ICS 65.020 B 17 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 3275.12018 化学农药 天敌昆虫慢性接触毒性 试验准则 第1部分：七星瓢虫 Chemical pesticide-Guideline for chronic contact toxicity to insect natural enemy- Part 1:Coccinella septempunctata 2018-07-27 发布 2018-12-01实施 中华人民共和国农业农村部 发布 NY/T 3275.1—2018 前言 NY/T3275《化学农药 天敌昆虫慢性接触毒性试验准则》,拟分为2个部分： 第1部分：七星瓢虫； 第2部分：赤眼蜂。 本部分为NY/T3275的第1部分。 本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任 本部分由农业农村部种植业管理司提出并归口。 本部分负责起草单位：农业农村部农药检定所、中国矿业大学(北京)。 本部分主要起草人：于彩虹、周欣欣、程沈航、薛明明、姜辉、瞿唯钢、谭丽超、卜元卿。 工 NY/T 3275. 1—2018 化学农药 天敌昆虫慢性接触毒性试验准则 第1部分：七星飘瓢虫 1范围 本部分规定了天敌瓢虫慢性接触毒性试验的试验方法、试验操作、数据处理、质量控制、试验报告等 的基本要求， 本部分适用于为化学农药登记而进行的天敌瓢虫慢性接触毒性试验,其他类型农药可参照使用。 P B 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用 的 期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引 用文 其最新 NY/T 3088—2017 天敌昆 急性接触毒 3 术语和定义 下列术语和定 用于本 文话 3. 1 供试物 test subs 试验中需要测试的 的物质 3. 2 成虫前半致死剂量 在成虫前,引起 供试 3.3 50%效应剂量 lianeff med 在成虫羽化后,产卵量 4试验概述 采用药膜法处理瓢虫幼虫 将不同浓度的供试物药液定量 分布在 积的玻璃管(板)或叶 片表面,将试验用瓢虫幼虫放人其中(上)胁迫暴露每天观察和记录瓢虫的中毒症状和死亡数,直至处 理组成虫羽化。将同一处理组中存活的成虫集中收集在合适的容器中完成交配,期间饲喂足量的蚜虫， 在产卵达到稳定状态后,统计产卵量；将卵统 -收集储存,在人工气候培养箱中进行孵化,最后统计幼虫 的孵化率。 5试验方法 5.1试验材料 5.1.1供试生物 选用孵化3d～4d的七星瓢虫二龄幼虫作为供试生物。为获取相同虫龄的幼虫试虫，应将收集到 化之前,所处的环境与试验环境始终相同，收集相同时间孵化的幼虫作为测试生物。 1 NY/T 3275. 1—2018 5.1.2食物的选择 各种新鲜存活的蚜虫,都可以用来饲养瓢虫幼虫和成虫。在收集蚜虫饲喂瓢虫幼虫时应避免成蚜。 5.1.3供试物溶解 农药制剂、原药或纯品。制剂用蒸馏水溶解，原药或纯品用丙酮等溶剂溶解。原药可用少量对瓢虫 毒性小的有机溶剂、乳化剂或分散剂等助溶。 5.1.4供试物浓度设置 根据测试要求设计一系列浓度梯度,以获得供试物对繁殖力产生50%影响的浓度(ER5）。如在瓢 虫急性试验的基础上考察供试物对繁殖力的影响，选择成虫前死亡率低于60%的试验组进行慢性试 验。如做限量（度)试验，浓度为田间最大推荐用量乘以多次施药因子（MAF）。 5.1.5主要仪器及设备 智能人工气候培养箱。 天平。 容量瓶。 移液器。 玻璃板。 定量的喷雾装置(适用玻璃板药膜法）。 玻璃管。 滚管机。 环行防护罩。 培养血。 飘虫饲养装置等。 5.1.6试验条件 5.1.6.1温度 瓢虫的饲养温度范围应在23℃～27℃。 5.1.6.2湿度 相对湿度控制应在60%～90%。 5.1.6.3光照 光照周期（光暗比)为16h：8h，光照强度不低于1000lx。 5.2试验操作 5.2.1处理设置 羽化前死亡率测试需要设参比对照组(本标准选用乐果作为参比物质)和空白对照组。供试物用有 机溶剂溶解时,需设溶剂对照组。处理组和对照组均设置3个重复,每个重复至少10头瓢虫幼虫。参 比对照组不需要进行繁殖力测定。 5.2.2羽化前死亡率测试 试验采用玻璃药膜法，将孵化后3d～4d的二龄幼虫接人施药后的玻璃管内或玻璃板上，期间用毛 刷将叶片上的足量鲜活的蚜虫轻轻扫人暴露装置，对瓢虫进行饲喂,并定期对瓢虫排泄物和蚜虫残骸进 行清理，保证瓢虫和药膜的充分接触。药膜的制备方法按照NY/T3088一2017中4.2.1.2的规定 执行。 5. 2. 