ICS 65.020 B 16 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 1248.10—2016 玉米抗病虫性鉴定技术规范 第10部分：弯孢叶斑病 Technical specification on evaluation of maize resistance to pests- Part 10:Curvularia leaf spot 2016-10-26 发布 2017-04-01实施 中华人民共和国农业部 发布 NY/T 1248. 10—2016 前言 NY/T1248《玉米抗病虫性鉴定技术规范》拟分为13个部分： 第1部分：大斑病； 第2部分：小斑病； 第3部分：丝黑穗病； 第4部分：矮花叶病； 第5部分：玉米； 第6部分：腐霉茎腐病； 第7部分：镰孢茎腐病； 第8部分：镰孢穗腐病； 第9部分：纹枯病； 第10部分：弯孢叶斑病； 第11部分：灰斑病； 第12部分：瘤黑粉病； 第13部分：粗缩病。 本部分为NY/T1248的第10部分 本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本部分由农业部种子管理局提出并归口。 本部分起草单位：中国农业科学院作物科学研究所、全国农业技术推广服务中心、河北省农林科学 院植物保护研究所、四川省农业科学院植物保护研究所、吉林省农业科学院植物保护研究所。 本部分主要起草人：王晓鸣、孙世贤、石洁、李晓、晋齐鸣。 I NY/T 1248.10—2016 玉米抗病虫性鉴定技术规范 第10部分：弯孢叶斑病 1范围 本部分规定了玉米抗弯孢叶斑病鉴定技术方法和抗性评价标准。 本部分仅适用于栽培玉米（Zea mays L.）自交系、杂交种、群体、开放授粉品种以及野生玉米和玉米 近缘种对弯孢叶斑病抗性的田间鉴定和评价。 2 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 2. 1 弯孢叶斑病 curvularia leaf spot 由弯孢属(Curuularia Boedijn)真菌侵染、引起以植株叶片产生大量典型的点状近圆形病斑为特征 的玉米病害。在中国，主要致病种为新月弯孢［Curuularialunata（Wakker）Boedijn]。 3弯孢菌接种体制备 3.1病原物分离 以常规组织分离法从发病植株叶片的典型病斑上分离弯孢叶斑病病原物。分离物经形态学鉴定确 认为弯孢属真菌后，进行纯化培养和致病性测定 3.2病原物种的鉴定 对用作抗病性鉴定接种体的病原物应进行种的鉴定，依据形态学特征（参见附录A)确定病原物的 种级分类地位。 3.3接种体繁殖 接种体繁殖方法为：将在马铃薯葡萄糖琼脂(Potato dextrose agar,PDA)平板培养基上培养的病原 菌接种于经高压灭菌的高梁粒上扩大繁殖（参见附录A),在25℃～28℃下培养5d～7d,菌丝布满高梁 粒，倒出并铺于垫有灭菌纸的瓷盘中保湿，待大量产生分生孢子后阴干待用。 4抗病性鉴定圃 4.1鉴定圃设置 鉴定圃具备良好的自然发病环境，能够进行田间灌溉和排涝，或具备叶面喷雾设施， 4.2鉴定设计 鉴定材料随机排列或顺序排列。鉴定选育品种时，每份材料种植2行，每15份品种设1组已知高 抗、高感对照材料（见附录B)；鉴定种质资源时，每份材料种植1行，每50份种质设1组已知高抗、高感 对照材料。鉴定小区两端应种植不少于2行的保护行。 4.3种植要求 鉴定材料播种时间与大田生产相同。鉴定小区行长5m，行距与植株密度根据各区域品种试验要 求确定，条播或穴播。对选育品种进行抗性鉴定时，双行留苗≥50株；对种质资源等材料进行抗性鉴定 时，单行留苗≥25株。土壤肥力水平和耕作管理与大田生产相同。 1 NY/T 1248. 10—2016 5接种 5.1接种时期 接种时期为玉米喇叭口期（11叶期)至抽雄初期，接种选择在傍晚或阴天时进行，同批次鉴定材料 应在同一天完成。 5.2接种方法 采用叶片喷雾法接种。将不同地点来源的3个～4个弯孢菌菌株分别繁殖后混合，用水洗下分生 孢子，再经过滤，制备浓度为（1×105）个分生孢 106）个分生孢子/mL的接种悬浮液，再加 人0.01%吐温20（V/V）。喷雾接种叶片，接种量为10mL/株～20m） 5.3接种时的田间管理 供病害发生所需的适宜湿度。 