ICS 65.020.30 B 43 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 3186—2018 羊冷冻精液生产技术规程 Code of practice for sheep and goat frozen semen production 2018-03-15 发布 2018-06-01实施 中华人民共和国农业部发布 NY/T 3186—2018 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由农业部畜牧业司提出。 本标准由全国畜牧业标准化技术委员会归口（SAC/TC274)。 本标准起草单位：全国畜牧总站、中国农业大学、南京农业大学、内蒙古自治区家畜改良工作站、贵 州省畜禽遗传资源管理站。 本标准主要起草人：刘丑生、朱芳贤、赵俊金、罗海玲、陆汉希、格力格桑、毛凤显、许海涛、孟飞、韩 旭、陆健。 NY/T 3186—2018 羊冷冻精液生产技术规程 1范围 本标准规定了羊冷冻精液生产的基本要求、采精技术、精液处理、精液冷冻、质量检验、包装、储存和 记录。 本标准适用于绵羊和山羊冷冻精液生产 2规范性引用文件 件。凡是不注日期的引用文作 文件 GB20557- 06 GB/T3039 牛冷 装、标签、贮存和运 3 术语和定义 下列术语和定 本文件 3. 1 原精液 aculated semen 采集后未经 稀释处 的精液 [GB 23238 2009 3. 2 采精 semer n collect 使用采精器 认获得 3. 3 精子密度 mcor 单位体积精液 的精子 [GB/T 25172 010定 4 基本要求 4.1室内环境 4.1.1室内要求相对密封。顶棚和墙壁要密封,便于清洁卫生 4.1.2室内保持清洁卫生，定期紫外线消 4.1.3室内具有控温设施。 4.2仪器设备 4.2.1仪器设备的配备及性能能够满足冷冻精液生产的需要。 4.2.2仪器设备应定期进行维护保养，保证运行正常，精密仪器设备应保存好使用和维护记录。 4.2.3计量器具（如温度计、天平、量筒、移液器）、恒温箱、水浴箱、显微镜恒温载物台和压力容器等应 按照规定时间进行检定或校准。 4.2.4所有仪器设备至少每周清洁一次，不用时加盖防护罩。 4.2.5仪器设备使用由操作人员按照相关使用说明书熟练操作。 1 NY/T 3186—2018 4.3器具与清洗消毒 4.3.1冷冻精液生产过程中需要相关的器具应配置齐全。 4.3.2所用器具应保持使用前后的清洁卫生，不同材质的器具应采用不同的洗涤和消毒方法，见附 录 A。 4.4稀释液的配制 商品稀释液按照产品说明书配制。自配的稀释液配方及配制方法参见附录B。 5采精技术 5.1采精环境 采精室应保持安静，地面清洁、防滑，保持舒适的温度，光线良好。 5.2台羊 选择性情温顺、肢蹄强健的健康母羊或假台羊，也可以选用发情期的母羊做台羊。并保定于采精架 内，台羊的后躯应清洁。 5.3采精公羊 定期剪短包皮周围长毛，采精前清洗公羊包皮。 5.4采精器 安装好的采精器，应达到结合严密，不漏水气，适量注人温水。采精时内胎温度应达到38℃～ 43℃,有一定压力,外口呈三角形状,有一定的润滑度。集精杯温度维持在33℃～35℃。 5.5公羊的性准备 通过听觉、视觉、嗅觉或人为抑制等方法，使公羊做好性准备后开始采精。 5.6采精步骤 5.6.1采精器套上保护套。 5.6.2采精员位于公羊一侧，当公羊爬跨上台羊时，一手托包皮，另一手持假阴道将公羊阴茎导入假阴 道口内，待公羊完成射精动作后，随公羊阴茎而下，移出采精器。 5.6.3采精器口朝斜上方放气，待精液流人集精杯后取下，迅速送至精液处理室。及时清洗消毒采精 器等器械。 5.6.4成年公羊每周采精两次，每次可连续采精两回(间隔20min～30 min)，可根据品种和个体差异 酌情调整。 6精液处理 6.1精液标识 精液送至精液处理室立即做好标识,放置在32℃～34℃恒温水浴箱中。 6.2精液检查 6.2.1外观 色泽乳白色或淡黄色，无异物。 6.2.2采精量 6.2.2.1测量 通过刻度管上的刻度值测量精液的量值（mL)。 6.2.2.2称重 集精杯(内有精液)放置天平称取重量（g）,减去集精杯净重（g）,再除以1.03（精液比重）,即为精液 的量值（mL）。 2 NY/T 3186—2018 6.2.3密度 按比色法进行密度测定，单位为108个每毫升。 6.2.4活力 活力检查方法见GB20557—2006中A.3的规定。 