ICS 67 B 20 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 3566—2020 粮食作物中脂肪酸含量的测定 气相色谱法 Determination of fatty acids in grain crops- Gas chromatography 2020-03-20发布 2020-07-01实施 中华人民共和国农业农村部 发布 NY/T3566—2020 前品誉 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起算。 务平台 本标准由农业农村部种植业管理司提出并归口。 本标准起草单位：中国水稻研究所、农业农村部稻米及制品质量监督检验测试中心。 本标准主要起草人：方长云、孙成效、胡贤巧、朱智伟、于永红、章林平、邵雅芳、段彬伍。 1 NY/T3566—2020 粮食作物中脂肪酸含量的测定 气相色谱法 1范围 本标准规定了粮食作物中脂肪酸含量的气相色谱检测方法， 本标准适用于稻米、小麦、玉米、豆类、薯类和小米等粮食作物中脂肪酸含量的测定。 本标准各脂肪酸的定量限均为0.002g/100.g。 2规范性引用文件 风是注期的甲文件 下列文件对本文件的引用是必 ，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文 GB/T6682 3原理 乙酰氯与甲醇反 立得到的盐酸甲醇使试样中的脂肪和游离脂肪酸甲 苯提取后，经气相色 谱仪分离检测，外 外标 法定 AL 4试剂 除非另有说明， 在好林 中仅使用分析纯的试剂和符合GB/T6682规定的 4.1试剂 U 4.1.1甲醇（CH OH):色谱纯 ACENT 4.1.2甲苯（C 4.1.3乙酰氯C H:Cl 4.1.4无水碳酸钠 4.2试剂配制 R 4.2.1乙酰氯甲醇溶 10% 体积比） 量取 确 取10.0mL乙酰氯 逐滴缓慢加入，不断搅扭 多，并用甲醇定 容至 100 mL容量瓶中,临用时现配。 警告：乙酰氯具有刺激性和腐蚀性，在配制乙酰氯甲醇溶液时应不断搅拌以防止喷溅，注意防护，建议在通风橱中操作。 4.2.20.5mol/L碳酸钠溶液 g碳酸钠，用水溶解，并稀释定容 100 mL。 4.3标准品 4.3.1各脂肪酸甘油三酯标准品：纯 4.3.2单个脂肪酸甘油三酯标准工作液：根据样品中脂肪酸含量称取适量单个脂肪酸甘油三酯置于 10mL容量瓶中，用甲苯定容，分别得到不同脂肪酸甘油三酯的单标溶液，储存于一20℃以下冰箱，有效期 6个月。 5仪器 5.1气相色谱仪，带有氢火焰离子检测器(FID)。 5.2天平，感量为0.01mg。 5.3离心机，转速≥5000r/min。 5.4水浴锅。 5.5氮吹仪。 1 NY/T3566—2020 5.6 6冷冻干燥机。 5.7谷物粉碎机。 5.8匀浆机。 5.9螺口玻璃管15mL。 5.10具塞离心管50mL。 5.110.45μm滤膜，有机相。 6分析步骤 6.1试样制备 6.1.1薯类试样 将薯类试样用干净纱布轻轻擦去样本表面的附着物，或用清水清洗干净并用滤纸吸干水分，切碎，用 四分法取样或直接放入匀浆机中捣成匀浆，经冷冻干燥后，用谷物粉碎机粉碎，过0.42mm试验筛，混匀， 放人聚乙烯瓶中一20℃～一16℃条件下保存，备用。 6.1.2其他试样 稻米等其他试样：除去可见杂质，混匀缩分至约50g，谷物粉碎机粉碎，过0.42mm试验筛，混匀，放 入聚乙烯瓶中一20℃～一16℃条件下保存，备用。 6.2试液制备 称取干试样0.5g（精确至0.001g)于15mL螺口玻璃管中，加入5.0mL甲苯（4.1.2)，再加入6.0mL 的乙酰氯甲醇溶液（4.2.1)，充氮气后，旋紧螺旋盖，振荡混合后置于80℃水浴2h，其间每隔20min取出 振摇10s，取出冷却至室温。将试液转移至50mL离心管中，分别用3.0mL碳酸钠溶液（4.2.2)清洗玻 璃管3次，合并碳酸钠溶液于50mL离心管中，摇匀，以5000r/min离心10min，取适量上清液，过0.45 um微孔滤膜后，待测。 6.3标准测定液制备 准确吸取脂肪酸甘油三酯标准工作液0.5mL（4.3.2)于15mL螺口玻璃管中，加人4.5mL甲苯，其 他操作步骤同6.2。各脂肪酸甘油三酯转化为脂肪酸的系数见附录A。 