事操作应在同一天内完成。 6 病情调查 6. 1 调查时间 在玉米进人乳熟后 期进行 周查，同批次接种、生 进程相近的材料在同 S 香 6.2调查方法 调查者目测每 鉴定材 才料群体的发病状况 叶及 根据病情级别 划分标准,对每 料进行 载 6.3 病情分级 R 田间病情分级 玉米弯孢叶 考病情分 病情级别 1 3 病斑，占叶面积 5 十有较 7 3叶有大 33叶基本为病斑覆盖，叶片枯死 抗性评价 7. 1 鉴定有效性判别 当设置的高感对照材料发病程度达 到感病（7级)及以上时，该批次鉴 定视为有效， 7. 2 抗性评价标准 依据鉴定材料群体发病程度(病情级别)确定其抗性水平，评价标准见表2。 表2玉米对弯孢叶斑病抗性的评价标准 病情级别 抗 性 高度抗病Highlyresistant（高抗HR) 3 抗病Resistant(抗R） 5 中度抗病Moderatelyresistant（中抗MR） 7 感病Susceptible(感S) 9 高度感病Highly susceptible(高感HS) 7. 3 重复鉴定 2 NY/T 1248. 10—2016 若鉴定材料初次鉴定时表现为高度抗病、抗病、中度抗病，应在第二年进行重复鉴定。 7. 4抗性评价 对初次鉴定结果和重复鉴定结果进行比较，以记载的最高病情级别为最终鉴定结果，并依此对鉴定 材料进行抗性评价（见附录B)。 NY/T 1248. 10—2016 附录A (资料性附录） 玉米弯孢叶斑病病原菌 A.1学名和形态描述 A.1.1新月弯孢(无性态)/新月旋孢腔菌(有性态)是中国的主要致病种。 无性态学名：Curvularia lunata（Wakker）Boedijn 有性态学名:Cochlibolus lunatus Nalson et Haasis 在PDA平板培养基上菌落圆形,周缘整齐，气生菌丝绒絮状，灰白色，菌落背面呈黑褐色；分生孢子 梗单生或丛生，多隔，直立或弯曲，有时分枝，顶部常呈屈膝状合轴式延伸，（70～270）um×（2～4）μm； 分生孢子着生于孢子梗的顶侧部，暗褐色，弯曲，椭圆形、圆柱形、宽纺锤形等，少数呈“Y”形，向一侧弯 曲，多数为由3个隔膜间隔的细胞组成，中间2个细胞膨大、色深，而两端细胞颜色较淡，（18～32）μm× （8～16）μm;分生孢子以一端或两端萌发为主。有性态新月旋孢腔菌在自然界中较少见 A.1.2在我国还有其他一些弯孢菌也能够引起玉米的弯孢叶斑病。 苍白弯孢，学名：Curuularia pallescens Boedijn 不等弯孢，学名：Curvularia inaequalis（Shear）Boedijn 间型弯孢，学名：Curvularia intermedia Boedijn 棒弯孢，学名：Curvularia clavata Jain 弯孢菌形态分类学论著见参考文献。 A. 2 2弯孢菌的培养和保存 马铃薯葡萄糖琼脂（Potatodextroseagar,PDA)培养基：马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂18g～ 20g，水1000mL。PDA培养基用于弯孢菌的培养和保存，培养温度为25℃～28℃；保存采用斜面试 管，保存温度为4℃，保存期限为一年以上。高梁粒培养基：高梁粒浸泡1h～2h，装人1000mL容量三 角瓶中（约700mL高粱粒），于121℃下灭菌1h，冷却后待用。 4 NY/T 1248.10—2016 附录B （规范性附录） 鉴定结果汇总和对照用自交系 B. 1 鉴定结果汇总表格 玉米抗弯孢叶斑病鉴定结果整理后填入鉴定结果表格，见表B.1。 表 B. 1 年玉米抗弯孢叶斑病鉴定结果表 编号 品种/种质名称 来源 病情级别 抗性评价 注1：鉴定地点 注2：接种病原菌分离物编号 注3：接种日期 调查日期 鉴定技术负责人(签字)： B. 2 2抗病对照自交系 沈137,对弯孢叶斑病表现稳定的中度抗病（Moderatelyresistant，MR）至抗病（resistant，R)反应， 选自国外玉米杂交种6JK111。 B. 3 感病对照自交系 掖478，对弯孢叶斑病表现稳定的高度感病（Highlysusceptible，HS），选自自交系U8112和沈5003 的组配后代。