ICS13.300 CCSA80 中华人民共和国国家标准 GB/T21794—2025 代替GB/T21794—2008 化学品 体外哺乳动物细胞染色体畸变 试验方法 Chemicals—Testmethodofinvitromammalianchromosomeaberration 2025-08-29发布 2025-12-01实施 国家市场监督管理总局 国家标准化管理委员会发布目 次 前言 Ⅲ ………………………………………………………………………………………………………… 引言 Ⅳ ………………………………………………………………………………………………………… 1 范围 1 ……………………………………………………………………………………………………… 2 规范性引用文件 1 ………………………………………………………………………………………… 3 术语和定义 1 ……………………………………………………………………………………………… 4 缩略语 2 …………………………………………………………………………………………………… 5 试验基本原则 2 …………………………………………………………………………………………… 6 试验方法 2 ………………………………………………………………………………………………… 7 试验数据和报告 6 ………………………………………………………………………………………… 附录A(规范性) 细胞毒性评估 9 ………………………………………………………………………… 参考文献 10 …………………………………………………………………………………………………… ⅠGB/T21794—2025 前 言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件代替GB/T21794—2008《化学品 体外哺乳动物细胞染色体畸变试验方法》,与GB/T21794— 2008相比,除结构调整和编辑性改动外,主要技术变化如下: a) 增加了“染色单体裂隙”“遗传毒性”“相对细胞增长数”和“相对群体倍增数”的术语和定义(见 3.1、3.5、3.9、3.10);删除了“裂隙”的术语和定义(见2008年版的2.4);更改了“染色单体型畸 变”“染色体型畸变”“内复制”“有丝分裂指数”“数目畸变”“多倍体”和“结构畸变”的定义(见 3.2、3.3、3.4、3.6、3.7、3.8和3.11,2008年版的2.1、2.2、2.3、2.5、2.6、2.7和2.8); b) 增加了“缩略语”部分(见第4章); c) 更改了“准备”部分内容,细化了细胞选择条件,增加了细胞保存条件以及气体或易挥发性受试 物的准备条件,并对S9在培养液中的浓度进行了修订(见6.1,2008年版的4.1); d) 更改了溶剂选择条件,规定了最终接触浓度中有机溶剂的浓度(见6.2.1,2008年版的4.2.1); e) 更改了环磷酰胺和环磷酰胺(一水合物)名称及CAS号(见表1,2008年版的4.2.3.2); f) 更改了“试验步骤”部分内容,对秋水仙素浓度和处理培养物时间做了具体规定,并增加了所需 计数的中期分裂相细胞数量(见6.3,2008年版的4.3); g) 更改了“数据处理”部分内容(见7.1,2008年版的5.1); h) 增加了细胞毒性评估内容,给出了毒性评估各项指标的计算方法(见附录A)。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由全国危险化学品管理标准化技术委员会(SAC/TC251)提出并归口。 本文件起草单位:中国疾病与预防控制中心职业卫生与中毒控制所、青岛大学、生态环境部固体废 物与化学品管理技术中心、宁德市标准化协会。 本文件主要起草人:于典科、许琳、陈宵、杨琨、刘晓建、李斌、靳远、赵坤明、缪仙玉。 本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为: ———2008年首次发布为GB/T21794—2008; ———本次为第一次修订。 ⅢGB/T21794—2025 引 言 体外细胞染色体畸变试验适用于识别或鉴定可导致体外培养的哺乳动物细胞染色体结构畸变的化 学致突变物。染色体结构畸变一般有两种形式,染色体型畸变和染色单体型畸变。大多数化学致突变 物诱发染色单体型畸变,也可诱发染色体型畸变。多倍体增加表明受试物有导致染色体数目畸变的潜 在作用。本方法不用于检测染色体数目畸变。 染色体突变及其相关事件是很多人类遗传性疾病的原因,并且有充分证据表明,引起体细胞癌基因 和肿瘤抑制基因改变的染色体畸变及其相关事件,与诱发人类及试验动物肿瘤有关。