ICS 65.120 B 46 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 919—2020 代替NY/T919—2004 饲料中苯并(a)芪的测定 Determinationofbenzo(a)pyreneinfeeds 2020-11-12 发布 2021-04-01实施 中华人民共和国农业农村部 发布 NY/T919—2020 削 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准代替NY/T919—2004《饲料中苯并（a）芪的湾 高效液相色谱法》。与NY/T919—2004 相比，除编辑性修改外主要内容差异如下： 修改了标准名称； 修改了方法的适用范围（见第1章，2004年版的第1章）； 修改了液相色谱法的检出限（见第1章，2004年版的第1章）； 增加了液相色谱方法的定量限（见第1章，2004年版的第1章）； 增加了液相色谱-串联质谱法（见第3章)； 修改了高效液相色谱法的试验步骤（见4.5，2004年版的第7章）； 修改了高效液相色谱法的试验数据处理（见4.6，2004年版的第8章）。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由农业农村部畜牧兽医局提出。 本标准由全国饲料工业标准化技术委员会（SAC/TC76)归口。 本标准起草单位：山东新希望六和集团有限公司、中国饲料工业协会、广东省农业科学院农产品公共 监测中心。 本标准主要起草人：杨青、王黎文、郭吉原、孔凡科、王威利、周桂莲、孙春华、姜晓霞、郭丽君。 本标准所代替标准的历次版本发布情况为： NY/T919—2004。 NY/T 919—2020 饲料中苯并（a）花的测定 1范围 本标准规定了饲料中苯并（a)芪测定的液相色谱-串联质谱法和高效液相色谱法。 本标准中液相色谱-串联质谱法适用于配合饲料、浓缩饲料、精料补充料、添加剂预混合饲料和饲料原 料（硅铝酸盐等具有吸附性的矿物质饲料原料和油脂除外 )中苯并（a)的测定，检出限为0.5μg/kg，定 量限为1.0μg/kg。 本标准中高效液相色谱法适用于配合饲料、浓缩饲料、精料补充料和添加剂预混合饲料中苯并（a)芪 的测定，检出限为0.5ug/kg ，定量限为 2规范性引用文件 @ 下列文件对于本 1期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引 括所有的修改单）适用 GB/T 6682 实验室用 分析 水规格租 GB/T2019 物同料 试样的制 3液相色谱-串联质谱法 A 3.1原理 R 试样中的并 (a）花经 烷内酮浴液 取后用固相萃取挂净化经洗脱 后，用液相色 谱-串联质谱仪测定 内标汽 3.2试剂或材 警告：苯并 a 已知致癌物，标准物质使用中应特别注意 安全防护 并戴手套，尽量减少 J，在紫外光下观察皮 肤上有无蓝紫色斑 一直洗 N TER 使用分 除非另有规定 3.2.1水:GB/T66 3.2.2乙：色谱纯。 3.2.3正已烷。 3.2.4正已烷丙酮混合溶液 50mL 混勺 3.2.5苯并（a)芪标准储备溶液(100.件 ug/mL）：准确称取10mg（精确 0.01mg）苯并（a）芪标准品（CAS 号：50-32-8，纯度≥97%），用乙睛（3.2.2）溶解转移至 100mL容量瓶中，定容，摇勺。于0℃～4℃保存， 有效期6个月。也可使用市售有证标准储备溶液。 3.2.6苯并(a)芪标准中间溶液1（5.00ug/mL）：准确移取苯并（a)芪标准储备溶液（3.2.5)5ml于100 mL容量瓶中，用乙睛（3.2.2)定容，摇匀。临用现配。 3.2.7苯并（a)芘标准中间溶液Il（500μg/L)：准确移取苯并（a)芪标准中间溶液1（3.2.6)5mL于50 mL容量瓶中，用乙睛（3.2.2)定容，摇匀。临用现配。 3.2.8氛代苯并（a)芪标准储备溶液（100μg/mL）：准确称取10mg（精确至0.01mg)氛代苯并（a)芘标 准品［苯并（a)芪-D12,CAS号：63466-71-7，纯度≥97%，用乙晴（3.2.2）溶解转移至100mL容量瓶中， 定容，摇匀。于0℃～4℃保存，有效期为6个月。也可使用市售有证标准储备溶液。 3.2.9氛代苯并(a)标准中间溶液（1.00uμg/mL)：准确移取氛代苯并（a)芪标准储备溶液（3.2.8)1 mL于100mL容量瓶中，用乙睛（3.2.2)定容，摇匀。临用现配。 1 NY/T919—2020 3.2.10氛代苯并(a)芪标准工作溶液（200μg/L)：准确移取氛代苯并（a)芪标准中间溶液（3.2.9)10ml 于50mL容量瓶中，用乙睛（3.2.2)定容，摇勾。临用现配。 