ICS71.100.70 CCSY42DB61 陕西省地方标准 DB61/T1813—2024 化妆品紧致功效测试技术规范 TechnicalSpecificationforcomesticsfirmingefficacytest 2024-04-03发布 2024-05-03实施 陕西省市场监督管理局发布DB61/T1813—2024 I目  次 前言.....................................................................................................................................................................II 1范围.................................................................................................................................................................1 2规范性引用文件.............................................................................................................................................1 3术语和定义.....................................................................................................................................................1 4基本要求.........................................................................................................................................................2 5测试准备.........................................................................................................................................................3 6测试.................................................................................................................................................................4 7数据处理.........................................................................................................................................................5 8测试报告.........................................................................................................................................................5 9质量保证.........................................................................................................................................................5DB61/T1813—2024 II前  言 本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起 草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由陕西省药品监督管理局提出并归口。 本文件起草单位：陕西省食品药品检验研究院、陕西博溪通用检测科技有限公司、陕西省药品和疫 苗检查中心、陕西省药品技术审评中心、咸阳市食品药品检验检测中心。 本文件主要起草人：王莉芳、蔡虎、曹涵博、杨文娟、卢永波、李潇、刘海静、吴小勇、冯润东、 党琳琳、罗阿利、张若冰、李晓春。 本文件首次发布。 本文件由陕西省食品药品检验研究院负责解释。 联系信息如下： 单位：陕西省食品药品检验研究院 电话：029-62288412 地址：陕西省西安市高新区科技五路21号 邮编：710065DB61/T1813—2024 1化妆品紧致功效测试技术规范 1范围 本文件规定了化妆品紧致功效测试的基本要求、测试准备、测试、数据处理、测试报告和质量保证 的要求。 本文件适用于化妆品体外成纤维细胞弹性蛋白含量测试。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T622化学试剂盐酸 GB/T646化学试剂氯化钾 GB/T678化学试剂乙醇（无水乙醇） GB/T1263化学试剂十二水合磷酸氢二钠（磷酸氢二钠） GB/T1266化学试剂氯化钠 GB/T1274化学试剂磷酸二氢钾 GB/T3102.6光及有关电磁辐射的量和单位 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T21395二甲基亚砜 SN/T3899化妆品体外替代试验良好细胞培养和样品制备规范 3术语和定义 SN/T3899界定的以及下列术语和定义适用于本文件。 3.1 紧致firming 有助于保持皮肤的紧实度，弹性。 3.2 紫外光辐照强度ultravioletlightirradiance 入射到某一表面的紫外线（如UVA）的强度，单位为瓦每平方米（W/m²）或毫瓦每平方厘米（mW/c m²）。DB61/T1813—2024 23.3 紫外光辐照剂量ultravioletlightirradiationdose 入射到某一表面的紫外线（如UVA）的量（强度×时间），单位为焦耳每平方米（J/m²）或焦耳每 平方厘米（J/cm²）。 3.4 酶联免疫吸附测定法enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA 将抗原或抗体结合在固相载体表面，利用抗原抗体的特异性结合以及抗体或者抗原上标记的酶催化 特定底物发生显色反应，实现目标物检测的免疫分析方法。 4基本要求 4.1环境要求 4.1.1与细胞相关的实验操作应在无菌环境下进行，洁净度应达到100级要求，环境温度应控制在 20℃～24℃，环境湿度应控制在50%～70%，防震动，防电磁干扰。 4.1.2其他试验操作应在常规实验室环境下进行，生物安全等级达到一级要求。 4.2耗材和试剂 4.2.1一般要求 所用试剂应为分析纯，试验用水应按GB/T6682的要求进行制备。与细胞培养相关试剂、耗材应作 无菌处理。 4.2.2耗材 耗材应满足下列要求： a)细胞培养瓶为25cm²、75cm²培养瓶； b)细胞培养板为6孔平底细胞培养板； c)无菌离心管规格为1.5mL、15mL、50mL； d)移液器枪头规格为10μL、200μL、1000μL； e)过滤器孔径为0.22μm。 4.2.3试剂 试剂应满足下列要求： a)低糖Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium培养基（DMEM）； b)新生牛血清应符合SN/T3899的要求； c)磷酸二氢钾（KH2PO4）应符合GB/T1274的要求； d)十二水合磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O）应符合GB/T1263的要求； e)氯化钠（NaCl）应符合GB/T1266的要求； f)氯化钾（KCl）应符合GB/T646的要求； g)盐酸（HCl）应符合GB/T622的要求； h)无水乙醇应符合GB/T678的要求； i)转化生长因子-β1（TGF-β1）粉末纯度≥95%；DB61/T1813—2024 3j)二甲基亚砜应符合GB/T21395的要求； k)酶联免疫试剂盒：用于检测弹性蛋白含量，灵敏度<44pg/mL，检测范围0.18ng/mL～12ng/mL。 4.3试剂配制 试剂配制应满足以下要求： a)细胞培养液：取90mLDMEM培养液，添加10mL新生牛血清，混合均匀，冷藏保存，有效 期14d； b)磷酸盐缓冲溶液（0.1M，pH7.4）：称定0.27g磷酸二氢钾、2.87g十二水合磷酸氢二钠、8.00 g氯化钠和0.20g氯化钾加水800mL溶解，用盐酸调pH至7.4，并加水定容至1000mL，过 滤除菌，冷藏保存，有效期14d； c)TGF-β1溶液（100ng/mL）：称定0.002mgTGF-β1，溶于1mL细胞培养液中，配置成0.002 mg/mL的母液，使用0.22μm过滤器进行过滤除菌，冷冻保存，有效期28d，使用时用细胞培 养液稀释成