，）调节pH值沉积物最终混合物pH值为7.0十0.5； f）最终