ICS 65.100 B 17 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 1859.10—2017 农药抗性风险评估 第10部分：专性寄生病原真菌对 杀菌剂抗性风险评估 Guidelines on the risk assessment for pesticide resistance- Part 10:The risk assessment for fungicide resistance in obligate parasitic fungi 2017-06-12 发布 2017-10-01实施 中华人民共和国农业部 发布 NY/T1859.10—2017 前言 NY/T1859《农药抗性风险评估》拟分为如下部分： 第1部分：总则； 第2部分：卵菌对杀菌剂抗药性风险评估； 第3部分：蚜虫对拟除虫菊酯类农药抗药性风险评估； 第4部分：乙酰乳酸合成酶抑制剂类除草剂抗性风险评估； 第5部分：十字花科蔬菜小菜蛾抗药性风险评估； 第6部分：灰霉病菌抗药性风险评估； 第7部分：乙酰辅酶A羧化酶除草剂抗性风险评估； 第8部分：霜霉病菌抗药性风险评估； 第9部分：蚜虫类对新烟碱类杀虫剂抗性风险评估； 第10部分：专性寄生病原真菌对杀菌剂抗性风险评估； 第11部分：植物病原细菌对杀菌剂抗性风险评估； 第12部分：小麦田杂草对除草剂抗性风险评估。 本部分为NY/T1859的第10部分。 本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本部分由农业部种植业管理司提出并归口。 本部分起草单位：农业部农药检定所、中国农业大学。 本部分主要起草人：刘西莉、何静、刘鹏飞、杨峻、黄中乔、陈立平、张灿。 1 NY/T1859.10—2017 农药抗性风险评估 第10部分：专性寄生病原真菌对杀菌剂抗性风险评估 1范围 本部分规定了专性寄生病原真菌对杀菌剂抗性风险评估的基本要求、方法及抗药性风险的管理。 本部分适用于白粉菌、锈菌等专性寄生病原真菌对具有直接作用方式的杀菌剂抗性风险评估的农 药登记试验。其他试验可参照本部分执行。 2规范性引用文件 下列文件对于 件。凡是不注日期 最新 版本（包括所有的修订 201 NY/T185 药抗性风险评估 第丨部分：总则 NY/T11 农药室 内生物测是验准则 第4部分防治小麦 粉病试 06 NY/T 156 代验 NY/T 15农 室内生物测定试验准则 第部分防治麦类 锈病试 JRA ARCH 术语和定义 NY/T 66 .5 1667.8界定的以及下列术语和定义适用于本文件 3. 1 药剂驯化 fungicide adaption 用杀菌药剂 亚致死剂量连续对病原菌进行处理，使其 对处理药剂 的过程。 3. 2 紫外诱变 mitag 用紫外线照射病原菌的 3. 3 人 抗药性突变频率 frequency of fungicide resistant mutant 供试靶标病原菌群体中发生抗药性突变的菌株数所古的比率。 3. 4 最小抑制浓度minimuminhibitoryconcentration(MIC 可完全抑制病原菌孢子萌发或菌丝生长的最低药剂浓度 3. 5 抗性指数resistancefactor 抗药性菌株对该药剂的敏感性参数（一般以ECso或MIC表示)与其亲本或野生敏感菌株敏感性参 数或与敏感基线的平均ECso或MIC的比值。 3. 6 适合度fitness 病原菌在存活、生长、致病和繁殖等方面的能力。 NY/T1859.10—2017 3.7 交互抗药性cross-resistance 病原菌对某一杀菌剂产生抗性时，由于相同或相近的抗药性机制，也对其他未接触过的杀菌剂表现 抗性的现象，也称正交互抗药性。 3.8 负交互抗药性negativecross-resistance 病原菌对一种杀菌剂产生抗性时，对其他杀菌剂表现为更加敏感的现象。 4抗性风险评估 4.1抗性风险的影响因子 4.1.1药剂 多作用位点、非选择性杀菌剂如硫黄、石硫合剂、百菌清等在理论上属于低抗性风险的药剂；单作用 位点、选择性强的杀菌剂如醚菌酯、菌酯、啶氧菌酯、吡唑醚菌酯等甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂，多菌灵、 苯菌灵、甲基硫菌灵等苯并咪唑类杀菌剂理论上属于高抗性风险药剂。用于白粉病、锈病防治的其他杀 菌剂，如三唑酮、已唑醇、戊唑醇、苯醚甲环唑、腈菌唑、氟环唑等三唑类杀菌剂，丁苯吗啉、十三吗啉等吗 啉类杀菌剂，氯苯嘧啶醇、乙嘧酚、叶锈特等杂环类杀菌剂理论上属于中等抗性风险的药剂。 4.1.2靶标生物 专性寄生病原真菌指在离体条件下尚不能利用培养基培养，只能寄生在寄主作物上才能生存的病 原真菌。这类真菌数量较少，但危害严重，如白粉菌和锈菌等。