ICS 65.160 YC X 87 备案号：61387—2018 中华人民共和国烟草行业标准 YC/T559—2018 烟草特征性成分 生物碱的测定 气相色谱-质谱联用法和 气相色谱-串联质谱法 Characteristic components of tobacco--Determination of alkaloids-Gas chromatography-mass spectrometry method and gas chromatography-tandem mass spectrometrymethod 2018-01-18发布 2018-02-01实施 国家烟草专卖局 发布 YC/T 559—2018 前言 本标准按照GB/T1.1一2009和GB/T20001.4一2015给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由国家烟草专卖局提出。 本标准由全国烟草标准化技术委员会卷烟分技术委员会（SAC/TC144/SC1)归口。 本标准起草单位：国家烟草质量监督检验中心、上海新型烟草制品研究院、云南中烟工业有限责任 公司、湖南中烟工业有限责任公司、广西中烟工业有限责任公司、浙江中烟工业有限责任公司，山东省烟 草质量监督检测站、四川省烟草质量监督检测站。 本标准主要起草人：胡清源、韩书磊、陈欢、侯宏卫、罗彦波、沈轶、李翔宇、田永峰、李小兰、庞永强、 张洪非、付亚宁、张怡春、纪立顺、王志国、周芸、陈永宽、杨柳、周国俊、朱友、别振英、陶晓秋、熊巍、蒋健、 庞凤、尤俊衡、刘薇、任建新、张凤梅、申钦鹏、吴晶晶。 I YC/T559—2018 烟草特征性成分生物碱的测定 气相色谱-质谱联用法和 气相色谱-串联质谱法 1范围 本标准规定了烟草特征性成分生物碱（烟碱、N-甲基假木贼碱、降烟碱、麦斯明、假木贼碱、β-二烯烟 方法。 本标准适用于烟草及烟草制品、电子烟烟液、无烟气烟草制品等样品中烟草特征性成分生物碱（烟 碱、N-甲基假木贼碱、降烟碱、麦斯明、假木贼碱、β-二烯烟碱、新烟草碱、2，3"-联吡啶、β-二烯降烟碱、可 替宁)的测定，胶基型烟草制品可参考使用。其中，气相色谱-质谱联用法适用于样品中10种生物碱的 常规检测，气相色谱-串联质谱法适用于样品中9种生物碱（不含烟碱）的确证检测。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3原理 在碱性氢氧化钠水溶液条件下，采用萃取溶液萃取试样中的生物碱，使用气相色谱-质谱联用仪 (GC-MS)进行测定，内标法定量。 4试剂 4.1水，GB/T6682，一级。 4.2二氯甲烷，分析纯级及以上。 4.3甲醇，分析纯级及以上。 4.45%氢氧化钠水溶液（质量分数）。 4.5烟碱，纯度不低于99%。 4.6N-甲基假木贼碱，纯度不低于98%。 4.7降烟碱，纯度不低于98%。 4.8麦斯明，纯度不低于98%。 4.9 假木贼碱，纯度不低于97%。 4.10β-二烯烟碱，纯度不低于98%。 1 YC/T559-—2018 4.11 新烟草碱，纯度不低于98%。 4.122，3"-联吡啶，纯度不低于98%。 4.13β-二烯降烟碱，纯度不低于98%。 4.14可替宁，纯度不低于98%。 4.15喹啉，纯度不低于99%。 4.16降烟碱-2，4，5，6-d4，纯度不低于98%。 4.172，2"-联吡啶-dg，纯度应不低于98%。 4.18萃取溶液 将二氯甲烷（4.2)和甲醇（4.3)按照体积比4：1混匀。 4.19内标溶液 准确称取2.0g喹（4.15），50.0mg降烟碱-2，4，5，6-d（4.16）及50.0mg2，2-联吡啶-dg（4.17）， 精确至0.1mg，置于100mL棕色容量瓶中，加人甲醇（4.3)稀释定容至刻度。该溶液应于（0～4）℃条 件下避光保存，有效期为1个月。 4.20一级标准溶液 4.20.1烟碱一级标准溶液 至刻度。该溶液应于（0～4)℃条件下避光保存，有效期为1个月。 4.20.2降烟碱一级标准溶液 准确称取20.0mg降烟碱（4.7），精确至0.1mg，置于10mL棕色容量瓶中，用甲醇（4.3）稀释定容 至刻度。该溶液应于（0～4）℃条件下避光保存，有效期为1个月。 4.20.3其他8种生物碱一级标准溶液 准确称取20.0mgN-甲基假木贼碱（4.6）、麦斯明（4.8）、假木贼碱（4.9）、β-二烯烟碱（4.10）、新烟草 量瓶中，用甲醇（4.3)稀释定容至刻度。该溶液应于（0～4)℃条件下避光保存，有效期为1个月。 