ICS65.020.20 CCSB 0554 西 藏 自 治 区 地 方 标 准 DB54/T 0408—2024 羊肚菌菌种生产技术规程 2024-09-15发布 2024-10-15实施 西藏自治区市场监督管理局  发 布 DB54/T 0408—2024 I目 次 前 言............................................................................II 1 范围..................................................................................1 2 规范性引用文件........................................................................1 3 术语和定义............................................................................1 4 菌种生产要求..........................................................................1 5 母种生产..............................................................................2 6 原种生产..............................................................................3 7 栽培种生产............................................................................3 8 生产档案..............................................................................4 附 录A （规范性） 检 验 要 求...................................................5DB54/T 0408—2024 II前 言 本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由西藏自治区农牧科学院提出。 本文件由西藏自治区农业农村标准化技术委员会归口。 本文件起草单位：西藏自治区农牧科学院蔬菜研究所、西藏自治区高原生物研究所。 本文件主要起草人：谢荣、徐爱国、张君丽、白玛旦增、孙慧娟、高磊、朱雪峰、王文海。DB54/T 0408—2024 1羊肚菌菌种生产技术规程 1　范围 本文件规定了羊肚菌菌种母种、原种、栽培种生产技术要求及生产档案。 本文件适用于羊肚菌母种、原种和栽培种生产技术。 2　规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB 5749 生活饮用水卫生标准 GB 50073 洁净厂房设计规范 GB/T 12728 食用菌术语 NY/T 528 食用菌菌种生产技术规程 NY/T 1731 食用菌菌种良好作业规范 NY/T 1742 食用菌菌种通用技术要求 NY/T 1935 食用菌栽培基质质量安全要求 3　术语和定义 GB/T 12728界定的以及下列术语和定义适用于本文件。 3.1　 羊肚菌 子囊菌亚门、盘菌纲、盘菌目、羊肚菌科、羊肚菌属统称。 4　菌种生产要求 4.1　场地、厂房要求 选择地势高，通风供电良好，给排水通畅，交通便利场地。 厂房有各自隔离的摊晒场、原料库、配料搅拌区、装袋区、灭菌区、冷却区、接种区、发菌区和冷 藏库。地面防水、防腐蚀、防渗漏、防滑，易清洗，有排水排气系统 ； 墙壁和吊顶应防潮、防霉、防水， 易清洗。场地、厂房符合GB 50073和NY/T 528相关规定。水质符合GB 5749相关规定。 4.2　生产设备 电子秤、搅拌机、装袋机、高压灭菌锅、臭氧发生器、超净工作台或接种箱或百级净化层流罩、恒 温培养箱、培养架等常规接种器具齐全。DB54/T 0408—2024 25　母种生产 5.1　菌种来源 从有相应资质的供种单位引进，选择种性稳定、抗逆性强且适宜本地栽培的菌株，菌种质量应符合 NY/T 1742的规定。 