ICS 67.120.01 X 22 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 3608—2020 畜禽骨胶原蛋白含量测定方法 分光光度法 Determination of collagen content in livestock and poultry bone- Colorimetric method 2020-03-20发布 2020-07-01实施 中华人民共和国农业农村部 发布 NY/T3608—2020 言夕 本标准由农业农村部乡村产业发展司提出 本标准由农业农村部农产品加工标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：中国农业科学院农产品加工 、青岛味之源食品有限公司、内蒙古草原鑫河食 品有限公司、山东东阿东盛阿胶产品科技开发有限公司、山东荣信水产食品集团股份有限公司、得利斯集 团有限公司。 本标准主要起草人：张 郑乾坤。 NY/T 3608—2020 畜禽骨胶原蛋白含量测定方法分光光度法 1范围 本标准规定了分光光度法测定畜禽骨胶原蛋白含量的原理、试剂及材料、仪器和设备、分析步骤、计算 和精密度等。 本标准适用于以畜禽动物骨（包括鸡、猪、牛、羊）为原料，经提取生产的蛋白产品中胶原蛋白含量的 测定。 2术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 2. 1 胶原蛋白换算系数 conversioncoefficientofcollagen 不同骨源或样品中胶原蛋白含量与羟脯氨酸含量的比值。 3原理 羟脯氨酸是胶原蛋白的特征性氨基酸，不同畜禽骨胶原蛋白的羟脯氨酸含量和胶原蛋白含量呈稳定 的相关性。本方法用分光光度法测定畜禽骨胶原蛋白中羟脯氨酸含量，乘以对应的换算系数，得到胶原蛋 白含量。 4试剂及材料 如无特别说明，所用试剂均为分析纯。水为蒸馏水或去离子水。 4.1试剂 4.1.1盐酸(HCI)。 4. 1. 2 一水柠檬酸(CHgO·HzO)。 4.1.3氢氧化钠(NaOH)。 4.1.4无水乙酸钠(CHsCOONa)。 4.1.5 三水·N-氯-对甲苯磺酰胺钠（氯胺T)（CHCINNaO,S·3HzO)。 4. 1. 6 正丙醇(C.H,OH)。 4. 1.7 对二甲氨基苯甲醛(CHnNO)。 4. 1. 8 3高氯酸（HCIO）。 4.1.9异丙醇(C3HgO)。 4.1.10 羟脯氨酸（CsH.NO3），纯度≥99%。 4.1.11乙酸(CH,O3)。 4.2试剂配制 4.2.1盐酸溶液(6mol/L) 取500mL盐酸加水稀释至1000mL，混匀。 4.2.2缓冲溶液(pH=6.8) 包括下列组分： a）26.0g一水柠檬酸； b）14.0g氢氧化钠； NY/T3608—2020 c）78.0g无水乙酸钠。 用500mL水溶解上述试剂并转人1000mL的容量瓶，加人250mL正丙醇，用水定容，用乙酸调节 pH至6.8。该溶液于4℃避光，可稳定保存14d。 4.2.3氯胺T溶液(0.05mol/L) 分溶解，现用现配。 4.2.4显色剂 称取10.0g对二甲氨基苯甲醛于烧杯中，用35mL高氯酸溶液溶解，缓慢加人65mL异丙醇，混匀， 现用现配。 4.2.5羟脯氨酸标准溶液 4.2.5.1标准储备液 PUBL 称取50mg（精确到 10 溶液（4.2.1)，用水定容 至刻度，混气即得500ug/m 避光保存，有效期30d。 V 4.2.5.2标准工作液 D Q 500mL容量瓶中，用水 刻度配带 制成 0μg/mL标准工 作溶液。用水定 得标准 工作液浓度依次 容 ig/min mL、2. 0 μg/mL、 5.0μg/mL。现用现配 S 5仪器和设备 RAL 5.1 pH计。 5.2分析天平：感 5.3水解管：耐月 5.4干燥箱： 压 5.5水浴锅：可控 5.6具塞试管 C 5.7涡旋振荡器 R 5.8 可见光/紫外分为 光度计 6分析步骤 6.1羟脯氨酸标准曲线的绘制 6.1.1取4.0mL羟脯氨酸标准工作液（4. 