ICS65.020.30 CCSB 4354 西 藏 自 治 区 地 方 标 准 DB54/T 0410—2024 绵羊细管冻精制作技术规范 2024-09-15发布 2024-10-15实施 西藏自治区市场监督管理局  发 布 DB54/T 0410—2024 I目 次 前言..................................................................................II 1 范围................................................................................1 2 规范性引用文件......................................................................1 3 术语和定义..........................................................................1 4 采精前的准备........................................................................1 5 采精................................................................................2 6 冻精制作............................................................................3 7 精液质量要求及试验方法..............................................................4 附录A（资料性） 稀释液的配制..........................................................6DB54/T 0410—2024 II前 言 本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由西藏自治区农业农村标准化技术委员会提出并归口。 本文件起草单位：西藏自治区农牧科学院畜牧兽医研究所。 本文件主要起草人：任越、刘孟君、扎西央宗、次旺仁增、达娃顿珠、阚向东、石斌。DB54/T 0410—2024 1绵羊细管冻精制作技术规范 1　范围 本文件规定了高山型、草地型、河谷型绵羊细管冻精制作的基本要求、稀释液配制、采精、精液处 理、精液冷冻、标记、贮存、解冻与活力检测、精液质量要求及试验方法等。 本文件适用于绵羊规模化养殖场或合作社。 2　规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB 20557 山羊冷冻精液 GB/T 5458 液氮生物容器 NY 1181 输精细管 NY/T 1234 牛冷冻精液生产技术规程 3　术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1　 鲜精 未经处理的新鲜精液。 3.2　 精子密度 1ml精液中的精子个数。 3.3　 精子活力 精液中呈直线向前运动精子个数所占总精子个数的百分比。 3.4　 前进运动精子数 每剂量精液中呈前进运动精子个数。 3.5　 细菌数 每剂量精液经培养后观察到的细菌菌落数。 3.6　 细管冻精 细管注入精液经液氮冷冻所形成的产品。DB54/T 0410—2024 24　采精前的准备 4.1　冻精制作室的要求 冻精制作室要求封闭，温度为18℃～25℃，室内清洁卫生，做到无菌操作。 4.2　仪器设备 4.2.1　生产设备 用于绵羊细管冷冻精液生产的仪器设备见表1。 表1　绵羊细管冻精生产设备 序号 设备名称 规格/参数 1 精液细管喷码机 2 细管封装机 0.21ml～0.23ml 3 精液程控冷冻仪 45℃～-140℃ 4 电子天平 0.0001克 4.2.2　检验设备 用于绵羊细管冻精质量检验的设备见表2. 表2　绵羊细管冻精质量检验设备 序号 设备名称 规格/参数 1 动物精子全自动分析系统含显微镜(100倍～400倍)、电脑、成像 系统 2 恒温恒湿培养箱 ±0.5℃ 3 净化工作台 菌落数≤0.5个每皿每小时 4 数显恒温水浴锅 ±0.5℃ 5 电热高压灭菌锅 0 Mpa～0.25 Mpa 4.3　器械清洗和消毒 器械的清洗与消毒按照NY/T 1234进行。 