5.2　培养基配方 马铃薯20%，葡萄糖2%，琼脂2%，蛋白胨0.05%，水1000ml。 5.3　容器 试管选用15mm×150mm或者18mm×180mm； 培养皿选用直径9cm玻璃培养皿或一次性无菌塑料培养皿。 5.4　培养基配制 马铃薯去皮、去芽眼、切块后，煮至酥而不烂，8层纱布过滤，加入葡萄糖、蛋白胨、琼脂，用玻 璃棒搅拌均匀，定容至1000ml。 5.5　分装和灭菌 5.5.1　斜面培养基分装和灭菌 分装培养基至试管长1/4处，用棉塞（棉花为梳棉，非脱脂棉）或硅胶塞封口，每7支试管为1把， 牛皮纸包扎棉塞，橡皮筋扎紧，棉塞向上放置于灭菌锅内。压强0.11MPa～0.12MPa，温度121℃～122℃， 灭菌20min～30min。 结束后冷却至60℃，戴隔热手套取出试管，在超净工作台上摆斜面，斜面长度不超过试管长度的 2/3，自然降温凝固后抽取5%的试管，于28℃下培养48h，无菌落长出为灭菌合格。 5.5.2　平板培养基分装和灭菌 培养基装入500ml三角瓶高1/3～1/2处，用棉塞（棉花为梳棉，非脱脂棉）或硅胶塞封口，牛皮纸 包扎，橡皮筋扎紧，玻璃培养皿需用报纸包好，一并放入灭菌锅。压强0.11MPa～0.12MPa，温度121℃～ 122℃，灭菌20min～30min。 结束后冷却至60℃，戴隔热手套取出三角瓶，在超净工作台上分装至无菌培养皿中，培养基占培养 皿面积的2/3。 5.6　接种 在超净工作台或接种箱内接种， 接种前用紫外灯照射30min后，75%的酒精进行表面消毒。 接种3mm～ 5mm菌块到转接试管斜面和培养皿中央，整个过程按照NY/T 528规定严格无菌操作，培养皿需石蜡封口 膜密封。贴好标签并做好记录。 5.7　培养 生化培养箱10℃～12℃恒温培养7d～10d，按照NY/T 1731规定，于接种后第3d、第5d和长满培养基 后分别进行检查。 5.8　贮存 培养好的母种应置于2℃～4℃冰箱保存，时长不超过3个月。DB54/T 0408—2024 36　原种生产 6.1　原料选择 主料小麦、辅料麸皮、谷壳、棉籽壳、生石灰、石膏、腐殖土应符合NY/T 1935的相关要求，水质 应符合GB 5749的规定。 6.2　培养基配方 ——青稞或小麦粒68%、棉籽壳20%、麸皮10%、生石灰1%、石膏1%。 6.3　培养基制备 青稞或小麦粒预先用3%生石灰水浸泡2d～3d，换水冲洗2～3次，控水，加入配方中其他原料，搅拌 均匀，含水量以手紧握培养基指缝有水溢出不下滴为宜，pH值8.0～8.5。 6.4　装袋和灭菌 采用规格13cm×25cm×0.005cm聚丙烯折角单口开菌袋，培养基在4h内装完，袋料上紧下松、料面 平整，袋口用颈环、套盖及无棉盖体封口。温度121℃～122℃，压强0.11MPa～0.12MPa，高温高压灭菌 3h。 6.5　接种 料袋冷却至30℃以下，转运至接种区，事先进行环境、人员、母种、菌包消毒，按照NY/T 528规定 严格无菌操作将母种接到原种菌包中。 6.6　培养 室内保持避光，每天通风2次，每次30min；温度控制在10℃～20℃，空气相对湿度控制在40%～50%， 20d长满料袋。 6.7　贮存 培养好的原种应置于2℃～4℃保存，时长不超过50d。 7　栽培种生产 7.1　原料选择 主料小麦、辅料麸皮、谷壳、棉籽壳、生石灰、石膏、腐殖土应符合NY/T 1935的相关要求，水质 应符合GB 5749的规定。 7.2　培养基配方 ——青稞或小麦粒90%、谷壳3%、腐殖土5%，生石灰1%、石膏1%。 7.3　培养基制备 原料搅拌均匀，含水量以手紧握培养基指缝有水溢出不下滴为宜，pH值7.5～8.5。 7.4　装袋和灭菌DB54/T 0408—2024 4采用规格17cm×23cm×0.005cm聚丙烯折角单口开菌袋，采用双冲压立式机械装袋，培养基在4h内 装完，袋料松紧一致、中间打孔、料面平整，袋口用颈环、套盖及无棉盖体封口。温度121℃～122℃， 压强0.11MPa～0.12MPa，高温高压灭菌3h。 7.5　接种 冷却至30℃以下，转运至接种区，事先进行环境、人员、固体原种、菌包消毒，按照NY/T 528规定 严格无菌操作将原种接到栽培种菌包中。 7.6　培养 室内保持避光，每天通风2次，每次30min；温度控制在10℃～20℃，空气相对湿度控制在40%～50%。 7.7　贮存 培养好的栽培种应置于2℃～4℃保存，时长不超