ICS 65.100 B 17 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 1859.11—2017 农药抗性风险评估 第11部分：植物病原细菌对杀菌剂抗性 风险评估 Guidelines on the risk assessment for pesticide resistance- Part 11:The risk assessment for resistance to bactericides in plant pathogenic bacteria 2017-06-12发布 2017-10-01实施 中华人民共和国农业部 发布 NY/T1859.11—2017 前 NY/T1859《农药抗性风险评估》拟分为如下部分： 第1部分：总则； 第2部分：卵菌对杀菌剂抗药性风险评估； 第3部分：蚜虫对拟除虫菊酯类杀虫剂抗药性风险评估； 第4部分：乙酰乳酸合成酶抑制剂类除草剂抗性风险评估； 第5部分：十字花科蔬菜小菜蛾抗药性风险评估； 第6部分：灰霉病菌抗药性风险评估； 第7部分：乙酰辅酶A羧化酶除草剂抗性风险评估； 第8部分：霜霉病菌抗药性风险评估； 第9部分：蚜虫对新烟碱类杀虫剂抗性风险评估； 第10部分：专性寄生病原真菌对杀菌剂抗性风险评估； 第11部分：植物病原细菌对杀菌剂抗性风险评估； 第12部分：小麦田杂草对除草剂抗性风险评估。 本部分为NY/T1859的第11部分。 本部分按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本部分由农业部种植业管理司提出并归口。 本部分起草单位：农业部农药检定所、南京农业大学。 本部分主要起草人：周明国、侯毅平、袁善奎、王建新、段亚冰、张楠、何静。 I NY/T 1859.11—2017 农药抗性风险评估 第11部分：植物病原细菌对杀菌剂抗性风险评估 1范围 本部分规定了植物病原细菌对杀菌剂抗性风险评估的基本要求、方法及抗药性风险的管理。 本部分适用于水稻白叶枯病菌、柑橘溃疡病菌等农作物和经济作物重要病原细菌对杀菌剂抗性风 险评估的农药登记试验。 2规范性引用文件 ARD 下列文件对于本文件的应用是 不可少的。 凡是注日期的 应 件。凡是不注日 期的可 反本（包括所有的修计 适用 NY/T1156 3分抑制 中 试验浑浊度法 3术语和定义 S NY/T 1667.1~1667.8界定的以及下列术语和定义适用于本文件 A 3. 1 药剂驯化 用杀菌剂亚致死剂量连续对病原菌处理，使其对处理药剂忍受能力增加 3. 2 紫外诱变 UV-mitagenesis 用紫外线照 3. 3 抗药性突 变频 率丫fr ueney of bactericide resistant mutant 变的菌株所占的比率。 3. 4 人 最小抑制浓度 minimum inhibitory concentration(MIC) 可完全抑制植物病原细菌生长的最低药剂浓 3. 5 抗性指数 resistance factor 抗药性菌株对该药剂的敏感性参数（ 般以EC或MIC表示）与其亲本或野生敏感菌株敏感性参 数的比值。 3.6 适合度fitness 病原细菌在存活、生长、致病和繁殖等方面的能力。 3.7 交互抗药性 cross-resistance 病原细菌对某一杀菌剂产生抗性时，由于相同或相近的抗药性机制，对其他甚至未接触过的杀菌剂 也表现抗性的现象，也称正交互抗药性。 1 NY/T1859.11—2017 3. 8 负交互抗药性negativecross-resistance 病原细菌对一种杀菌剂产生抗性时，对其他杀菌剂表现为更加敏感的现象。 4抗药性风险评估 4.1抗药性风险的影响因子 4.1.1药剂 多作用位点、非选择性杀菌剂如氢氧化铜、王铜、氧化亚铜、波尔多液、碱式硫酸铜、硫酸铜钙等在理 论上属于低等抗性风险的药剂；单作用位点、选择性强及抗性水平中等或较低的其他药剂，如噻唑锌、喹 啉铜、春雷霉素、噻菌铜等均属于中等抗性风险的药剂；单作用位点、选择性强及抗性水平高的杀菌剂如 链霉素、叶枯唑等理论上属于高等抗性风险的药剂。 4.1.2靶标生物 水稻白叶枯病菌（Xanthomonasoryzaepv.oryzae）、水稻细菌性条斑病菌（Xanthomonasoryzae pv.oryzicola）、黄瓜细菌性角斑病菌（Pseudomonassyringaepv.lachrymans）、大白菜软腐病菌（Er winiacarotovora）、柑橘溃疡病菌（Xanthomonascitrisubsp.citri）、茄科青枯病菌（Ralstoniaso lanacearum）、瓜类果斑病菌（Acidovoraavenaesubsp.citrulli）和番茄溃疡病菌（Clavibactermichi- ganensissubsp.michiganensis)等农作物和经济作物重要病原细菌。 