管中，加人 mL氯胺T溶液（4.2.3），混 合后于室温下放置20min。 6.1.2加人2.0mL显色剂于具塞试管中，用涡旋振荡器充分混合。 6.1.3将具塞试管迅速放60℃水浴中，保持20min。 6.1.4取出具塞试管，用流动水冷却3min5min，在室温下放置30min。 6.1.5以水作为空白，于558nm处用分光光度计测定吸光值，平行测定3次，取均值。 6.1.6以标准溶液中羟脯氨酸含量（μg/mL)为横坐标、以扣除了空白的标准工作液的吸光度为纵坐标 绘制标准曲线，或求线性回归方程。再次分析应重新绘制标准曲线。 6.2羟脯氨酸含量测定 6.2.1样品制备 6.2.1.1对块状样品需磨碎或者剪碎备用，粉末状、膏状、液体样品直接用于测定。 6.2.1.2称取30mg样品（精确至0.1mg)，置于水解管中，避免试样粘在水解管壁上。 2 NY/T3608—2020 6.2.2水解 量取20mL盐酸溶液（4.2.1），加人水解管内，密封，于干燥箱中105℃恒温水解20h。 6.2.3测定 6.2.3.1将全部溶液移至100mL容量瓶中，分别用10mL盐酸溶液（4.2.1)和10mL水清洗水解管全 部转移样品至容量瓶中，用水定容至刻度。 6.2.3.2取1mL～4mL上述溶液（6.2.3.1)于具塞试管中，用水准确稀释一定倍数，稀释后羟脯氨酸的 浓度为0.5μg/mL～5.0μg/mL。取4.0mL稀释溶液，按照标准曲线绘制中同样步骤操作，测定吸光 度，并通过6.1.6所得线性回归方程计算检测溶液中羟脯氨酸的含量。 注：稀释倍数取决于样品中羟脯氨酸的含量，通常情况下，稀释倍数在0倍～10倍。 7计算 7.1羟脯氨酸含量计算 试样中羟脯氨酸含量按式(1)计算。 X100 (1) mX1000 式中： X 试样中羟脯氨酸的含量，单位为百分号（%）； c 由标准曲线得到的试样溶液中羟脯氨酸的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）； m 试样质量，单位为毫克（mg）； 100 样品水解后定容至容量瓶的体积（6.2.3.1），单位为毫升（mL）； n 水解样品在具塞试管中的稀释倍数（6.2.3.2)； 1000 换算系数。 计算结果保留至小数点后2位。 7.2胶原蛋白含量的计算 按式(2)计算。 Y=XXF （2) 式中： Y—试样中胶原蛋白的含量，单位为百分号（%）； X一试样中羟脯氨酸的含量，单位为百分号（%）； F—胶原蛋白换算系数；鸡、猪、牛和羊骨的胶原蛋白换算系数分别为7.4、7.7、7.9和7.6。 8精密度 在重复条件下获得的2次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。 3 NY/T 3608-2020 专业行业协维究 畜禽骨胶原蛋白含量测定方法分光光度法 NYT3608—2020 * 中国农业出版社出版 （北京市朝阳区麦子店街18号楼） （邮政编码：100125 网址：www.ccap.com.cn) 北京印刷一厂印刷 新华书店北京发行所发行各地新华书店经销 * * * 开本880mmX1230mm1/16 印张0.5 字数10千字 2020年6月第1版 2020年6月北京第1次印刷 书号：16109·8097 定价：12.00元 版权专有 侵权必究 NY/T3608-2020 举报电话：（010）59194261 NY/T 3608-2020 专业行业协维究 畜禽骨胶原蛋白含量测定方法分光光度法 NYT3608—2020 * 中国农业出版社出版 （北京市朝阳区麦子店街18号楼） （邮政编码：100125 网址：www.ccap.com.cn) 北京印刷一厂印刷 新华书店北京发行所发行各地新华书店经销 * * * 开本880mmX1230mm1/16 印张0.5 字数10千字 2020年6月第1版 2020年6月北京第1次印刷 书号：16109·8097 定价：12.00元 版权专有 侵权必究 NY/T3608-2020 举报电话：（010）59194261