ICS 65.020 B 16 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 1248.8—2016 玉米抗病虫性鉴定技术规范 第8部分：镰孢穗腐病 Technical specification on evaluation of maize resistance to pests- Part 8:Fusarium and gibberella ear rot 2016-10-26 发布 2017-04-01实施 中华人民共和国农业部发布 NY/T 1248. 8—2016 前言 NY/T1248《玉米抗病虫性鉴定技术规范》拟分为13个部分： 第1部分：大斑病； 第2部分：小斑病； 第3部分：丝黑穗病； 第4部分：矮花叶病； 第5部分：玉米； 第6部分：腐霉茎腐病； 第7部分：镰孢茎腐病； 第8部分：镰孢穗腐病； 第9部分：纹枯病； 第10部分：弯孢叶斑病； 第11部分：灰斑病； 第12部分：瘤黑粉病； 第13部分：粗缩病。 本部分为NY/T1248的第8部分。 本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本部分由农业部种子管理局提出并归口。 本部分起草单位：中国农业科学院作物科学研究所、全国农业技术推广服务中心、河北省农林科学 院植物保护研究所、四川省农业科学院植物保护研究所、吉林省农业科学院植物保护研究所。 本部分主要起草人：王晓鸣、孙世贤、石洁、李晓、晋齐鸣。 1 NY/T 1248. 8—2016 玉米抗病虫性鉴定技术规范 第8部分：镰孢穗腐病 1范围 本部分规定了玉米抗镰孢穗腐病鉴定技术方法和抗性评价标准。 本部分适用于栽培玉米(Zea mays L.)自交系、杂交种 群体、开放授粉品种以及野生玉米和玉米近 缘种对镰孢穗腐病抗性的田间鉴定和评价。P 2 术语和定义 2. 1 镰孢穗腐病 fusarium and gibberella ear rot 由拟轮枝镰孢（Fa rium verticilliordes 禾谷镰孢（Eusariumgrai 等镰孢菌所引起的 上籽粒腐烊 以玉米雌穗 为特征的病害。该病害表现为玉米雌穗因病原菌侵 染币发 生部分籽粒腐烂或全 穗籽粒及穗轴腐烂或部分籽粒呈现紫红色条纹。 ARC 2. 2 R 采用镰孢菌分生孢 注射而进 的技术。 2. 3 C 籽粒伤！ 口接种 kernelinoculation 采用粗大金 米雌穗苞叶至 接种技术或采用长有镰 孢菌菌丝体的牙 3 ：镰孢菌接种体制备 3.1 病原菌分离 以常规组织分离法从发生穗腐病的玉米籽粒中分离致病镰孢菌。病原菌经形态学鉴定确认为镰孢 单孢纯化培养和致病性测 3.2致病种鉴定 由于多种镰孢菌可以引起玉米穗腐病，因此对用于抗性鉴定接种的病原菌应进行种的鉴定。 鉴定采用形态学方法并结合分子鉴定技术对病原菌进行特异性检测；若病原菌为禾谷镰孢复合 种，还应对病原菌的翻译延伸因子（translation elongation factor 1 alpha，TEF-lα）等基因进行序列 测定，通过基因序列比对，确定病原菌的种（参见附录A）。通过玉米幼苗根系接种，明确病原菌的 致病性。 3.3病原菌繁殖 在接种前需要进行病原菌的繁殖 3.3.1拟轮枝镰孢分生孢子的产生 将病原菌接人液体培养基中，在25℃、自然光下静置培养10d～15d。以双层纱布过滤培养物并获 得分生孢子悬浮液，用无菌水将分生孢子悬浮液浓度调至2×10°孢子/mL，即可用于接种。 1 NY/T 1248.8—2016 3.3.2禾谷镰孢分生孢子的产生 将病原菌接入分生孢子诱导培养基中，在25℃、自然光条件下振荡(120rpm)培养7d。以双层纱布 过滤培养物并获得分生孢子悬浮液，用无菌水将分生孢子悬浮液浓度调至2×106孢子/mL，即可用于 接种。分生孢子悬浮液可在2℃～4℃下保存3周～4周。 3.3.3拟轮枝镰孢/禾谷镰孢带菌牙签的培养 在马铃薯葡萄糖琼脂平板培养基或倒有培养基的100mL容量烧杯中接种拟轮枝镰孢或禾谷镰孢。 培养7d后，将无菌牙签插人长满镰孢菌的培养基中，25℃下黑暗培养7d10d，待菌丝生长至牙签1/3 处后即可用于接种。 4抗病性鉴定圃 4.1鉴定圃设置 鉴定圃应具备良好的自然发病环境，能够进行自主灌溉 4. 2 2鉴定设计 鉴定材料随机排列或顺序排列。在进行选育品种抗病性鉴定时，每30行鉴定材料设1组已知抗病 和感病对照材料（参见附录B）。在进行种质资源抗病性鉴定时，每50行鉴定材料设1组已知抗病和感 病对照材料。 4.3种植要求 鉴定材料播种时间与生产播种时间相同。 鉴定小区行长5.00m，行距0.60m或0.65m，条播或穴播，确保每行留苗25株～30株，低于25株 时视为该品种/材料鉴定无效。