6.4测定 6.4.1气相色谱参考条件 a) 色谱柱：HP-88毛细管柱100mX250μm×0.2um，或性能相当的柱子 b) 载气及流速：氮气，纯度≥99.999%，流速为1.0mL/min； c) 分流比：10：1； d) 进样量：1.0μL； e) 进样口温度：250℃； 检测器：FID，温度250℃； g) 柱温箱升温程序见表1。 表1柱温箱升温程序 阶段 升温速度，℃/min 下一温度，℃ 保持时间，min 初始 120 0 第一阶 30 170 2 第二阶 6 200 2 第三阶 20 220 0 第四阶 2 230 5 第五阶 1 232 2 第六阶 3 240 5 2 NY/T3566—2020 6.4.2测定 分别准确吸取1.0μL脂肪酸甘油三酯标准测定液及样品待测液注人色谱仪，进行测定，以色谱峰面 积定量。 7 结果表示 试样中各脂肪酸含量计算均以质量分数计，单位以克每百克（g/100g)表示，按式（1)计算。 A,XmsiXF X1000 (1) AsiXmX20 式中： w 试样中各脂肪酸的含量，单位为克每百克（g/100g）； A, 试样测定液中某个脂肪酸的峰面积； msi 标准工作液中某个脂肪酸甘油三酯的质量，单位为克（g）； F, 各脂肪酸甘油三酯转换为脂肪酸的换算系数； Asi 标准测定液各脂肪酸甲酯的峰面积； m 试样的质量，单位为克(g)； 1/20 测定液中各脂肪酸甘油三酯含量稀释的倍数。 以重复条件下获得的2次平行测定结果的算术平均值表示，计算结果保留小数点后3位。 8精密度 当样品含量<0.1g/100g时，在重复性条件下获得的2次独立测定结果的绝对差值不大于这2个测 定值的算术平均值的20%。 当样品含量≥0.1g/100g时，在重复性条件下获得的2次独立测试结果的绝对差值不大于这2个测 定值的算术平均值的10%。 3 NY/T3566—2020 附录A （规范性附录） 各脂肪酸甘油三酯转化成脂肪酸的转换系数 各脂肪酸甘油三酯转化成脂肪酸的转换系数见表A.1。 表A.1 各脂肪酸甘油三酯转化成脂肪酸的转换系数 序号 脂肪酸名称 E,转换系数 指肪酸名称 F,转换系数 1 Cg.。辛酸 0.91 花生 0.9609 2 Clo.o葵酸 亚麻酸 0.9559 3 Cn:十一碳酥 936 烯酸 0.9608 C12:0月桂酉 940·5 0.9560 5 Ci3:0十三 碳酸 T6 碳酸 0.9628 6 Ci4.o肉 豆蔻酸 0. 947 3 24 0.9605 7 Cl4·1n 肉豆 10-9170 0.964 2 8 Cis. 五 炭酸 Q·9502 0.9598 9 Cis 0.949.9 0.9639 10 Ci6 棕 同酸 0.952.0 干碳 0.9598 11 C 宗榈油酸 0.9525 花生四烯 0.9597 12 七碳酸 0.9552 三碳酸 0.965 8 C 13 C 十七族 布酸 0:954-9 0.9638 14 C 脂酸 0.9573 丰四碳酸 1.000 2 15 反式油酸 33 0.9592 16 C 油酸 0.9666 17 Cis 亚油酸 0.956-8 0.962 4 18 Ci18 式亚油 注：F; 脂肪酸 油之酯转化成脂肪酸的转换系数 NY/T3566—2020 附录B （资料性附录） 35种脂肪酸甲酯标准溶液参考色谱图 35种脂肪酸甲酯标准溶液参考色谱图见图B.1。 pA 40 35 30 25 892223 20 15 10 15 20 25 30 t,min 说明： 1 Cg:0; C15: 0; 15- C18: 1n9e; 22- C18: 3m3 ; 29 C20 : 4n6; Clo:0; C15 : In5 ; 16 C18 : 1ngt; 23 C21 :0; 30- C23 : 0; 3- C11 : 0; 10 C16:0; 17 C18: 2n6ce; 24- C2012; 31 C22:2; C12:0; 4- 11 C16 : 1n7 ; 18 C18 2n5t; 25 C22:0; 32 C24 + 0; C13:0; 12 C17:0; 19 C20:0; 26 C20 : 3n6 ; 33 C20 : 5n3 ; 6- Ci4:0; 13 C17 : 1n7 ; 20 C18 1 3n6; 27- C22 : 1ng ; 34 C24 : 1; C14 : 1n5 ; 14 C18:0; 21 C20 :1; 28 C20 3n3 ; 35 C22: 6n3。 图B.1 35种脂肪酸甲酯标准溶液参考色谱图 5