ICS 65.080 G 20 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 3039—2016 水溶肥料 聚谷氨酸含量的测定 Water-soluble fertilizers-Determination of poly-glutamic acid content 2016-12-23 发布 2017-04-01实施 中华人民共和国农业部 发布 NY/T 3039—2016 前 言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由中华人民共和国农业部提出并归口。 本标准起草单位：中国农业科学院农业资源与农业区划研究所、中国农学会、中国植物营养与肥料 学会、土壤肥料产业联盟。 本标准主要起草人：刘蜜、韩岩松、黄均明、侯晓娜 NY/T 3039—2016 水溶肥料聚谷氨酸含量的测定 1范围 本标准规定了水溶肥料聚谷氨酸含量测定的氨基酸自动分析仪法试验方法。 本标准适用于微生物发酵而成的液体或固体聚谷氨酸水溶肥料；也适用于添加聚谷氨酸，不含硝酸 根和其他有机成分的肥料。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件 NY/T887液体肥料密度的测定 NY/T1975水溶肥料游离氨基酸含量的测定 3原理 分别测定试样中经盐酸溶液水解后的和未经水解的游离谷氨酸的含量，两者之差即为聚谷氨酸 含量。 4试剂和材料 所用试剂、水和溶液的配制，在未注明规格和配制方法时，均应符合氨基酸自动分析仪设备的要求 4.1浓盐酸。 4.2盐酸溶液：1+1。 4.3氢氧化钠溶液：o(NaOH）=40g/L。 4.4柠檬酸钠缓冲液:pH=2.2。称取19.6g柠檬酸钠（NasC,HsO，·2H2O)，用水溶解并转移至 1000mL容量瓶中，加入16.5mL浓盐酸（4.1），混匀，用水定容，必要时可用盐酸溶液（4.2)和氢氧化钠 溶液（4.3)调节pH至2.2。过孔径0.45μm水系微孔滤膜后备用。 4.5乙二胺四乙酸二钠溶液:o(EDTA－2Na）= 10g/L。 4.6谷氨酸标准溶液。 5仪器 5.1通常实验室仪器。 5.24 氨基酸自动分析仪， 5.3恒温振荡器：温度可控制在（25土5）℃，振荡频率可控制在（180士20）r/min 同功能的装置 5.5恒温干燥箱：温度可控制在（110士2)℃。 5.6离心机（10000r/min以上），或水系微孔滤膜（孔径0.45μum）及过滤器、注射器。 5.7 蒸干装置：试管浓缩仪或其他相同功能的装置。 6分析步骤 6.1试样的制备 1 NY/T 3039—2016 固体样品缩分至约100g，将其迅速研磨至全部通过0.50mm孔径试验筛（如样品潮湿，可通过 1.00mm试验筛），混合均匀，置于洁净、干燥容器中；液体样品经摇动均匀后，迅速取出约100mL，置于 洁净、干燥容器中。 6.2试样溶液的制备 称取0.5g～50g（精确到0.0001g)混合均匀的试样（以含谷氨酸37mg～184mg为佳），置于250 mL容量瓶中。液体试料直接加水定容；固体试料加水约150mL，置于（25土5)℃振荡器内，在（180土 20）r/min的振荡频率下振荡30min，取出后用水定容。放置至澄清后吸取上清液（或过滤后吸取滤液） 1.00mL于水解管中,加入1.00mL浓盐酸（4.1 盐酸溶液（4.2）。封管后置于（110士2）℃ 的恒温干燥箱中，水解22h～24h后，取出冷却，打开水解管，将水解液于10000r/min以上离心15min 或用微孔滤膜过滤。吸取上清液(或滤液)1.00n 用蒸十装 。加人1.00mL～5.00mL的柠檬 酸钠缓冲液（4.4)溶解，使谷氨酸浓度处 仪器测定的最留浓度范围内。 注：当试样中含有金属元素 m 加入 胺四乙酸二钠溶液 (4.5)2.00mL，混匀 然后按 于10000/ ·使谷氨酸浓度处于仪器测 定的最佳浓度范围 6.3标准曲线的绘制 将谷氨酸标准溶 寄液 6稀释 至 100 nmol/mL 仪器进 定 氨酸的物质的量 (nmol)为横坐标，相应 的峰再积 为纵坐标，采用单点校 准 生法绘制标准曲线 注:谷氨酸标准 容液 最佳上机 L浓度通常为100 nmol/mL, 可根据仪器要求调整 6.4试样溶液的测定 将试样溶液在与 准溶液相 出相应仪 体积中谷氨酸 的物质的量(nmol) 7 游离谷氨酸含量白 的测定 按照NY/T 的试样中 8分析结果的表过 C 8. 