ICS 65.100.30 B 17 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 2890—2016 稻米中-氨基丁酸的测定 高效液相色谱法 Determination of -aminobutyric acid in rice- HPLC 2016-05-23 发布 2016-10-01实施 中华人民共和国农业部 发布 NY/T 2890—2016 前 言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由农业部种植业管理司提出并归口。 本标准起草单位：云南省农业科学院质量标准与检测技术研究所、农业部农产品质量监督检验测试 中心（昆明）。 本标准主要起草人:汪禄祥、黎其万 邵金良、刘兴勇、王丽、刘宏程、 、杨东顺、樊建麟。 NY/T 2890—2016 稻米中-氨基丁酸的测定 高效液相色谱法 1范围 本标准规定了稻米中-氨基丁酸含量的高效液相色谱测定方法。 本标准适用于稻米中-氨基丁酸含量的测定。 本方法检出限为0.10mg/kg，定量限为0.20mg/kg。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3原理 试样经乙醇一水溶液提取,经4-二甲基胺基偶氮苯-4-磺酰氯(DABS-CI)衍生，用高效液相色谱 法测定，以保留时间定性，外标法定量。 4试剂与材料 除非另有规定，使用试剂均为分析纯。水为GB/T6682中规定的一级水。 4.1无水乙醇(CzHsOH)：优级纯。 4.2乙睛(CH;CN):色谱纯。 4.3提取溶液：无水乙醇十水=4十1(V+V），取400mL无水乙醇和100mL水混匀。 4.4碳酸氢钠溶液：称取0.40g碳酸氢钠，用水溶解并稀释至10mL,现配现用。 4.54-二甲基胺基偶氮苯-4-磺酰氯溶液:称取4-二甲基胺基偶氮苯-4-磺酰氯20.0mg,用乙腈溶解 并稀释至10mL，现配现用。 4.6三水合乙酸钠溶液：称取3.40g三水合乙酸钠，用水溶解并稀释至500mL，经微孔滤膜（4.10)过滤 4.7-氨基丁酸(-aminobutyric acid，GABA):CAS号 56-12-2,纯度≥99.9%。 4.8标准储备溶液：精确称取-氨基丁酸标准品10.0mg，用乙腈溶液溶解并定容至10mL，即为 1000mg/L的标准储备液，于一18℃下，贮存于密闭的棕色玻璃瓶中，保存有效期为3个月。 4.9标准使用液：在使用中将标准储备溶液逐级稀释成2.0mg/L、5.0mg/L、10.0mg/L、50.0mg/L 和100.0mg/L或其他浓度的-氨基丁酸标准使用液，现配现用。 4.10滤膜：0.45μm，水相滤膜。 5仪器与设备 5.1高效液相色谱仪带紫外检测器或二极管阵列检测器。 5.2组织捣碎机：转速1000r/min。 5.3分析天平：感量为0.01mg，0.01g。 5.4振荡水浴锅。 1 NY/T 2890—2016 5. 5 超声波清洗器。 5.6旋涡混匀器。 5.7离心机：最大转速10000r/min。 6 分析步骤 6.1 试样制备 样品经混匀后，缩分至约50g，经研磨至全部通过孔径0.25mm（60目）筛的试样，混匀，装入密闭 容器中，室温下保存。 6.2提取 称取1.0g样品于50mL离心管中，加人 10mL提取溶液（4 .3），超声提取30min后，在旋涡混匀器 房上清液梦人 上振荡2min，静置5min， 5000 mL容量瓶中，样品残渣再用 10mL提取溶液（4.3）提取1次， L,摇勺，待衍生化。 6.3衍生化 准确吸取1mL 式样 酸氢钠溶液（4.4）和 于具基试管 0.40mL4-二甲基 胺基 20min，用微 孔滤膜（4.10)过滤 待 S 6.4测定 6.4.1色谱参考条件 色谱柱：C 柱 检测波长： 36 柱温：30℃ 进样量：10 CEN 流动相：乙( 2) 流速:1.0mL ind 6.4.2色谱分析 C 分别将标准溶 液 不 液相色 中，以保 留时间 面积与标准溶液 峰面积比较定量。 U 结果计算 人 试样中-氨基丁酸含量按式(1)计算 (1) m 式中： 试样中-氨基丁酸含量，单位为毫克/千克(mg g: 样液中-氨基丁酸测定质量浓度，单位为毫克每升（mg/L)； 定容体积，单位为毫升（mL）； m- 试样质量，单位为克（g）； 测定结果取两次测定的算术平均值，计算结果保留三位有效数字。 8米 精密度 在重复性条件下，获得的两次独立测定结果的绝对差值不超过算术平均值的10%。在再现性条件 下，获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的20%。 2 NY/T 2890—2016 附录A (资料性附录) -氨基丁酸标准溶液色谱图 10mg/L-氨基丁酸标准溶液色谱图见图A.1。 0.030 F L 0.025 -氨基丁酸 0.020 E 紫外吸收强度（mV） 0.015 0.010 0.005 LL 0.000 L 0.005 0.00 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00 12.00 14.00 16.00 18.00 时间（min） 图A.1 10mg/L-氨基丁酸标准溶液色谱图 3 NY/T 2890—2016 附录A (资料性附录) -氨基丁酸标准溶液色谱图 10mg/L-氨基丁酸标准溶液色谱图见图A.1。 0.030 F L 0.025 -氨基丁酸 0.020 E 紫外吸收强度（mV） 0.015 0.010 0.005 LL 0.000 L 0.005 0.00 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00 12.00 14.00 16.00 18.00 时间（min） 图A.1 10mg/L-氨基丁酸标准溶液色谱图 3 NY/T 2890—2016 附录A (资料性附录) -氨基丁酸标准溶液色谱图 10mg/L-氨基丁酸标准溶液色谱图见图A.1。 0.030 F L 0.025 -氨基丁酸 0.020 E 紫外吸收强度（mV） 0.015 0.010 0.005 LL 0.000 L 0.005 0.00 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00 12.00 14.00 16.00 18.00 时间（min） 图A.1 10mg/L-氨基丁酸标准溶液色谱图 3