其中，主要包括引起小麦白粉病的禾本 科布氏白粉菌小麦专化型（Blumeriagraminisf.sp.tritici），引起黄瓜白粉病的瓜类单丝壳白粉菌 （Erysiphecichoracearum），引起葡萄白粉病的葡萄钩丝壳菌（Uncinulanecator），引起小麦锈病的条形 柄锈菌小麦专化型（Pucciniastriiformisf.sp.tritici）、隐匿柄锈菌小麦专化型（P.reconditaf.sp. tritici）、禾锈菌小麦专化型（P.graminis f.sp.tritici）等，该类真菌离体培养较为困难，但其病菌繁殖 周期较短，再侵染频繁，主要通过气流传播，国际杀菌剂抗药性行动委员会（FungicideResistanceAction Committee，FRAC)将其归为高抗药性风险的病原菌。 4.1.3农事操作及生态环境风险 大面积种植感病品种以及单作或连作等有利于病害发生和流行的种植方式和生态环境条件增加抗 药性风险；单一使用作用机理相同的杀菌剂以及增加药剂选择压力的施药方法均会增加抗药性风险。 4.2抗性风险评估内容 4.2.1敏感基线的建立 从未使用过某种药剂及其相同作用机理药剂的多个代表性地区采集供试菌株（≥60株）。按照 NY/T1156.4、NY/T1156.11和NY/T1156.15中的盆栽法或者离体组织法测定其对该药剂的敏感 性（EC5或MIC)。如果供试菌株敏感性呈单峰分布，则这些菌株可视为野生敏感菌株，其对药剂的 敏感性（ECso或MIC)的平均值可作为靶标菌对该药剂敏感基线的ECso或MIC参数。具体方法见附 录A。 4.2.2药剂特性及交互抗性 明确待评估药剂所属类型、作用方式及其活性和持效期；调查该药剂（或同类药剂）在当地使用的历 史、使用频率；同类药剂是否产生抗药性的现象；当地是否采取了抗药性治理措施。参考以上调查结果， 并依据对敏感菌株和抗药性菌株毒力测定结果，分析该药剂是否与生产上常用药剂之间具有交互抗药 性或负交互抗药性。 4.2.3靶标病原菌产生抗药性的潜能 采用紫外诱变、药剂化的方法对3个以上代表性亲本菌株在室内进行抗药性菌株的筛选。紫外 2 NY/T1859.10—2017 诱变时以紫外线照射后孢子存活率为5%～10%的照射剂量处理，以杀菌剂MIC剂量进行抗药性突变 体筛选；药剂化时须先将健康作物叶片（或叶盘）在接近MIC浓度的药液中浸泡，之后将靶标菌孢子 悬浮液接种于带药叶片表面，培养数天，待其发病并产生孢子（夏孢子或担孢子）后，将孢子洗脱重新接 种到用药液处理过的健康叶片上，并逐渐提高药剂浓度。在含药浓度逐步提高的带药叶片上连续培养 多代之后，将在含MIC药剂浓度之上还能生长的菌体，确定为疑似突变体。将疑似突变体在无药健康 叶片上转接继代培养3代后测定其对杀菌剂的敏感性，抗药性生物学性状能够稳定遗传的菌株作为抗 性菌株。靶标菌产生抗药性的潜能以抗药性突变频率和抗性指数表示。 抗药性突变频率X按式（1)计算。 X = (1) 式中： X一一抗药性突变频率，单位为百分率（%）； Ni一筛选获得的抗药性菌体数量，单位为个； N2一一用于抗药性筛选的供试靶标病原菌群体数量总和，单位为个。 抗性指数（resistancefactor，RF)按式(2)计算。 RF= Ei ...(2) E2 式中： Ei——抗性菌株对该药剂的敏感性(ECso）,单位为微克每毫升（μg/mL)； E2一一亲本菌株对该药剂的敏感性（ECso），单位为微克每毫升（μg/mL）。 4.2.4抗药性菌株的适合度测定 测定靶标病原菌的存活能力、孢子产生能力、孢子萌发能力、致病力和竞争力等适合度相关的生物 学性状指标，比较抗药性菌株和敏感菌株（包括亲本菌株）有无差异。具体方法见附录B。如果抗性群 体的适合度明显低于敏感群体（包括亲本菌株），则抗性群体在田间难以形成优势种群。如果抗性群体 的适合度接近或高于敏感群体（包括亲本菌株），则在药剂选择压力情况下，抗性群体在田间能够形成优 势种群。如果抗性群体的适合度明显高于敏感群体（包括亲本菌株），在没有药剂选择压力的情况下，抗 性群体在田间也容易形成优势种群。 4.2.5抗性风险级别分析 依据抗药性菌株的突变频率、抗性指数和适合度测定结果，并结合交互抗药性、药剂的活性及其作 用机制和病害特征等研究结果，预测药剂在田间推广使用后，靶标菌对其产生抗性的风险。 4.2.5.1高等抗性风险 如果药剂持效期长、作用位点单一或者作用机制不明、田间有同类药剂使用的历史、靶标病原菌易 于产生抗药性突变、抗性指数很高，抗药性菌株适合度接近或高于敏感群体（包括亲本菌株），且防治对 象为气流和雨水传播的多循环病害，则靶标菌对该药剂的抗性风险级别为高等风险。 4.2.5.2中等抗性风险 如果药剂作用位点单一或者作用机制不明、田间有同类药剂使用的历史、靶标菌易于产