鉴定种质资源时，每份鉴定材料种植1行；鉴定选育品种时，每份材料种 植2行。土壤肥力水平和耕作管理与大田生产相同。 5接种 5.1接种时期 接种时期为玉米雌穗吐丝后4d～7d(R1),接种可全天进行。 5.2接种方法 5.2.1花丝通道接种 接种采用注射法，器具为可进行连续定量注射的连动注射器。将注射器吸液管置于病原菌的分生 孢子悬浮液中，金属的注射针管从雌穗顶端上方的花丝通道部位侧边插入至花丝通道中间，定量注入 2mL接种液。注入的菌液沿花丝向雌穗的籽粒方面流消，分生孢子萌发，菌丝生长，完成对籽粒的侵 染。每株仅接种第一个雌穗。 5.2.2籽粒伤口接种 5.2.2.1针刺接种 方法一为用空心金属针连接有注射接种液的器具在雌穗中上部苞叶外进行穿刺，当金属针刺人籽 粒时，同时进行注射接种。方法二为用端部钉有2个～5个金属钉的木棒穿刺雌穗中上部苞叶，深度约 5mm，直至籽粒中部；穿刺前，金属钉先在镰孢菌分生孢子悬浮液中浸蘸，以使病原菌附着在钉子上，穿 刺时即完成对籽粒的接种。 5.2.2.2牙签接种 将经过培养后带有大量病原菌菌丝的牙签直接在雌穗中上部苞叶外刺入并达到籽粒中部。为确保 菌丝被带入籽粒，接种采用双牙签法，也可用尖的金属器具先在雌穗上钻孔，然后插入带菌牙签。 5.3接种前后的田间管理 接种鉴定田不应特殊管理。玉米接种后适度保持田间大气湿度即可满足发病要求。 2 NY/T 1248.8—2016 6 病情调查 6.1调查时间 在玉米生理成熟后(R6)进行调查。 6.2调查方法 采收接种的雌穗，去除苞叶后逐穗调查并对雌穗籽粒被病菌侵染的面积进行分级记载。 6.3病情分级 依据表1中的描述，逐个记载调查雌穗的发病级别。图1为雌穗发病面积的模拟图 表 1玉米对穗腐病抗性鉴定的病情级别划分 病情分级 描述 发病面积占雌穗总面积0%～1% 3 发病面积占雌穗总面积2%～10% 5 发病面积占雌穗总面积11%～25% 7 发病面积占雌穗总面积26%～50% 9 发病面积占雌穗总面积51%～100% 0% 1% 10% 25% 50% 100% 注：左为经花丝通道接种后的发病模拟，右为苞叶穿刺接种后的发病模拟。 图1玉米雌穗发病面积模拟图(仿Reid et al.1996) 7抗性评价 7.1鉴定有效性判别 当设置的感病对照材料平均病情级别≥5.6时，该批次鉴定视为有效。 7.2抗性评价标准 计算每份鉴定材料雌穗的平均病情级别,并依据平均级别确定该鉴定材料对穗腐病的抗性，抗性的 划分标准见表2。 3 NY/T 1248.8—2016 表2玉米对镰孢穗腐病抗性评价标准 平均病情级别 抗性 ≤1. 5 高度抗病Highlyresistant（高抗HR） 1.6~3.5 抗病 Resistant(抗 R) 3.6~5.5 中度抗病Moderatelyresistant(中抗MR) 5. 6~ 7. 5 感病Susceptible(感S) 7.6~9.0 高度感病Highlysusceptible(高感HS) 7.3重复鉴定 若鉴定材料初次鉴定时表现为高抗、抗、中抗，应在翌年进行重复鉴定。 7.4抗性评价 鉴定材料进行抗性评价 8 鉴定结果汇总表格 玉米抗镰孢穗 离病鉴 理后填 鉴定结果表格，见表 玉米抗 镰孢穗腐病鉴定结果表 编号 品利 平均 亢性评价 注1：鉴定地 注2:接种病原菌 注3：接种日其 香日期 鉴定技术负 NY/T 1248.8—2016 附录A （资料性附录） 玉米镰孢穗腐病病原菌 A. 1 主要致病镰孢菌种学名和形态描述 A.1.1拟轮枝镰孢（无性态)/藤仓赤霉（有性态） 无性态学名：Fusar 异名：Fi Oospo 有性态学 异 名： tbberella var. moniliformis Winel Inela Lsed ujikuroi Sawada 拟轮枝镰孢无性态特征：小型分生孢子念珠状串生，无色单胞，（5 ～3）μm;大型分 生孢子较少， 无色.锅 刀状，略弯，两端尖3分隔 5分隔：（1560）um） um 有性态特征:较 少形成,子 直径22 内含8 子囊孢子大小 (14~18) u 62.um A. 1. 2 禾谷镰孢（无性态）/玉蜀黍赤霉菌（有性态） 无性态 名：F CEN 有性态学 学 larzeael hwein. 异名 Schweir ha 禾谷镰孢 态特征 开 孢子 状。有隔膜3个 顶端 成略微收缩，基部有明 显的足细胞，3隔 隔的分 大小 寸 μm 隔的分生孢子大小为 (48～50)μmX(3 μm; 分生 子 少或 ，无厚垣孢 有性 寺征：子囊壳卵圆状，直径 约140 μm~250 μm; 长棒状 子囊孢子，（19～24）μmX (3~4) μm。 A.1.3燕麦镰孢(无性态)/燕麦赤霉菌(有性态) 无性态学名:Fusarium aven