ICS 65.120 B 46 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 3139—2017 饲料中左旋咪唑的测定 高效液相色谱法 Determination of levamisole in feeds- High performance liquid chromatography 2017-12-22 发布 2018-06-01实施 中华人民共和国农业部发布 NY/T 3139—2017 前 言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准由农业部畜牧业司提出。 本标准由全国饲料工业标准化技术委员会（SAC/TC76)归口。 本标准起草单位：农业部饲料质量监督检验测试中心（广州）。 本标准主要起草人：林海丹、吴荔琴、廖雁平、江庆娣、陈运勤、伍宏凯、邓国东。 NY/T 3139—2017 饲料中左旋咪唑的测定 高效液相色谱法 1范围 本标准规定了饲料中左旋咪唑含量测定的高效液相色谱法。 本标准适用于配合饲料、浓缩饲料、精料补充料及添加剂预混合饲料中左旋咪唑的测定。 本标准中左旋咪唑在配合饲料中的检出限为0.2mg/kg，定量限为0.5mg/kg；在浓缩饲料、精料 补充料、添加剂预混合饲料中的检出限为0.4mg/kg,定量限为1 O mg/ kg. 2规范性引用文件 仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本( 包括所有的修改单 GB/T 6682 分 Q GB/T14699. 饲 采样 GB/T 20195 饲料 样的制备 3原理 S 饲料中左旋咪唑 坐在碱性 环境下，用乙酸乙酯提耳 汉液氮气吹 容，正已烷净 化,高效液相色 测定外 标法定量 UR 4 试剂与材料 除非另有说明 所用访 剂均为分析纯,实验用水符合 GB/T 规定 水的 4.1盐酸左旋咪 对照品 4.2乙腈:色谱 GRICU 4.3甲醇：色谱 4.4乙酸乙酯。 4.5正已烷。 4.65mol/L氢氧化钠溶 液称 4.70.02mol/L磷酸 氨钠溶液·称取无水磷酸 氢钠2.40g,用水溶解并 释至1000mL，混匀 即得。 4.8流动相：0.02mol/L磷酸 氢钠溶液 -25(V- 4.9 左旋咪唑标准储备溶液:准确称取盐酸左旋咪唑对照品(4. 1)11.78 mg(相当于左旋咪唑 10 mg, 精确至0.01 mg),置于10 mL容量瓶中,用甲醇(4. )溶解并定容至刻度,配制成1mg/mL标准储备溶 液。该储备溶液于2℃～8℃保存，保存期6个月。 4.10左旋咪唑标准工作溶液：准确量取左旋咪唑标准储备溶液（4.9)1mL,置于10mL容量瓶中，用 甲醇(4.3)溶解并定容至刻度，配制成0.1mg/mL标准工作溶液。该工作溶液于2℃～8℃保存，保存 期3个月。 4.11 pH试纸：范围 9~14。 5仪器设备 5.1高效液相色谱仪:配二极管阵列检测器。 NY/T 3139—2017 5.2 分析天平:感量 0. 001 g;感量 0. 01 mg。 5.3天平：感量0.01g。 5.4氮吹仪。 5.5超声波清洗器。 5.6振荡器。 5.7涡旋混合器。 5.87 高速离心机：转速为12000r/min及以上。 5.9行 微孔滤膜：0.45μm，有机相。 6采样和试样的制备 按照GB/T14699.1的规定抽取有代表性的样品，四分法缩减取样。按照GB/T20195的规定制 备试样，粉碎后过0.45mm孔径筛，充分混匀，装人密闭容器中备用。 7分析步骤 7.1样品提取 称取配合饲料2g（浓缩饲料、精料补充料、添加剂预混合饲料1g，精确到0.001g)样品于50mL离 心管中，加水10mL，用5mol/L氢氧化钠溶液（4.6)调pH至12～13。涡旋混匀1min，超声20min，准 确加人乙酸乙酯（4.4)20.0mL，振荡30min，以6500r/min离心5min。