ICS 65.080 B 10 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 1980—2018 代替NY1980—2010 肥料和土壤调理剂 急性经口毒性试验及评价要求 Fertilizers and soil amendments- Determination and evaluation of acute oral toxicity 2018-03-15 发布 2018-06-01实施 中华人民共和国农业部发布 NY/T 1980—2018 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准代替NY1980—2010《肥料登记急性经口毒性试验及评价要求》。与NY1980—2010相 比,除编辑性修改外主要变化如下： 修改标准名称为《肥料和土壤调理剂急性经口毒性试验及评价要求》,英文为“Fertilizers and soil amendments-Determination and evaluation of acute oral toxicity"。 修改标准范围为“本标准规定了肥料和土壤调理剂急性经口毒性试验方法、技术要求、结果评 价及毒性分级。本标准适用于中华人民共和国境内生产、销售的肥料和土壤调理剂。” 本标准由中华人民共和国农业部提出并归口。 本标准起草单位：中国农业科学院农业资源与农业区划研究所、中国疾病预防控制中心职业卫生与 中毒控制所、中国农学会、中国植物营养与肥料学会、土壤肥料产业联盟。 本标准主要起草人：刘红芳、王旭、李斌、孙蓟锋、肖经纬、保万魁、侯晓娜、张星。 本标准所代替标准的历次版本发布情况为： NY1980—2010。 NY/T 1980—2018 肥料和土壤调理剂 急性经口毒性试验及评价要求 1范围 本标准规定了肥料和土壤调理剂急性经口毒性试验方法、技术要求、结果评价及毒性分级。 本标准适用于中华人民共和国境内生产、销售的肥料和土壤调理剂。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引月 本文件 GB/T 6679 体化 品采样道 GB/T 6680 液体 化工产品 GB 15193. 食品安全国 1家标准 急性毒性试验 3 术语和定义 S 下列术语和定 义适用 本文件 3. 1 A 实验动物 laboratory animal 经人工饲育 科学研究、教学、生 产、检定以及其代 验的动物。本标准采用的实验动物为小鼠 3. 2 CENTE 急性经口毒性 acute oral toxicit 一次或24 3. 3 剂量 dose R 所给受试物的量， 人 3. 4 经口半数致死剂量 median lethal oral dose 次或24h内多次经 口给予小鼠受试物 后引起 50%小鼠死亡的统讠 剂量，以小鼠单位体重接受 受试物的质量(mg/kg 体重)表示(即 LDso)。 毒性结果以小鼠急性经口半数致死剂量(LDso）进行分级 评价。 3.5 靶器官 target organ 受试物引起机体出现显著毒性效应的器官。 4分级及评价要求 4.1分级指标 急性经口毒性分为实际无毒、低毒、中等毒和高毒四级。指标应符合表1的要求。 1 NY/T 1980—2018 表 1 单位为毫克每千克体重 毒性级别 经口 LDso 实际无毒 LD5o≥5 000 低毒 500≤LDso<5000 中等毒 50≤LD5<500 高毒 LDs<50 4.2评价要求 急性经口毒性评价分为符合和基本符合两级。毒性级别为实际无毒的，即小鼠急性经口半数致死 剂量(LD5o）不小于5000mg/kg体重的,为符合肥料和土壤调理剂急性毒性评价要求;毒性级别为低毒 的,即小鼠急性经口半数致死剂量(LDso)不小于500mg/kg体重的，为基本符合肥料和土壤调理剂急 性毒性评价要求。 5 试验方法 5.1受试物 肥料或土壤调理剂。 5.2小鼠的准备 观察 3d并确认健康后开始试验。 5.3试样处理 受试物加水配制成相应浓度的受试物溶液/混悬液，移入试剂瓶中备用。如果受试物不溶于水，用 食用植物油配制。 5.4剂量分组 至少设4个剂量组，各剂量组之间要有适当的剂量间距，以便各组出现不同程度的毒性效应（死亡 率),求得剂量-效应曲线及LD50。 5.5限量试验 如果剂量达5000mg/kg体重，20只小鼠（雌雄各半)仍未见与受试物有关的死亡，则可以不设4个 剂量组的完整试验。 5.6 灌胃量 按20g体重灌0.4mL计算，用处理好的试样灌胃。 5.7、试验方法及观察时间 小鼠给受试物前应隔夜禁食但不禁水,称重后,单次灌胃给予受试物，2h后进食。染毒后对小鼠的 反应情况连续观察2h～4 h,其后每天至少观察1次。