体外细胞染色体 畸变试验具灵敏度高、直观性和互补性等优点。本试验能够直接检测受试物是否诱导染色体结构或数 量异常(如断裂、缺失、易位、非整倍体等),预测其潜在致癌性或致突变性,应用于药物开发和化学品安 全性评价。 体外染色体畸变试验应用的是已建立的细胞系、细胞株或原代细胞来培养。本试验是体外试验,通 常需要加入外源性代谢活化系统,但外源性代谢活化系统不可能完全模拟哺乳动物体内的代谢条件。 因此,本试验注意避免不能真实反映致突变作用的假阳性结果,它可能是由于pH、渗透压的变化或受 试物的高细胞毒性所致,需要结合体内试验排除假阳性。 ⅣGB/T21794—2025 化学品 体外哺乳动物细胞染色体畸变 试验方法 1 范围 本文件确立了化学品体外哺乳动物细胞染色体畸变试验的基本原则,描述了试验方法,规定了试验 数据和报告内容。 本文件适用于化学品体外哺乳动物细胞染色体畸变试验。 2 规范性引用文件 本文件没有规范性引用文件。 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 染色单体裂隙 chromatidgap 单个染色单体上出现的宽度小于染色单体的横截面的宽度、无染色质的区域。 3.2 染色单体型畸变 chromatid-typeaberration 指染色单体断裂或染色单体间断裂和重接的染色体结构损伤的现象。 3.3 染色体型畸变 chromosome-typeaberration 指两条染色单体在相同位点的断裂或断裂重接的染色体结构损伤的现象。 3.4 内复制 endoreduplication 在DNA复制的S期之后,细胞核未进行有丝分裂就开始了另一个S期的过程。 注:其结果是染色体有4、8、16等倍的染色质。 3.5 遗传毒性 genotoxic 基因组的损害能力。 注:包括对基因组的毒作用引起的致突变性及其他各种不同效应。 3.6 有丝分裂指数 mitoticindex 有丝分裂的细胞数量与总细胞数量之比。 注:用来衡量增殖状态细胞数量的指标。 3.7 数目畸变 numericalaberration 染色体数目出现不同于所用细胞的正常染色体数目的改变。 1GB/T21794—2025 3.8 多倍体 polyploidy 有两套以上染色体组的细胞或个体。 3.9 相对细胞增长数 relativeincreaseincellcounts;RICC 与试验样品接触培养的细胞数目的增加与未处理培养物细胞数目增加的比值。 注:以“%”表示。 3.10 相对群体倍增数 relativepopulationdoubling;RPD 与试验样品接触培养的细胞倍增数与未处理培养物的细胞倍增数的比值。 注:以“%”表示。 3.11 结构畸变 structureaberration 细胞分裂中期的染色体结构改变现象。 注:显微镜下可观察到结构畸变,如缺失、断裂、内交换或者相互交换等。 4 缩略语 下列缩略语适用于本文件。 CAS:化学文摘社编号(ChemicalAbstractsService) InChI:国际化合物标识(InternationalChemicalIdentifier) IUPAC:国际纯粹与应用化学联合会(InternationalUnionofPureandAppliedChemistry) SMILES:简化分子线性输入规范(Simplifiedmolecularinputlineentrysystem) UVCB:组分未知或者可变的物质、复杂反应产物或者生物材料(substancesofUnknownor Variablecomposition,ComplexreactionproductsorBiologicalmaterials) 5 试验基本原则 人类或其他哺乳动物来源的细胞在有或无外源性代谢活化系统的情况下暴露于受试物中。将培养 细胞与受试物接触一定的时间后,以中期分裂相阻断剂(如秋水仙素)处理细胞,然后对处于有丝分裂中 期的哺乳动物细胞的染色体畸变情况进行分析,评价受试物潜在的致畸变性。 6 试验方法 6.1 准备 6.1.1 细胞 6.1.1.1 可选用包括中国仓鼠卵巢细胞(CHO)、中国仓鼠肺细胞(V79)、中国仓鼠肺细胞(CHL)、人或 其他哺乳动物的外周血淋巴细胞在内的原代细胞。 6.1.1.2 人外周血淋巴细胞应来自年轻(18岁~35岁)、无吸烟史、无已知疾病且最近未接触遗传毒性 物质(如化学试剂、电离辐射)的献血者,以确保染色体畸变的背景发生率低且一致。 6.1.2 培养基和培养条件 6.1.2.1 应使用合适的培养基和培育条件(培养皿、CO2体积分数、温度和湿度)来维持所培养细胞的 2GB/T21794—2025