准确移取上清液5.0mL于试 管中，置于50℃氮气吹干。准确加入流动相（4.8）2.00mL超声溶解，加入正已烷（4.5）2mL，涡旋 1min，静置分层。取下层液，高速离心12000r/min离心10min，过滤膜（5.9)作为试样溶液，上机测定。 7.2标准曲线制备 准确量取左旋咪唑标准工作溶液（4.10)适量，用流动相（4.8)逐级稀释配制成浓度为0.05μg/mL、 0.10μg/mL、0.20μg/mL、0.50μg/mL、1.00μg/mL、5.00μg/mL和10.0μg/mL的系列标准溶液，供 高效液相色谱分析。以色谱峰面积为纵坐标、对应的标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线，求回归 方程。 8 测定 8.1液相色谱参考条件 色谱柱：SCX柱（强阳离子交换柱）,柱长250mm，内径4.6mm，粒径5μm;或性能相当者； 流动相：0.02mol/L磷酸二氢钠溶液十乙腈=75十25(V+V)； 流速:1.0mL/min; 检测波长：215nm； 进样量：20L； 柱温：30℃。 8.2定性测定 在仪器最佳工作条件下，试样中待测物的保留时间与左旋咪唑标准溶液中对应的保留时间相对偏 差在土2.5%之内，且二者光谱图一致,则可判定试样中存在对应的待测物。光谱图参见附录A中的图 A. 1. 8.3定量测定 按照上述液相色谱条件测定试样溶液和标准溶液，以色谱峰面积进行单点或多点校正定量，试样浴 液中待测物的响应值应在仪器测定的线性范围内。标准溶液的高效液相色谱图参见图A.2。 2 NY/T 3139—2017 9 结果计算与表示 9.1结果计算 9.1.1单点校准 试样中左旋咪唑的含量X,以质量分数表示，单位为毫克每千克(mg/kg）),按式(1)计算 AXCs XV X= AsXm 式中： X- 试样中左旋咪唑的含量，单位为毫克每千克(mg/kg)； Cs 标准溶液中左旋咪唑的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）； A 试样溶液中左旋咪唑的峰面积； As 标准溶液中左旋咪唑的峰面积； V 净化后定容的体积，单位为毫升（mL）； m 试样的质量,单位为克g)； f 稀释倍数。 9. 1. 2 2多点校准 试样中左旋咪唑的含量X,以质量分数表示,单位为毫克每千克(mg/kg），按式(2)计算。 X = Cr XV (2) m 式中： Cr 由标准曲线得出的试样溶液中左旋咪唑的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL)。 9.2结果表示 测定结果以平行测定的算术平均值表示,结果保留3位有效数字。 10重复性 在重复性条件下获得的2次独立测定结果的绝对差值不大于这2个测定值的算术平均值的20%。 3 NY/T 3139—2017 附录A (资料性附录) 左旋咪唑标准溶液光谱图和色谱图 A.1左旋咪唑标准溶液光谱图 见图A.1。 mAU A. 2 左旋咪唑标准溶 见图A.2。 mAU : 16 14 12 10 GRI 8 6 4 2 0 16 18 t,min 图A.2 左旋咪唑标准溶液(2. 0 μg/ mL)色谱图 NY/T 3139—2017 中华人民共和国 农业行业标准 饲料中左旋咪唑的测定 高效液相色谱法 NY/T3139—2017 * * * 中国农业出版社出版 (北京市朝阳区麦子店街18号楼) （邮政编码：100125 网址：www.ccap.com.cn) 北京印刷一厂印刷 新华书店北京发行所发行 各地新华书店经销 * * * 开本880mmX1230mm1/16 印张0.75 字数15千字 2018年5月第1版 2018年5月北京第1次印刷 书号：16109·4345 定价：18.00元 版权专有 侵权必究 NY/T 3139—2017 举报电话：（010）65005894