记录中毒症状出现、消失和小鼠死亡的时间。如 果在染毒4d后出现迟发性的毒效应，则应延长观察期3周～4周。 6观察指标 6.1中毒症状记录 观察小鼠中毒体征的发生、发展过程以及中毒特点和毒作用的靶器官。观察的系统包括： a)[ 中枢神经系统和神经肌肉系统：体位异常、叫声异常、不安、呆滞、痉挛、抽搐麻痹、运动失调、对 外反应过敏或迟钝； 植物神经系统：瞳孔扩大或缩小、流涎或流泪； c) 呼吸系统：鼻孔流液、鼻翼扇动、呼吸深缓、呼吸过速、蜂腰； 泌尿生殖系统：会阴部污移、有分泌物、阴道或乳房肿胀； 2 NY/T 1980—2018 e) 皮肤和毛：皮肤充血、紫、被毛蓬松、污秽； f) 眼：眼球突出、结膜充血、角膜混浊； g）消化系统:腹泻、厌食。 6.2体重记录 小鼠灌胃前、试验结束时各称量一次体重。观察期间对濒死小鼠称量体重一次。 6. 3 病理组织学检查 应对死和试验结束时处死的小鼠做大体病理学观察，包括组织器官的颜色、大小、位置等状况。 如果观察有可疑病变时,应做病理组织学检查。 7半数致死剂量统计方法 7.1霍恩氏法(Horn method)(仲裁法) 7.1.1预试验 通常采用10mg/kg体重或1000mg/kg体重的剂量，各剂量使用4只～6只小鼠（雌雄各半）。根 据24 h内小鼠死亡情况,估计LDso的可能范围,以确定正式试验剂量。 7.1.2剂量组的选择 按预试验所确定的致死剂量范围选择一组剂量系列，常用的剂量系列包括： 1. 0 1. 0 2.15 3.16 X10 X10 4. 65 10.0 10.0J 31.6 t=0,±1,±2,±3... 7.1.3正式试验 根据 4 个剂量组的小鼠死亡数,查表求得 LDso及其 95%可信限。霍恩氏法 LDs计算用表见 GB 15193.3。 7.2机率单位-对数图解法 每剂量组使用不少于20只小鼠(雌雄各半），但各组小鼠数不一定均等。此法不要求剂量组呈等比 关系，但等比可使各点距离相等，利于作图。 7.2.1半数致死剂量的计算 先将剂量的对数值和相应死亡率用点画在图上，即用机率对数图纸直接把剂量和死亡率画在图上。 画线时应使点散布在直线的上下,尽量使直线接近死亡率在15%～85%的点，即机率单位4～6的点。 直线上50%死亡率(机率单位为5)的相应剂量对数值,经反对数变换后即得LD5o的剂量。 7.2.2半数致死剂量的可信限估计 7.2. 2.1 LD5o的标准差 S按式(1)计算。 X, - Xi S= (1) Y,-Yi 式中： X2 — 机率单位为6时,相应X轴上的对数剂量； 机率单位为4时，相应X轴上的对数剂量； Y2— 机率单位为6； Yi - 机率单位为4。 7. 2. 2. 2估计1gLDso的标准误按式(2)计算。 NY/T 1980—2018 SigLDs S (2) N V2 式中： N- 为死亡率15%～85%之间所用小鼠数。 7.2.2.41gLDso经反对数变换后,可得到LDso的95%可信限剂量。 7. 3寇氏法(Karber method) 采用10只小鼠（雌雄各半） 7.3.1预试验 预试验中小鼠全 部死亡（或 90%以D死ü)图剂量作为正式试验的最高剂量,小鼠不死亡(或 10% 以下死亡)的剂量作为正式试验的最低剂量 7.3.2正式试 换 管 为对数 ,然后将最高、最低剂量的对数 差,按所需要 的组数，分成 寸数等 的剂量组。 RES! 7.3.3结果计算和统计 7.3. 3. 1 数据列表 分别列出 出各剂量 组的剂量剂量对数、小鼠数小鼠死亡 数和小鼠歹 以 小数表示）。 7.3.3. 2 半数致死剂量的计算 7.3. 3. 式(3 算 lgLD- 2 X+X+(P (3) 式中： X. IX P:、 7. 3. 3. 2. gLD50按 R U (4) 式中： 人 Xi 最高剂量对数 d 相邻两剂量对数值的差数； P;、P;+1 相邻两组的小鼠死亡 7.3.3.2.3各组间剂量为对数等距,且最高、最低剂量组小鼠死亡率分别为 1.0(全死)和 0(全不死) 时，lgLDso按式(5)计算。 lgLDso = X;- d(P- 0. 5) (5) 式中: p- 各组小鼠死亡率之和。 7.3.3.2.4根据lgLD50，查其自然数,即为LD50。 7.3.3.3半数致死剂量的可信限估计 7.3.3.3. 1 1gLDso的标准误按式(6)计算。 d-d SigLDso (6) n 4 NY/T 1980—2018 式中： △P²——各组小鼠死亡率平方之和; n 一小鼠数量。 7.3.3.3.295%可信限(X)的 LD5o按式(7)计算。 X = lg-1(lgLDso ± 1. 96SigLDs。) (7) 8检验规则 8.1固体或散装产品采样按GB/T 6679的规