6.3精液评价 外观正常、密度大于等于6X108个/mL、活力大于等于65%的精液进行后续处理。 6.4稀释、平衡 6.4.1稀释量 稀释液的任何添加量均应保证每一剂量中解冻后所含前进运动精子数为0.3亿个以上。 6. 4. 2 一步稀释、平衡法 等温稀释液缓慢加人 在32℃～34℃水浴中 暂存10min后加稀释浓 方法一：10min 后在 亍封装 后的 下透明的容器内，将容器放人 3℃～5℃的低温柜中平 衡 34℃水的容器中 放人后送 3℃ 5℃低温柜内降 温平衡,2h后 容器 器中加冰 快促使其快速降至 平衡温度，40min后在低 柜中进 行细管封装。空细管 亦应降至 3℃ S s 6. 4.3 两步 E 稀释 、平衡法 将等温的 勺第 匀，将稀释精浓 放又 定容器的32℃～ 34℃水浴中 c的低温柜中降 液同时放至 3℃ 的低温柜中。水浴降温 并 下平衡 1. 5 h 后 可在水 液至稀释总量。 完成稀释后继缪 平衡40 工 6.5标识 GENT 冷冻精液细 管土应 7精液冷冻 7.1码架 R 平衡、封装后的细 操作者，封口端远 7.2冷冻方法 7.2.1程控冷冻法 冷冻仪与低温平衡柜应尽量靠近,设置好最佳冷冻程序,严格按照冷冻仪的操作程序执行。 7.2.2自制冷冻箱法 冷冻箱的深度应在 50 cm以上,能够保证箱内温度控制在一80℃～一120℃,细管熏蒸 8 min 后投 入液氮。 7.3精液收集 冷冻完成后，冷冻精液按照羊号做好标识，投人低温容器液氮中保存。 8质量检验 8.1.检验项目 作为常规检验进行冷冻后精子活力的检查，具体到每只公羊该批次的产品。质量不合格的废弃，合 格的包装人库保存。 3 NY/T 3186—2018 8. 2 2精液解冻 精液解冻方法按照GB20557—2006中A.2.2.1的规定执行。 8.3精子活力 8.3.1精子活力的检验方法按照GB20557—2006中A.3.2和A.4.4.1的规定执行。 8.3.2精子活力大于等于30%。 9包装和储存 9.1包装 在液氮内将细管分类装人冻精储存管，包装后的细管其棉塞端朝下。有明确标记。包装袋标签要 求标记如下内容：生产单位、品种、种羊号、数量、解冻后精子的活力。包装袋规格按照GB/T30396 2013中4.1.2的规定执行。 9.2储存 精液储存按照GB/T30396一2013中第7章的规定执行。 10 ）记录 精液生产做好相应记录，记录内容见附录D。 4 NY/T 3186—2018 附录A (规范性附录) 器具清洗消毒 A.1玻璃器血 A.1.1首次使用的玻璃器血先用自来水刷洗,除去灰尘。放人5%稀盐酸中浸泡12h,取出后立即用 自来水冲洗，再用洗涤剂刷洗（或用超声波洗涤器清洗15min～30min)，自来水冲干净后放在电热干燥 箱中烘干。用清洁液（重铬酸钾120g：浓硫酸200mL：蒸馏水1000mL)浸泡12h后捞出器血立即用 自来水反复冲洗，直至光亮、无水滴附着为止，用蒸馏水冲洗3次～5次，烘干，用锡箔纸包裹进行高压 消毒处理(120℃,20min),烘干备用。或采取高温干燥消毒处理,即将洗净的玻璃器血送人高压电热干 燥箱，加热至160℃后再恒温1.5h～2h，自然冷却后待用。 A.1.2使用过的玻璃器血可直接泡人洗涤剂溶液中，浸泡后刷洗干净烘干消毒备用。使用多次的器 血用清洁液处理，后续步骤同A.1.1。 A.2采精器 采精器使用前后,用水冲去表面污物,把内胎拆下,在加有洗涤剂的温热水中浸泡 10 min以上,用 长毛刷刷洗，用水冲洗干净，再用蒸馏水逐个冲洗。将洗净的假阴道外套放在架子上，其上覆盖两层清 洁纱布，干燥备用。内胎悬挂干燥备用。新内胎或长期未用的内胎也要浸泡刷洗。使用前用长柄镊子 夹75%酒精棉球由内向外旋转彻底消毒内胎,待酒精挥发后，用生理盐水棉球多次擦拭。 A.3集精杯（瓶）、集精杯外套和盖子等 玻璃集精杯(瓶)清洗消毒同A.1。塑料集精杯(瓶)、集精杯外套和盖子使用后，用水冲去表面污 物,然后在加有洗涤剂的温热水中刷洗,用水冲洗干净，再用蒸馏水逐个冲洗，洗净放在架子上，其上覆 盖两层清洁纱布，干燥备用。塑料集精杯(瓶)用75%酒精消毒，最后用生理盐水棉球多次擦拭;集精杯 外套和盖子用紫外线消毒30min后方可使用。 A.4其他器具消毒 金属镊子、止血钳、药匙、胶塞和吸管胶头等用75%酒精擦拭消毒，待酒精挥发尽后方能使用。细 管、冷冻架使用前用紫外线消毒30 min。 A.5载玻片 载玻片使用后立即浸泡于水中，洗净后用柔软的布擦拭干净备用。 5