4.4　稀释液的配制 稀释液的配制参照规范性附录A执行。 5　采精 5.1　采精环境要求 采精场所应保持安静，地面平整，清洁卫生，采精前做好彻底消毒。 5.2　种公羊选择 用于冻精生产的种公羊应符合本品种标准，体质健壮，无遗传缺陷及国家规定的传染病。DB54/T 0410—2024 35.3　采精方法 5.3.1　台羊选择 选择体高略低于种公羊、体格结实、性情温顺的母羊作台羊，保定在采精架内。 5.3.2　假阴道的准备 将消毒过的假阴道内胎，用生理盐水棉球从里到外擦试，在假阴道一端扣上集精瓶，集精瓶夹层内 要注入30 ℃～35 ℃的水。在假阴道外壳中部注水孔注入145毫升～150毫升的50 ℃～55 ℃水，拧上气 嘴活塞，套上双连球打气，使假阴道的采精口形成丫字形。最后把温度计插入假阴道内测温，温度在 38℃～40 ℃为宜。在假阴道内胎的前1/3，涂抹适量凡士林作润滑剂。 5.3.3　采精操作 采精前，将公羊包皮周围及台羊后躯擦干净。采精员蹲在台羊右侧后方，右手握假阴道，气卡塞向 下，靠在台羊臀部，假阴道和地面呈35°角。当公羊爬跨伸出阴茎时，左手轻托阴茎包皮，迅速地将阴 茎导入假阴道内，当种公羊完成抬头、挺腰、前冲动作时，表示射精完毕。随着公羊从台羊身上滑下时， 将假阴道取下，立即使集精瓶的一端向下坚立，打开气卡塞，放气取下集精瓶，送操作室检查。 6　冻精制作 6.1　鲜精保存 玻璃器皿均应放在32 ℃恒温箱中，稀释液放在34 ℃恒温水浴箱中备用。盛装稀释精液的稀释管， 应做明显标记。 6.2　精液稀释 根据精液分析仪对精液的品质分析结果，加入稀释液，稀释5倍液～10倍液。 6.3　精液封装 6.3.1　细管要求 细管为无毒、 耐低温的专用塑料管。0.25ml剂型。 保证清洁、 无菌。 细管的选择和标准应符合 NY 1181 要求。 6.3.2　封装 采用细管（灌装、封口、印字）一体机，在室温下封装，管内需留0.4cm～0.6cm的空隙。 6.4　降温和平衡 将封装好的细管冻精放在假阴道中，用棉花固定，插入温度计，外边用8层纱布裹好；放入4℃恒温 箱中经1h～1.5h逐渐降温到3℃～5℃，然后在此温度下平衡1h。 6.5　细管精液的冷冻 6.5.1　程控冷冻仪冷冻DB54/T 0410—2024 4采用程控冷冻仪按预选的最佳冷冻曲线自动完成冷冻过程。冷冻曲线最佳降温速率为：4℃～-10℃ （降温速率5℃/min）,-10℃～-100℃（降温速率55℃/min），-100℃～-140℃（降温速率20℃/min）。 冷冻时间7min。 6.5.2　自制冷冻槽冷冻 用自制冷冻槽冷冻细管时，冷冻温度控制在-100℃～-140℃。冷冻时间8min。 6.6　冻精收集 冷冻完的细管冻精装入纱布袋中， 在纱布袋上标记种公羊的资料信息包括品种、 生产单位、 公羊号、 生产日期等，放入液氮中浸泡。 6.7　解冻与活力检查 冷冻后的精液可在任一时间进行解冻。解冻时，预先把水浴锅水温加热至38 ℃～40 ℃，用镊子取 一支冷冻后的细管精液迅速浸泡入水中并晃动，待溶解后立即取出，用吸水纸或纱布擦干水珠，再用细 管剪减去封口端，滴5微升～10微升精液于载玻片上进行活力检查。检查合格的冻精作为初检合格品妥 善贮存。 6.8　贮存 用液氮生物容器贮存藏羊冻精，液氮生物容器应符合GB/T 5458要求。设专人保管，每周定时加一 次液氮，保证冻精始终浸在液氮中。应经常检查液氮生物容器的状况，如发现容器异常，立即将冻精转 移到其他完好的容器内。取存冻精时，冻精离开液氮的时间不得超过5秒。取放冻精之后，应及时盖好 容器塞，防止液氮蒸发或异物浸入。 7　精液质量要求及试验方法 7.1　鲜精质量要求及试验方法 用于绵羊细管冻精生产的鲜精质量应符合表3的要求。有一项不符合的精液，不得用于冻精生产。 表3　鲜精质量指标 序号 项目 质量指标 试验方法 1 外观 颜色为乳白色或淡黄色，有腥味 目测 2 精液量 0.5ml～1.0ml 带刻度的集精杯 3 PH值 7.2～8.0 PH检测仪/试纸 4 精子活力 ≥70% 5 精子密度 ≥15亿每毫升 6 精子畸形率 ≤10%用动物精子全自动分析系统 /按照GB 20557中附录A测定 7.2　冻精质量要求及试验方法 7.2.1　检验规则 每只公羊每季度冻精型式检验不少于一次。 出站检验的项目：外观、精子活力。检验合格，可作为合格品交付使用。DB54/T 0410—2024 57.2.2　冻精质量评价 绵羊细管冻精质量应符合表4的要求。 表4　冻精质量指标 序号 项目 质量指标 试验方法 1 细管外观 细管无裂痕、两端封