4.1.3农事操作及生态环境风险 大面积种植感病品种以及利于病害流行的农事操作及生态环境条件增加抗药性风险；单一使用作 用机理相同的杀菌剂，增加药剂选择压力有利于抗药性的产生和发展。 4.2抗性风险评估内容 4.2.1敏感基线的建立 从未使用过某种药剂及相同作用机理药剂的多个代表性地区采集供试菌株（≥100株）。按照 NY/T1156.16的规定，以浑浊度法测定各菌株生长对药剂的敏感性（ECso或MIC)。如果供试菌株敏 感性呈单峰分布，则这些菌株可视为野生敏感菌株，其对药剂的敏感性（EC5o或MIC)的平均值可作为 靶标菌对该药剂敏感基线的EC5o或MIC参考值。具体方法见附录A。 4.2.2药剂特性及交互抗性 采取了抗药性治理措施。参考以上调查结果，并依据对敏感菌株和抗药性菌株毒力测定结果，分析该药 剂是否与生产上常用药剂之间具有交互抗药性或负交互抗药性。 4.2.3靶标病原细菌产生抗药性的潜能 采用紫外诱变、药剂驯化的方法对3个以上代表性亲本菌株在室内进行抗药性突变体的诱导。紫 外诱变时以紫外光照射后植物病原细菌致死率为90%～99%的照射剂量处理，以杀菌剂MIC剂量进行 抗药性突变体筛选；针对杀菌剂的不同作用方式，选择离体药剂化或活体药剂驯化。离体药剂驯化时 将一定浓度的植物病原细菌涂布于含有MIC药剂浓度的平板上，培养数天，将长出的植物病原细菌重 新接种到含药平板上，并逐渐提高药剂浓度，连续培养多代之后，将在含MIC药剂浓度之上还能生长的 菌体，确定为疑似抗药性突变体。在无药平板上转接，继代培养3代后测定其对杀菌剂的敏感性，抗药 性生物学性状能够稳定遗传的菌株作为抗药性菌株；活体药剂驯化时需先测定亲本菌株的EC5o和最小 抑制浓度（MIC），先将健康作物叶片（或果实）喷洒至MIC的药剂浓度，之后将靶标菌剪叶或针刺接种 于带药叶片正面，培养数天，待其发病后，分离回收叶片上的病原菌，将回收的单菌落活化后重新接种到 用药液处理过的健康叶片上，并逐渐提高药剂浓度，连续培养多代之后，将在含MIC药剂浓度的叶片之 上还能生长和致病的菌体，确定为疑似抗药性突变体。在无药健康叶片上转接，继代培养3代后测定其 2 NY/T1859.11—2017 对杀菌剂的敏感性，抗药性生物学性状能够稳定遗传的菌株作为抗药性菌株。靶标病原菌产生抗药性 的潜能以抗性突变频率和抗性指数表示。 抗药性突变频率X按式（1）计算。 X = X100 ..(1) N2 式中： X一一抗药性突变频率，单位为百分率（%）； N一筛选获得的抗药性菌体数量，单位为个； N2一用于抗药性筛选的供试靶标病原菌群体数量总和，单位为个。 抗性指数RF按式(2)计算。 E2 (2) 式中： Ei—抗性菌株对该药剂的敏感性（ECso）,单位为微克每毫升（μg/mL)； E2一一亲本菌株对该药剂的敏感性(ECso）,单位为微克每毫升（μg/mL)。 4.2.4抗药性菌株的适合度测定 如果筛选获得田间或室内抗药突变体，测定抗药突变体的存活、生长、繁殖、致病力和竞争力等适合 度相关的生物学性状指标，比较抗药性菌株和敏感菌株（包括亲本菌株）有无差异（具体测定方法见附 录A)。 4.2.5抗性风险级别分析 依据抗药性菌株的突变频率、抗性指数和适合度测定结果，并结合交互抗药性、抗性遗传、药剂的活 性及其作用机制和病害特征等研究结果，预测药剂在田间推广使用后，病原菌对其产生抗性的风险。 4.2.5.1高等抗性风险 如果药剂持效期长、作用位点单一或者作用机制不明、田间有同类药剂使用的历史、靶标病原菌易 于产生抗药性突变、抗性指数很高，抗药性菌株适合度接近或高于敏感群体（包括亲本菌株），且防治对 象为雨水传播的多循环病害，则病原菌对该药剂的抗性风险为高等风险。 4.2.5.2中等抗性风险 如果药剂作用位点单一或者作用机制不明、田间有同类药剂使用的历史、靶标菌易于产生抗药性突 变、抗性指数低一中等、抗药性菌株适合度低于或接近敏感群体（包括亲本菌株），则病原菌对该药剂的 抗性风险为中等风险。 4.2.5.3低等抗性风险 如果药剂为多作用位点或药剂虽然为单作用位点，但田间没有同类药剂使用的历史、抗性菌株突变 频率较低、抗性指数低、抗药性菌株的适合度显著低于敏感群体亲本菌株，则病原菌对该药剂的抗性风 险为低等风险。 5抗性风险管理 5.1抗性风险的可接受性 确定抗性风险的级别后，要考虑抗性风险的可接受性。属于低等抗性风险级别的药剂，一般不需要 采取抗性管理措施；属于中等抗性风险的药剂，必要时应考虑采取抗性风险管理措施；属于高等抗性风 险级别的药剂，应采取抗性风险管理措施 5.2抗性风险管理的一般原则 对于高等或中等抗性风险的药剂，农药生产