ICS11.220 CCS B 41 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 557—2021 代替NY/T557—2002 马鼻疽诊断技术 Diagnostic techniquesforglanders 2021-12-15发布 2022-06-01实施 中华人民共和国农业农村部发布 NY/T 557—2021 邹林品食业欣国全 五典食 大目 共公 前言 引言 范围 2 规范性引用文件 术语和定义 马鼻疽临床诊断 5 鼻疽菌素点眼试验 6 鼻疽补体结合试验 鼻疽菌素皮内注射试验 8病原分离与鉴定 9 马鼻疽的综合判定 附录A(资料性) 补体结合试验各成分的配制 附录B(资料性) 血清样品的采集和处理 附录C(资料性) 标准比色孔的制备 12 附录D(资料性） 培养基的配制 13 NY/T557—2021 言台 全国旅业食品标准 公共服务 食典通 本文件按照GB/T1.1一2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件代替NY/T557—2002《马鼻疽诊断技术》，与NY/T557—2002相比，除结构调整和编辑性改 动外，主要技术变化如下： 对补体结合试验的检验方法中各成分的用量和用法进行调整（见第6章）； 增加病原分离鉴定（见第8章)。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由农业农村部畜牧兽医局提出。 本文件由全国动物卫生标准化技术委员会（SAT/TC181)归口。 本文件起草单位：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所、青岛海关技术中心。 本文件主要起草人：郭巍、王雪峰、王晓钧、朱来华、郑小龙、王群。 本文件所代替文件的历次版本发布情况为： -NY/T557—2002。 本次为第一次修订。 II NY/T557—2021 马鼻疽(glanders)是马、骤、驴等单蹄动物的一种高度接触性的传染病，被世界动物卫生组织[World OrganizationforAnimalHealth（英），OfficeInternationaldesEpizooties（法），OIE列人《OIE疫病、感染 及侵染名录》，我国《一 三类动物疫病病种名录》（2008)把该病列为二类动物疾病。本病以在鼻腔、喉 头、气管黏膜或皮肤上形成鼻疽结节、溃疡和瘢痕 或其他实质器官发生鼻疽性结节为特征。 本病的病原为伯克霍尔德氏菌属（Burkhotderia）鼻疽伯克霍尔德氏菌（Burkholderiamallei），我国《动物 病原微生物分类名录》（2005）把鼻疽伯克霍尔德氏菌列为三类病原微生物 大 C RI U NY/T557—2021 马鼻疽诊断技术 1范围 本文件规定了马鼻疽临床诊断、鼻疽菌素变态反应试验（含鼻疽菌素点眼试验和鼻疽菌素皮内注射试 验）、补体结合试验、病原分离鉴定方法的技术要求。 本文件适用于马、驴、骤等马属动物的马鼻疽诊断及鼻疽伯克霍尔德氏菌的检测。 2规范性引用文件 中的规范性引用而同成太B必不可少的条款。 下列文件中的内容通过文 其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用 本义件;不江的引 否所有的修改单）适用本文件。 GB/T4789.28食 门 GB/T6682 分析 用水规 GB19489 实验 物安全通 3术语和定义 S 227 用于 下列术语和定 3. 1 A 溶血素效价 moDsin 在补体存在的多 牛 L细胞悬液在 最小用量。 4 马鼻疽临床诊断 4.1流行特点 4.1.1马、驴、骠等 4. 1.2 年四季均 对出现 ),应在严格防 护下进行检查（见4.3 U 4.2临床症状 4.2.1典型马鼻疽症状和病 鼻腔有脓性鼻漏，呼吸带哮鸣音；鼻中隔存 小不 等的灰色鼻殖性结 周围有红晕，或有大小不 等、深浅不一边缘隆起的溃疡；或发生溃疡已愈者见到星状冰花状的源 皮肤有结节，进而形成深 陷的火山口状溃疡，排出灰黄色或混有血液的黏稠脓汁，溃疡底面似猪 状，结节和溃疡附近的淋巴管肿 大、硬固，粗如绳状（索状肿），沿索状肿可发现串珠状结节和溃疡 4.2.2疑似马鼻疽症状 鼻腔有鼻漏、颌下淋巴结肿胀、皮下浮肿、咳嗽、睾丸炎、异常消瘦。 4.3器材准备 4.3.1医用防护服。 4.3.2医用口罩。 4.3.3乳胶手套、线手套。 4.3.4护日镜。 4.3.5耳夹子。 4.3.6反光镜、手电筒。 1 NY/T557—2021 4.3.7消毒药。根据情况，可选择0.1%升汞水、3%来苏儿、0.1%新洁尔灭、75%酒精等其中之一使用。 