1 水解后游离谷氨酸 的总合 のi计,数值以百分率表示 按式（） 2MDI X (1) ml 式中: n 仪器进样体积√ 谷氨酸的物质的量,单 立为纳摩 (nmol) ; M 谷氨酸的摩尔质量数值（147.1),单位 为克每摩尔(g / mol) ; D 稀释倍数； Vi 定容体积,单位为毫升（mL）； 103 将毫升换算成微升的系数，以微升每毫升(uL/mL)表示； m 试料的质量，单位为克(g)； V 仪器进样体积，单位为微升（μL)； 109 将克换算成纳克的系数，以纳克每克(ng/g)表示。 取两次平行测定结果的算术平均值为测定结果，结果保留到小数点后一位。 8.2聚谷氨酸含量以质量分数计，数值以百分率表示,按式(2)计算。 w=- (2) 式中： W1 试样中水解后游离谷氨酸的总含量； 2 NY/T 3039—2016 02 试样中游离谷氨酸的质量分数。 结果保留到小数点后一位。 9允许差 9. 1 平行测定结果的允许差 水解后游离谷氨酸的总含量平行测定结果的绝对差值应符合表1要求， 表 1 水解后游离谷氨酸的总含量（w），% 绝对差值，% ≤2.0 0.2 2. 0<w<5. 0 ≤0.5 5.0<w≤10.0 ≤1. 0 w>10.0 ≤2.0 游离谷氨酸含量平行测定结果的允许差按照NY/T1975的规定执行。 9. 2 2不同实验室测定结果的允许差 聚谷氨酸含量不同实验室测定结果的绝对差值应符合表2要求 表 2 聚谷氨酸的含量()，% 绝对差值，% 2.0 ≤0.4 2. 0<w<5. 0 ≤1. 0 5.0<<10.0 2.0 >10.0 ≤4.0 10 质量浓度的换算 液体试样聚谷氨酸含量以质量浓度oi计，单位为克每升(g/L），按式(3)计算 (3) 式中: 1000 将克每毫升换算为克每升的系数，以毫升每升(mL/L)表示； w 试样中聚谷氨酸的质量分数； 液体试样的密度，单位为克每毫升（g/mL）。 结果保留至整数。 密度的测定按照NY/T887的规定执行。 3 NY/T 3039—2016 02 试样中游离谷氨酸的质量分数。 结果保留到小数点后一位。 9允许差 9. 1 平行测定结果的允许差 水解后游离谷氨酸的总含量平行测定结果的绝对差值应符合表1要求， 表 1 水解后游离谷氨酸的总含量（w），% 绝对差值，% ≤2.0 0.2 2. 0<w<5. 0 ≤0.5 5.0<w≤10.0 ≤1. 0 w>10.0 ≤2.0 游离谷氨酸含量平行测定结果的允许差按照NY/T1975的规定执行。 9. 2 2不同实验室测定结果的允许差 聚谷氨酸含量不同实验室测定结果的绝对差值应符合表2要求 表 2 聚谷氨酸的含量()，% 绝对差值，% 2.0 ≤0.4 2. 0<w<5. 0 ≤1. 0 5.0<<10.0 2.0 >10.0 ≤4.0 10 质量浓度的换算 液体试样聚谷氨酸含量以质量浓度oi计，单位为克每升(g/L），按式(3)计算 (3) 式中: 1000 将克每毫升换算为克每升的系数，以毫升每升(mL/L)表示； w 试样中聚谷氨酸的质量分数； 液体试样的密度，单位为克每毫升（g/mL）。 结果保留至整数。 密度的测定按照NY/T887的规定执行。 3 NY/T 3039—2016 02 试样中游离谷氨酸的质量分数。 结果保留到小数点后一位。 9允许差 9. 1 平行测定结果的允许差 水解后游离谷氨酸的总含量平行测定结果的绝对差值应符合表1要求， 表 1 水解后游离谷氨酸的总含量（w），% 绝对差值，% ≤2.0 0.2 2. 0<w<5. 0 ≤0.5 5.0<w≤10.0 ≤1. 0 w>10.0 ≤2.0 游离谷氨酸含量平行测定结果的允许差按照NY/T1975的规定执行。 9. 2 2不同实验室测定结果的允许差 聚谷氨酸含量不同实验室测定结果的绝对差值应符合表2要求 表 2 聚谷氨酸的含量()，% 绝对差值，% 2.0 ≤0.4 2. 0<w<5. 0 ≤1. 0 5.0<<10.0 2.0 >10.0 ≤4.0 10 质量浓度的换算 液体试样聚谷氨酸含量以质量浓度oi计，单位为克每升(g/L），按式(3)计算 (3) 式中: 1000 将克每毫升换算为克每升的系数，以毫升每升(mL/L)表示； w 试样中聚谷氨酸的质量分数； 液体试样的密度，单位为克每毫升（g/mL）。 结果保留至整数。 密度的测定按照NY/T887的规定执行。 3