4.21二级标准溶液 4.21.1降烟碱二级标准溶液 准确移取0.5mL降烟碱一级标准溶液（4.20.2），置于50mL棕色容量瓶中，用甲醇（4.3)稀释定容 至刻度。该溶液应于（0～4)℃条件下避光保存，有效期为1个月。 4.21.2其他8种生物碱二级标准溶液 准确移取0.5mL其他8种生物碱一级标准溶液（4.20.3），置于50mL棕色容量瓶中，用甲醇（4.3） 稀释定容至刻度。该溶液应于（0～4)℃条件下避光保存，有效期为1个月。 4.22标准工作溶液 4.22.1烟碱标准工作溶液 的10mL棕色容量瓶中，再分别准确加人0.05mL内标溶液（4.19），用二氯甲烷（4.2)稀释定容至刻度， 得到5个不同浓度的烟碱系列标准工作溶液。即配即用。 4.22.2降烟碱标准工作溶液 分别准确移取0.02mL、0.05mL、0.1mL、0.2mL、0.5mL降烟碱一级标准溶液（4.20.2）及 0.01mL、0.02mL、0.05mL、0.1mL、0.2mL降烟碱二级标准溶液（4.21.1)于不同的10mL棕色容量瓶 中，再分别准确加人0.05mL内标溶液（4.19），用二氯甲烷（4.2)稀释定容至刻度，得到10个不同浓度 2 YC/T559-2018 的系列标准工作溶液。即配即用。 4.22.3其他8种生物碱标准工作溶液 分别准确移取0.02mL、0.05mL、0.1mL、0.2mL、0.5mL的其他8种生物碱一级标准溶液 (4.20.3）及0.01mL、0.02mL、0.05mL、0.1mL、0.2mL的其他8种生物碱二级标准溶液（4.21.2）于不 同的10mL棕色容量瓶中，再分别准确加人0.05mL内标溶液（4.19），用二氯甲烷（4.2）稀释定容至刻 度，得到10个不同浓度的系列标准工作溶液。即配即用。 5仪器与材料 常用实验仪器及下述各项。 5.1电子天平，感量为0.1mg。 5.2气相色谱-质谱联用仪， 5.3 涡旋振荡器，最大涡旋速度不小于2000r/min。 6分析步骤 6.1 样品前处理 5%氢氧化钠水溶液（4.4），振荡混勾后，静置20min。然后加人10.0mL萃取溶液（4.18），加盖密封后 置于涡旋振荡器中，以2000r/min的速度涡旋振荡提取40min，静置1h后，取下层有机相转移到色谱 分析瓶中进行仪器分析。 6.2 仪器分析条件 以下分析条件可供参考，采用其他条件应验证其适用性。 6.2.1气相色谱条件如下： 色谱柱：弹性毛细管柱，推荐固定相为（35%-苯基)-甲基聚硅氧烷，规格为[30m（长度）X 0.25mm（内径）×0.25μm膜厚)，其他色谱柱应验证其适用性； 进样口温度：250℃； 一进样量：1μL，烟碱采用分流进样（100：1），其他生物碱采用不分流进样或小分流比进样（如 10 : 1); —载气：氨气（纯度≥99.999%），恒流模式，流速：1.0mL/min； 程序升温：初始温度80℃，保持1min，以20℃/min升至200℃，再以50℃/min的速率至 300℃，保持5min。 6.2.2质谱条件如下： 溶剂延迟：烟碱为5min，其他生物碱为7min； 电离方式：电子轰击源（EI)； -电离能量：70eV； —传输线温度：280℃； -离子源温度：250℃； 一扫描方式：选择离子监视方式（SIM)扫描，目标物及内标的保留时间、定量及定性选择离子参 数如表1所示。 3 YC/T559—2018 表110种生物碱及其内标的保留时间、定量及定性离子 保留时间 定量离子 定性离子 目标物 min m/z m/z 烟碱 6.67 84 133 7.46 86 119 N-甲基假木贼碱 降烟碱 7.55 119 147 麦斯明 7.65 118 146 假木贼碱 7.87 84 105 β二烯烟碱 7.94 158 130 新烟草碱 8.14 105 160 2,3"-联吡啶 8.31 156 130 β-二烯降烟碱 8.47 144 117 可替宁 9.21 98 176 6.29 129 102 降烟碱-2,4,5,6-d 7.54 123 151 2,2"-联吡啶-d8 7.70 164 134 6.3标准工作曲线绘制 分别取系列标准工作溶液（4.22)进行仪器分析，纵坐标为目标化合物色谱峰面积与内标物色谱峰 面积的比值，横坐标为目标化合物浓度，分别建立10种生物碱的标准工作曲线，工作曲线线性相关系数 R²应不小于0.99。 每次试验均应制作标准工作曲线，每20次样品测定后应加人一个中等浓度的标准溶液，如果测得 的值与原值相差超过5%，则应重新进行标准工作曲线的制作。 6.4 样品测定 按照仪器测试条件（6.2）测定样品，内标法定量。每个样品平行测定两次，每批样品做一组平行 空白。 若待