ICS 67.080.10 B 31 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 2016-2011 水果及其制品中果胶含量的测定 分光光度法 Determination of pectin content in fruit and derived product- Spectrophotometry method 2011-09-01 发布 2011-12-01实施 中华人民共和国农业部发布 NY/T 2016—2011 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草， 本标准由中华人民共和国农业部种植业管理司提出。 本标准由全国果品标准化技术委员会(SAC/TC 510)归口。 本标准起草单位：农业部果品及苗木质量监督检验测试中心(郑州)、中国农业科学院郑州果树研究 所。 本标准主要起草人：方金豹、庞荣丽、何为华、李君、吴斯洋、郭琳琳、俞宏。 I NY/T 2016—2011 水果及其制品中果胶含量的测定 分光光度法 １范围 本标准规定了用分光光度法测定水果及其制品中果胶含量的方法。 本标准适用于水果及其制品中果胶含量的测定。 本标准方法线性范围为 1 mg/ L～100 mg/ L,检出限为 0.02 g/kg。 2 规范性引用文件 下列文件对本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3原理 用无水乙醇沉淀试样中的果胶,果胶经水解后生成半乳糖醛酸,在硫酸中与味唑试剂发生缩合反 应，生成紫红色化合物，该化合物在525nm处有最大吸收，其吸收值与果胶含量成正比，以半乳糖醛酸 为标准物质,标准曲线法定量。 4 试剂 除非另有说明，所用水应达到GB/T 6682规定的三级水要求,所用试剂均为分析纯试剂。 4. 1 无水乙醇(C,HO)。 4.2硫酸(H²SO4,优级纯)。 4.3咔唑(Ci2H,N)。 4.467%乙醇溶液：无水乙醇十水=2十1。 4.5pH0.5的硫酸溶液:用硫酸调节水的pH 至 0.5。 4.640g/L氢氧化钠溶液：称取 4.0g氢氧化钠，用水溶解并定容至100mL。 4.71g/L咔唑乙醇溶液：称取0.1000g味唑，用无水乙醇溶解并定容至100mL。作空白实验检测， 即1mL水、0.25mL咔唑乙醇溶液和5mL硫酸混合后应清澈、透明、无色。 4.8半乳糖醛酸标准储备液：准确称取无水半乳糖醛酸0.1000g，用少量水溶解，加人0.5mL氢氧化 钠溶液（4.6)，定容至100mL，混匀。此溶液中半乳糖醛酸质量浓度为1000mg/L。 标准储备液(4.8)于50mL容量瓶中，定容,溶液质量浓度分别为0.0mg/L、20.0mg/L、40.0mg/L、 60. 0 mg/ L.80. 0 mg/ L,100. 0 mg/ L. 5仪器 5.1分光光度计。 5.2 组织捣碎机。 5.3分析天平，感量为0.0001g。 5.4恒温水浴振荡器。 5.5离心机:4000 r/min。 NY/T 2016—2011 6分析步骤 6.1试样制备 果酱及果汁类制品将样品搅拌均匀即可。新鲜水果,取水果样品的可食部分，用自来水和去离子水 依次清洗后，用干净纱布轻轻擦去其表面水分。苹果、桃等个体较大的样品采用对角线分割法，取对角 可食部分，将其切碎，充分混匀;山楂、葡萄等个体较小的样品可随机取若干个体切碎混匀。用四分法取 样或直接放入组织捣碎机中制成匀浆。少汁样品可按一定质量比例加入等量去离子水。将匀浆后的试 样冷冻保存。 6.2预处理 称取1.0g～5.0g(精确至0.001g)试样于50mL刻度离心管中,加人少量滤纸屑，再加人35mL 约75℃的无水乙醇，在85℃水浴中加热10min，充分振荡。冷却,再加无水乙醇使总体积接近50mL， 在4000r/min的条件下离心15min,弃去上清液。在85℃水浴中用乙醇溶液（4.4)洗涤沉淀，离心分 离,弃去上清液，此步骤反复操作，直至上清液中不再产生糖的穆立虚反应为止（检验方法：取上清液 0.5mL注人小试管中,加人5%α-萘酚的乙醇溶液2滴～3滴,充分混匀,此时溶液稍有白色浑浊，然后 使试管轻微倾斜,沿管壁慢慢加入1mL硫酸（4.2),若在两液层的界面不产生紫红色色环，则证明上清 液中不含有糖分）,保留沉淀A。同时做试剂空白试验。 6.3果胶提取液的制备 6.3.1酸提取方式 将上述制备出的沉淀A(6.2)，用pH0.5的硫酸溶液(4.5)全部洗人三角瓶中，混匀,在85℃水浴中 留滤液B供测定用。 6.3.2碱提取方式 对于香蕉等淀粉含量高的样品宜采用碱提取方式。将上述制备出的沉淀A（6.2），用水全部洗入 100mL容量瓶中,加入5mL氢氧化钠溶液（4.6），定容，混匀。至少放置15min,期间应不时摇荡。过 滤，保留滤液C供测定用。 6.4标准曲线的绘制 吸取 0.0 mg/L、20.0 mg/L、40.0 mg/ L、60. 0 mg/ L、80. 0 mg/ L、100. 0 mg/L半乳糖醛酸标准使 用溶液（4.9)各1.0mL于25mL玻璃试管中,分别加入0.25mL咔唑乙醇溶液(4.7),产生白色絮状沉 淀,不断摇动试管,再快速加入5.0mL硫酸（4.2），摇匀。立刻将试管放人85℃水浴振荡器内水浴20 min,取出后放人冷水中迅速冷却。在1.5h 的时间内，用分光光度计在波长525nm处测定标准溶液的 吸光度，以半乳糖醛酸浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。 6.5样品的测定 吸取1.0mL滤液B(6.3.1)或滤液C(6.3.2)于25mL玻璃试管中，加入0.25mL味唑乙醇溶液 （4.7），同标准溶液显色方法进行显色，在1.5h的时间内，用分光光度计在波长525nm处测定其吸光 度，根据标准曲线计算出滤液B或滤液C中果胶含量，以半乳糖醛酸计。按上述方法同时做空白试验， 用空白调零。如果吸光度超过100mg/L半乳糖醛酸的吸光度时,将滤液B或滤液C稀释后重新测定。 7 结果计算 样品中果胶含量以半乳糖醛酸质量分数计，单位为克每千克(g/kg),按式(1)进行计算： pxv m X 1000 式中: 2 NY/T 2016--2011 -滤液B或滤液C中半乳糖醛酸质量浓度,单位为毫克每升(mg/L); V一一果胶沉淀 A定容体积,单位为毫升(mL); -试样质量，单位为克(g)。 m 计算结果保留三位有效数字。 8 精密度 在重复性条件下获得的两次独立测试结果的绝对差值不得超过这两次测定算术平均值的10% 3 NY/T 2016--2011 -滤液B或滤液C中半乳糖醛酸质量浓度,单位为毫克每升(mg/L); V一一果胶沉淀 A定容体积,单位为毫升(mL); -试样质量，单位为克(g)。 m 计算结果保留三位有效数字。 8 精密度 在重复性条件下获得的两次独立测试结果的绝对差值不得超过这两次测定算术平均值的10% 3 NY/T 2016--2011 -滤液B或滤液C中半乳糖醛酸质量浓度,单位为毫克每升(mg/L); V一一果胶沉淀 A定容体积,单位为毫升(mL); -试样质量，单位为克(g)。 m 计算结果保留三位有效数字。 8 精密度 在重复性条件下获得的两次独立测试结果的绝对差值不得超过这两次测定算术平均值的10% 3