ICS 65.020.01 B 15 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 3623—2020 马铃薯抗南方根结线虫病 鉴定技术规程 Technical code of practice for evalution of potato resistance against southern root-knot nematode(Meloidogyne incognita) 2020-07-27发布 2020-11-01实施 中华人民共和国农业农村部 发布 NY/T 3623—2020 么前 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准由农业农村部种植业管理司提出并归口。 本标准起草单位：中国农业科学院蔬菜花卉研究所 食典通 本标准主要起草人：范振川、杨宇红、徐东辉、谢丙炎凌键 I NY/T3623—2020 马铃薯抗南方根结线虫病鉴定技术规程 1范围 本标准规定了马铃薯抗南方根结线虫的抗性鉴定方法及抗性评价方法。 本标准适用于马铃薯（SolanumtuberosumL.）品种及其育种资源材料对南方根结线虫（Meloidogyne incognita)的抗性鉴定及评价。 2规范性引用文件 NY/T1858.8 番茄抗南力根结线虫病鉴定 术规程 NY/T3063 马铃薯抗晚疫病 3术语和定义 下列术语和定义适用 本文件 3. 1 L 马铃薯南方根结线虫 病 potato southernroot-knot nematodedisease 线里侵染 由南方根结 马铃薯根系及块茎而引起的 种线虫病害 主要症 寸在马 铃薯植株根系 上形成大小不等 的根结 块茎上形成粗糙的瘤状突起（参见附录A） 4试剂、材料及仪 仪器设 除非另有说明，本方 法所用试剂均为分析纯或生化 4.1 0.5%次氯酸钠溶液 4.2将草炭、蛭石 2+ 为感病对照品种：宣薯4号 薯3号、东农303、尤 金、608Kennebec、# 4.4体式显微镜。 ~200 5室内抗性鉴定 5.1马铃薯育苗 马铃薯育苗按NY/T3063的规定执行。选择健康的微型薯或是种薯块在25℃～28℃下避光催芽， 当薯芽长到0.5cm~1.5cm时，播种于直径不小于15cm的育苗钵中，每钵1粒（块），在温度25℃~ 28℃、相对湿度70%～80%条件下于日光温室进行育苗。 5.2接种体制备 将南方根结线虫卵块用0.5%次氯酸钠消毒1min2min，然后用灭菌水冲洗3次，卵块转移至100 目标准筛网上，放人培养皿内，血内加人约10mL灭菌水，使卵块与水面接触。在25℃～28℃下避光孵化 2d～3d，收集二龄幼虫，制备1000条/mL的线虫悬浮液用于接种鉴定（见附录B)。 5.3接种时期 马铃薯苗2叶～3叶期。 5.4接种数量 1 NY/T3623—2020 每株接种1500条（二龄幼虫）。 5.5接种方法 接种时距离苗主根5cm，在3个不同方向各打1个小孔，分别接种0.5mL线虫悬浮液，并轻压封闭 孔口，每个材料接种10株苗，重复3次。 5.6接种后管理 植株在温度25℃～28℃、相对湿度70%～80%，自然光照条件下进行正常管理。 5.7病情调查 5.7.1调查时间 接种后40d~50d调查。 5.7.2调查方法 调查方法按NY/T1858.8的规定执行。调查时轻轻将根部土壤清除，检查每株马铃薯苗根系发病症 状，根据具有根结的根系占所有根系的比例确定病情级别（表1)，并计算病情指数(DI)。 表1病情级别的划分 根系病情级别 根系症状 0 所有根系上没有根结 1 有根结的根系比例为0.1%~10.0% 2 有根结的根系比例为10.1%～25.0% 3 有根结的根系比例为25.1%~50.0% 4 有根结的根系比例为50.1%~75.0% 5 有根结的根系比例为75.1%～100.0% 病情指数(DI)按式(1)计算。 E(s × n) DI = X100 NXS (1) 式中： DI— 病情指数。 各病情级别数值与各病情级别植株数乘积的总和； 各病情级别数值； n 各病情级别病株数，单位为株； N——调查总株数，单位为株； S——最高病情级别数值。 5.8鉴定材料后处理 鉴定完毕后将马铃薯植株、残体及土壤基质集中进行无害化处理。 6田间抗病性鉴定 6. 1 病圃选择 种植前采用直径为4cm的土钻对种植田进行随机取样，每个小区5点，深度20cm，每点从中取100g 采用浅盘漏斗法分离并收集线虫（见附录C）。如果5点样品中根结线虫二龄幼虫数量均大于100条，则 可以选择该田块为鉴定病圃。 6.2田间处理 6. 2. 1 种苗处理 方法同5.1。 6.2.2种植 每个小区6m²～8m²，在田间每个小区种植2行，株距40cm，行距50cm，每个品种30株苗，重复3 次，小区随机区组排列，每10个品种设1个感病对照。 2 NY/T3623—2020 6.3病情调查 6.3.1调查时间 在种植50d~60d后进行病情调查。 6.3.2调查方法 方法同5.7.2。 7抗性鉴定 7.1抗性评价标准 抗性标准划分为5个级别，见表2。 表2马铃薯对南方根结线虫病抗性的评价标准 病情指数(DI) 抗性评价 DI=0 免疫(IM) I>0 高抗(HR) 10<DI≤30 抗(R) 30<DI≤60 感病(S) DI>60 高感(HS) 7. 2 2鉴定有效性判别 7.2.1当感病对照材料的病情指数大于等于60(DI≥60)时，该批次抗性鉴定判定为有效， 7.2.2在田间抗性鉴定为免疫、高抗、抗病的，需要进行室内人工盆栽接种重复鉴定，并以人工接种测试 鉴定结果评价抗性类别。 7.2.3在抗性鉴定的3次重复中，如果3次重复鉴定中鉴定出现差异，以较高发病级别指标优先确定；如 果评价级别相差2个级别以上（含2个级别），则需要做重复抗性鉴定。 7.3抗性评价 依据马铃薯鉴定材料3次重复鉴定的病情指数（DI），按照表2确定马铃薯材料对南方根结线虫的抗 感病水平，对鉴定材料进行抗病性评价，写出正式鉴定报告，并附原始调查记录资料（参见附录D）。 3 NY/T3623—2020 附录A (资料性附录） 南方根结线虫及马铃薯地下部症状 A.1学名和形态描述 A.1.1 学名 南方根结线虫（Meloidogyneincognita）。 A.1.2形态描述 南方根结线虫幼虫呈细长蠕虫状，体长340μm～460μm，体宽13μm~15μum。雌雄异形，雌成虫梨 形，埋藏于寄主组织内，大小（440～1300）μm×（325～700）μm。食道垫刃型，中食道球发达。会阴花纹 背弓高，呈方形，侧线明显，平滑至波浪状，线纹细至粗状，有时呈锯齿状，尾端常具轮纹（图A.1）。雄成虫 线状，尾端稍圆，大小（700~1900)μm×（30~36)μm；卵长椭圆形，大小约83μmX×38μm。 a)卵 b）二龄幼虫 c）雌成虫 d）雌成虫会阴花纹墨线图 图A.1南方根结线虫的形态 A.2马铃薯地下部症状 南方根结线虫侵染马铃薯的根系和块茎，在根系上形成大小不等的根结，在块茎上形成瘤状突起，且 表面粗糙。 4 NY/T3623—2020 图A.2马铃薯根部症状及块茎初期症状