ICS71.100.70 CCSY42DB61 陕西省地方标准 DB61/T1815—2024 化妆品修护功效测试技术规范 TechnicalSpecificationforcosmeticsrepairefficacytest 2024-04-03发布 2024-05-03实施 陕西省市场监督管理局发布DB61/T1815—2024 I目  次 前言.....................................................................................................................................................................II 1范围.................................................................................................................................................................1 2规范性引用文件.............................................................................................................................................1 3术语和定义.....................................................................................................................................................1 4基本要求.........................................................................................................................................................2 5测试准备.........................................................................................................................................................3 6测试.................................................................................................................................................................3 7数据分析.........................................................................................................................................................4 8测试报告.........................................................................................................................................................5 9质量保证.........................................................................................................................................................5 附录A（资料性）图片处理方法................................................................................................................6DB61/T1815—2024 II前  言 本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起 草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由陕西省药品监督管理局提出并归口。 本文件起草单位：陕西省食品药品检验研究院、陕西博溪通用检测科技有限公司、陕西省药品和疫 苗检查中心、陕西省药品技术审评中心、咸阳市食品药品检验检测中心。 本文件主要起草人：蔡虎、刘海静、冯润东、曹涵博、杨文娟、吴小勇、党琳琳、卢永波、李潇、 王莉芳、罗阿利、张若冰、李晓春。 本文件首次发布。 本文件由陕西省食品药品检验研究院负责解释。 联系信息如下： 单位：陕西省食品药品检验研究院 电话：029-62288412 地址：陕西省西安市高新区科技五路21号 邮编：710065DB61/T1815—2024 1化妆品修护功效测试技术规范 1范围 本文件规定了化妆品修护功效测试的基本要求、测试准备、测试、数据处理、测试报告和质量保证 的要求。 本文件适用于化妆品体外角质形成细胞迁移率的测试。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T622化学试剂盐酸 GB/T646化学试剂氯化钾 GB/T678化学试剂乙醇(无水乙醇) GB/T1263化学试剂十二水合磷酸氢二钠（磷酸氢二钠） GB/T1266化学试剂氯化钠 GB/T1274化学试剂磷酸二氢钾 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T21395二甲基亚砜 SN/T3899化妆品体外替代试验良好细胞培养和样品制备规范 3术语和定义 SN/T3899界定的以及下列术语及定义适用于本文件。 3.1 修护repair 有助于维护施用部位保持正常状态。 3.2 细胞迁移cellmigration 指细胞在接收到迁移信号或感受到某些物质的刺激后而产生的移动。 3.3 细胞铺板率cellfusionrate 细胞覆盖培养皿的面积占培养皿总表面积的百分比。DB61/T1815—2024 24基本要求 4.1环境要求 4.1.1与细胞相关的实验操作应在无菌环境下进行，洁净度应达到100级要求，环境温度应控制在 20℃～24℃，环境湿度应控制在50%～70%，防震动，防电磁干扰。 4.1.2其他试验操作应在常规实验室环境下进行，生物安全等级达到一级要求。 4.2耗材和试剂 4.2.1一般要求 所用试剂应为分析纯，试验用水应按GB/T6682的要求进行制备。与细胞培养相关试剂、耗材应作 无菌处理。 4.3耗材 耗材应满足下列要求： a)细胞培养瓶规格为25cm2、75cm2； b)细胞培养板为6孔平底细胞培养板； c)无菌离心管规格为1.5mL、15mL、50mL； d)移液器枪头为10μL、200μL、1000μL； e)过滤器孔径为0.22μm； f)直尺长度≥15cm。 4.4试剂 试剂应满足下列要求： a)二甲基亚砜应符合GB/T21395的要求； b)无水乙醇应符合GB/T678的要求； c)磷酸二氢钾（KH2PO4）应符合GB/T12745的要求； d)十二水合磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O）应符合GB/T12635的要求； e)氯化钠（NaCl）应符合GB/T12665的要求； f)氯化钾（KCl应符合GB/T6465的要求； g)盐酸（HCl）应符合GB/T6225的要求； h)角质形成细胞培养基为无血清培养基； i)表皮细胞生长因子(EGF)纯度≥95%。 4.5试剂配制 试剂配制应满足以下要求： a)磷酸盐缓冲溶液（0.1M，pH7.4）：称定0.27g磷酸二氢钾、2.87g十二水合磷酸氢二钠、8.00 g氯化钠和0.20g氯化钾加水800mL溶解，用盐酸调pH至7.4，并加水定容至1000mL，过 滤除菌，冷藏保存，有效期14d； b)EGF溶液（1ng/mL）：称定10ngEGF标准品溶于10mL角质形成细胞培养基中，配置成1 ng/mL过滤除菌，冷冻保存，有效期28d。 4.6仪器设备DB61/T1815—2024 3仪器设备应符合以下要求： a)倒置显微镜放大倍数为100倍～400倍； b)细胞培养箱条件为37℃，5%CO2，95%相对湿度； c)分析天平精度为0.0001g； d)移液器量程为100μL～1000μL、20μL～200μL、2μL～20μL； e)超净工作台洁净度达到100级。 5测试准备 5.1细胞准备 5.1.1应采用人源皮肤的原代角质形成细胞，以角质形成细胞培养基为基础培养液于细胞培养箱中培 养。 5.1.2测试前，宜取冷冻保存的角质形成细胞进行复苏培养，传代培养到P7代时，以2×105个细胞/ 孔的密度接种到6孔细胞培养板中，每个试验组准备3个复孔。置于细胞培养箱中孵育