3 繁殖力测定 当对照组中存活的幼虫至少有90%的成虫羽化出来时，用显微镜确定其性别，遗弃孵化晚的瓢虫。 飘虫的性别比例尽可能相同。对照组的飘虫数目应与处理组相似。折叠滤纸或是黑色的纸，滚成圆筒 2 NY/T 3275.1—2018 状置于容器上，引诱飘虫将卵产在其上，纸片每天都需要更换。容器的底部需要衬上滤纸以便于吸收残 留物，方便容器的清理。每周更换一次培养容器，防止疾病产生。当瓢虫置于培养容器之后，至少每升 容器提供3株～5株蚜虫滋生的植物或植物枝条作为食物来源。当对照组的瓢虫开始产卵1周并趋于 稳定后，开始进行繁殖力的评估。在接下来的2周，产卵基质需要每天更换，将包含有卵的滤纸和叶片 区域剪掉并收集起来，在相同试验条件下进行储存直到幼虫孵化,并记录孵化率。每天记录瓢虫的死亡 数目、产卵量以及卵的孵化数目。 试验也可以将瓢虫成对地转入皮氏培养皿中，每个培养皿中放置一对。提供感染足够多蚜虫的叶 片作为食物，或者直接用毛刷将叶片上的蚜虫轻轻扫入培养皿中。当对照组的瓢虫开始产卵1周后，在 接下来的2周内进行繁殖力的评估。 5.2.4观察与记录 每天观察并记录暴露于玻璃管(板)或叶片的瓢虫的中毒症状和死亡数,将死亡的幼虫、蛹与行为异 常的一起记录(如活动不灵活的、抽搐的)直至化。化蛹后，继续保持在药膜管内观察至成虫羽化， 计算成虫羽化率,未羽化成虫均计人死亡虫数。如果幼虫或蛹的减少是由于操作失误(如幼虫逃逸或意 外致死），成虫前死亡率的计算就需要用初始数据减去减少的幼虫。 6数据处理 6.1成虫前死亡率 在试验中逃逸或意外致死的幼虫(蛹)计算时不需计人。处理组的死亡率要按式(1)通过对照组进 行修正。 M=( X100... (1) (100- 式中： M—相对死亡率,单位为百分率(%); -对照组死亡率的百分比（去掉%号）； 处理组死亡率的百分比（去掉%号）。 t 6.2单头雌性成虫有效产卵量 单头雌性成虫有效产卵量(F)按式(2)计算。 F=nXh (2) 100 式中： F一一单头雌性成虫有效产卵量,单位为粒； n—单头雌性成虫产卵量,单位为粒; h 一—孵化率(去掉%号)。 6.3相对繁殖性能 相对繁殖性能(R)的修正按式(3)进行。 R = (3) F(c) 式中: R 一相对繁殖性能,单位为百分率(%); F(c)一对照组的有效单虫产卵量,单位为粒; F(t)一一处理组的有效单虫产卵量,单位为粒。 7质量控制 质量控制条件包括： 3 NY/T 3275. 1—2018 a) 成虫羽化之前空白对照组死亡率不能超过20%； b) 整个试验过程要保证提供足够的健康活跃蚜虫作为瓢虫食物； 对照组期的幼虫羽化率不低于85%,对照组成虫2周单雌产卵量不低于400头,对照组卵孵 化率不低于70%； (P 参比物质试验中,在0.20 g a.i. /hm²乐果剂量下,测试瓢虫幼虫死亡率在 40%～90%,则该 种群可用于试验； e) 为了保证慢性阶段试验数据的准确性，根据试验情况1d之内尽量多次检查产卵量和孵化率。 8 试验报告 试验报告应包括下列内容： a) 告构式、CAS号、纯度、基本理化性质、来 源等； b) 供试生物名称 c) 试验条件， d) 试验方法 所用装置 e) 试验用至 f) 对照组 及处 理组是 出现死立 试验 质量 空制象件 g) 甜述 h) 及毒性 TURA GRI NY/T 3275. 1—2018 参考文献 [1]吴红波，张帆，王素琴，等，2017.几种常用杀虫剂对异色飘虫的敏感性测定[J].中国生物防治学报，23(3)：213-217. [2]王秀梅，侯志广，李天昊，等,2011.阿维菌素对异色飘虫不同发育阶段的影响[J].农药，50(10)：737-739. [3JSchmuck R,Candolfi M P, Kleiner R, et al, 2000. A laboratory test system for assessing effects of plant protection products on the plant dwelling insect Coccinella septempunctata L. (Coleoptera: Coccinellidae)[M]//M P Candolfis, Bliumel R,Forster F M,et al. Guidelines to evaluate side-effects of plant protection products to non-target arthropods. IOBC/WPRS,Gent. [4JSimelane D O, Steinkraus D C, Kring T J, 2008. Predation rate and development of Coccinella septempunctata L. influenced by Neoz