3.2.11苯并(a)芘混合标准系列溶液：准确移取苯并（a)芪标准中间溶液Il（3.2.7)0μL、100μL、200 μL、500μL、1000μL、2000μL,分别置于10mL容量瓶中，再向每个容量瓶中加入氛代苯并(a)芘标准工 作溶液（3.2.10)500μL，用乙睛（3.2.2）定容，摇匀勾。配制成苯并（a）芘浓度分别为0μg/L、5.00μg/L、 10.0μg/L、25.0μg/L、50.0μg/L、100μg/L的混合标准系列工作溶液，内标浓度为10.0μg/L。 3.2.12固相苯取柱：中性氧化铝，粒径75um~150μm，22g/60mL。 注：空气中水分对其性能影响很大，打开固相萃取柱包装后应立即使用或密闭避光保存。由于不同品牌氧化铝活性存 在差异，建议对质控样品进行测试，或做加标回收试验，验证氧化铝活性满足要求。 3.2.13微孔滤膜：0.22μm，有机系。 3.3仪器设备 3.3.1液相色谱-串联质谱仪：配有大气压化学电离源（APCI)。 3.3.2分析天平：感量为1mg和0.01mg。 3.3.3索氏抽提装置。 3.3.4水浴锅：温控(85土2)℃。 3.3.5旋转蒸发仪：温控（40士0.5)℃。 3.3.6固相萃取装置。 3.3.7氮吹仪。 3.3.8涡旋振荡器。 3.3.9苏形瓶：250mL。 3.4样品 按GB/T20195制备样品，至少200g，粉碎使其全部通过0.42mm孔径的分析筛，充分混匀，装入磨 口玻璃瓶中，备用。 3.5试验步骤 3.5.1提取 平行做2份试验。称取试样约10g，精确至1mg，置于滤纸包中，加入氛代苯并（a)芘标准工作溶液 （3.2.4），85℃抽提6h，回流速度不低于每小时4次。取下烧瓶，40℃旋蒸至近干。加人10mL正已烷溶 解残渣，得到待净化液，备用 3.5.2净化 用30mL固相萃取柱（3.2.12)，待液面降至柱床时，关闭底部旋塞。将待净化液（3.5.1)转移进净化 柱，打开旋塞，以约1mL/min的速度过柱，收集净化液于茄形瓶（3.3.9)中，再用80mL正已烷继续洗 脱，收集并合并净化液。将净化液于40℃下旋蒸至近干。用正已烷清洗茄形瓶，每次2mL，重复2次～3 次，合并洗涤液至试管中，于40℃下氮气吹干。残渣中准确加入乙睛（3.2.2)2.0mL，涡旋30s复溶，微 孔滤膜（3.2.13)过滤，供液相色谱-串联质谱仪测定。 3.5.3液相色谱-串联质谱仪参考条件 3.5.3.1液相色谱参考条件 色谱柱：Cis柱，柱长100mm，内径2.1mm，粒度2.5μm，或性能相当者。 流动相：乙晴十水=75十25。 流速：0.45mL/min。 柱温：30℃。 进样量：10μL。 3.5.3.2质谱参考条件 2 NY/T919—2020 离子源：大气压化学电离源（APCI）。 检测方式：多反应监测（MRM)，正离子模式。 放电电流：1.5μA。 脱溶剂气：1000L/h。 锥孔气流量：150L/h。 脱溶剂气温度：400℃。 源温度：150℃。 监测离子对、锥孔电压及碰撞能量的参考值见表1。 表1苯并(a)多反应监测(MRM)离子对、锥孔电压及碰撞能量的参考值 监测离子对 定量离子对 锥孔电压(DP) 碰撞能量(CE) 名称 m/2 m/z V eV 253.0>226.1 70 苯并(a)花 253.0>250.0 70 253.0>250.0 65 苯并(a)芘-D12 265.2>263.1 70 55 注：不同仪器，前体离子可为252.0，实际使用时需进行优化。 3.5.4测定 3.5.4.1混合标准系列溶液和试样溶液测定 在仪器的最佳条件下，分别取混合标准系列溶液（3.2.11)和试样溶液（3.5.2)上机测定。苯并（a)芘 标准溶液的监测离子色谱图参见附录A中的图A.1。 3.5.4.2定性 在相同试验条件下，试样溶液与混合标准系列溶液中苯并（a)芪的保留时间相对偏差应在土2.5%之 内。根据表1选择的定性离子对，比较试样谱图中苯并（a)芘定性离子的相对离子丰度与浓度接近的混合 标准系列溶液中对应的定性离子的相对离子丰度，若偏差不超过表2规定的范围，则可判定为样品中存在 苯并(a)芪。 表2定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差 单位为百分号 相对离子丰度 >50 >20~50 >10~20 ≤10 最大允许偏差 ±20 ±25 ±30 ±50 3.5.4.3定量 以苯并(a)芪的浓度为横坐标、苯并(a)芪与氛代苯并(a)芘的峰面积之比为纵坐标，绘制标准曲线，标 准曲线的相关系数应不低于0.99。试样溶液与标准溶液中苯并（a)的响应值均应在标准曲线线性范围 内，如超出范围，应重新试验。 3.6试验数据处理 试样中苯并（a)芪的含量以质量分数w计，数值以微克每千克（μg/kg)表示，多点校准按式(1)计算 exVx1000 (1) mX1000 式中： 由标准曲线得到的试样溶液中