4.3.8现场消毒药。根据情况，可选择10%石灰乳、2%热火碱水、10%～20%漂白粉等其中之一使用。 4.4检查方法 选择适当位置，对保定后的马进行检查。 4.4.2逐项检查马的鼻腔、皮肤、颌下淋巴结及睾丸等。注意观察是否有结节、溃疡、鼻漏、皮下浮肿、颌 下淋巴结肿胀、睾丸炎及咳嗽、异常消瘦等症状。 4.4.3检查鼻腔时，先以消毒药（见4.3.7)洗净鼻腔内外的鼻漏，然后以双手打开鼻孔，用反光镜或手电 筒将光线射入鼻腔深部，仔细检查黏膜上有无鼻疽特有的病变（见4.2）。 4.4.4检查结束，检查者及助手的乳胶手套如破损，需用消毒药彻底消毒手部，防护服、手套、口罩、护目 镜等按医用废物处理。检疫现场用现场消毒药（见4.3.8)消毒。 4.5结果判定 4.5.1呈现4.2.1临床症状时，可判为马鼻疽临床诊断阳性。 4.5.2呈现4.2.2临床症状时，可判为马鼻疽临床诊断疑似。 5鼻疽菌素点眼试验 5.1点眼准备 点眼试验应于早晨进行，点眼后，于第3h、6h、9h、24h各检查一次反应强度，而且第6h和第24h 应翻眼检查。 5.2器材准备 5.2.1同4.3.1~4.3.5。 5.2.2生理盐水（见附录A中的A.1)。 5.2.3点眼管。 5.2.4提纯鼻疽菌素（用生理盐水稀释至0.5mg/mL）。 5.2.5消毒药同4.3.7。 5.3试验操作 5.3.1点眼前，应详细检查两眼结膜，以及是否单、双眼瞎。眼结膜正常者，方可点眼。以另一只眼做对 照，并做记录。瞎眼马可用补体结合试验检测。 5.3.2点眼时，助手保定马，检查者用左手食指插入上眼脸窝内，使瞬膜露出，以拇指拨开下眼脸，使瞬膜 与下眼脸构成凹兜。右手持吸了鼻疽菌素的点眼管，保持水平，手掌下缘支撑额骨之眶部，点眼管尖端距 凹兜约1cm，滴人凹兜鼻疽菌素3滴～4滴（0.2mL～0.3mL）。注意避免点眼管与眼结膜接触。 5.3.3每回点眼应点于同一侧眼中，如不同，需在记录上注明。 5.3.4点眼后，注意拴系马匹，并防止风沙浸人、阳光直射或异物摩擦已被点眼的眼晴。 5.4反应强度判定标准 5.4.1强阳性反应(+十+） 眼脸炎症反应特别明显，上下眼脸相互胶着一起，出现大量脓汁。 5.4.2阳性反应(十+) 眼脸浮肿，眼晴呈半开状态，出现中等量的脓性眼够。 5.4.3弱阳性反应（十） 眼结膜发炎，浮肿明显，并含有少量的脓性眼够，或在灰白色黏液眼够中混有脓性眼够。 5.4.4疑似反应(±) 眼结膜潮红，有弥漫性浮肿和灰白色黏液性（非脓性）眼。 2 NY/T557—2021 5.4.5阴性反应(） 点眼后没有反应，或眼结膜轻微充血和流泪。 5.5结果判定 5.5.1呈现5.4.1、5.4.2者均判定为阳性反应。 5.5.2呈现5.4.5者均判定为阴性反应。 5.5.3呈现5.4.3、5.4.4者，经过5d～6d后要进行第二次点眼，如仍呈5.4.3、5.4.4者，均判定为阳性 反应。如第二次点眼呈5.4.5者，需进行第三次点眼，如仍呈5.4.5者，判定为阴性反应。 6 鼻疽补体结合试验 6.1 器材准备 6.1.1 酶标仪（含540nm波长 6. 1. 2 离心机（300g以上 温离 6. 1.3 微量反应板（96子 透明 6. 1. 4 温箱。 6. 1.5 振荡器（可放 6. 1. 6 水浴箱。 6. 1.7 血清样品 6. 1.8 生理盐水 6.1.9 稀释液V 见际泵 悬漫见 6. 1.10 绵羊红细 6. 1.11 溶血素 6. 1. 12 补体（见 6. 1.13 阳性血清 A7 6.1.14 鼻疽抗原 6.1.15 标准比色子 附 6.2 主要成分的效价测定 6.2.1溶血素效价测定 6.2.1.1溶血素稀释 6.2.1.1.1 将溶血素稀释成 100的基础液如溶而 石炭酸防腐时，取 nL碳酸加9.9mL稀 释液；如以甘油为保存液，则取 mL甘油加9 6.2.1.1.2按表1所示稀释溶血素 溶血素稀释法 单位为毫升 稀释倍数 成分 1 : 500 1:1000 1:1500 1:2000 1:2500 1:3000 1:3500 1:4000 1:5000 1：100溶血素 0. 2 0. 1 0. 1 0. 1 0. 1 0. 1 0. 1 0. 1 0. 1 稀释液 0. 8 0. 9 1. 4 1. 9 2. 4 2. 9 3. 4 3. 9 4.9 全量 1. 0 1. 0 1. 5 2.0 2. 5 3. 0 3.5 4. 0 5.0 6.2.1.2操作过程 6.2.1.2.1将不同稀释度的溶血素、稀释液、补体、2.5%红细胞悬液按表2所示组分配比加人微量反应 板同一行的第1至第12孔。 6.2.1.2.237℃温育20min。 3