ICS65.020.30 CCSB 4354 西 藏 自 治 区 地 方 标 准 DB54/T 0356—2024 犏牛人工授精技术操作规程 2024-04-21发布 2024-05-21实施 西藏自治区市场监督管理局  发 布 DB54/T 0356—2024 I前 言 本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件由西藏自治区动物疫病预防控制中心（西藏自治区畜牧总站）提出。 本文件由西藏自治区农业农村标准技术委员会归口。 本文件起草单位：西藏自治区动物疫病预防控制中心（西藏自治区畜牧总站）。 本文件主要起草人：达瓦、仁增顿珠、拉巴次仁、拉旺扎西、陈瑶、次仁多吉、孙锋博、张楠、刘 楠、措姆。DB54/T 0356—2024 2犏牛人工授精技术规程 1　范围 本文件规定了犏牛人工授精术语定义、人工授精准备、发情鉴定、 输精前的准备、输精、妊娠诊 断等。 本文件适用于犏牛养殖集中区域内的犏牛养殖场、 散养户及配种站人工授精技术人员及其他相关从 业人员的技术操作。 2　规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 4143 牛冷冻精液 GB/T5458 液氮生物容器 3　术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1　 犏牛 牦牛与黄牛杂交后所产生的第一代杂种统称为犏牛，公犏牛无繁育能力。 3.2　 冷冻精液 将原精液用稀释液等温稀释、平衡后快速冷冻，在液氮中保存。犏牛的冷冻原精液来源是安格斯肉 牛，精液分装细管冻精剂型。 3.3　 人工授精 人为利用器械采取公畜的精液，经过检查和处理后，再用器械输入到母畜的生殖道内，使之受胎的 一种方法。 3.4　 发情鉴定 通过外部观察或直肠把握检查方式确定母牛发情的方法，犏牛以直肠把握法为主要依据。 3.5　 发情周期DB54/T 0356—2024 3初情期后，每隔一定时间会发情一次，通常将这次发情开始至下次发情开始、或这次发情结束至下 次发情结束所间隔的时期，称为发情周期，犏牛的发情周期为18d～24d。 3.6　 能繁母犏牛 达到生殖年龄且具有生殖能力的母犏牛。 4　人工授精准备 4.1　固定式与活动式相结合 犏牛养殖集中区建设配种点，每个配种点配备配种架、液氮罐、人工授精器械，消毒液、液体石蜡 等用于犏牛的配种工作。针对路途相对较远的地方，配种员携带配种仪器设备开展巡逻式配种。 4.2　仪器设备 试验台、桌布、显微镜、载玻片、盖玻片、液氮罐、液氮、细管冻精、输精器、输精器外套、玻璃 瓶、玻璃棒、烧杯、温度计、镊子、一次性手套、常用消毒剂、纱布、卫生纸、热水壶、毛巾、脸盆、 肥皂等。 5　发情鉴定 犏牛整体上呈季节性发情， 发情季节主要集中在6月-9月份，但集中管理模式下可常年发情，夜晚 的发情率高于白天，下雨后天气转阴时发情率高，具体见附录A。 5.1　外部观察 通过母牛的外部表现症状和行为变化判断是否发情和发情程度。 5.2　阴道检查法 主要观察生殖器变化，用开膣器使阴道开张，观察外阴部的肿胀、流出的粘液、分泌物和子宫颈口 的变化，判断母牛发情与否。 5.3　直肠检查 通过直肠检查卵巢，触摸卵泡发育程度，判断发情程度及排卵时间。 6　输精前的准备 6.1　器具清洗和消毒 凡是触碰冻精和母牛生殖道的器具都应进行清洗和消毒。金属器械清洗后，待自然条件下冷却后待 用。使用前用75%酒精消毒干净，有条件的地方使用高压锅对金属器具进行消毒。 器械消毒，可以在121 摄氏度，气压在102.9kPa下消毒20分钟后取出使用。 6.2　冷冻精液的准备DB54/T 0356—2024 4冷冻精液应浸泡在液氮生物容器中贮存，定时补充液氮，保证细管冻精深埋于液氮面10cm以下，液 氮生物贮存应符合GB/T5458有关规定，冻精在液氮容器外停留时间不得超过5s。 6.3　冷冻精液的解冻 用长柄镊子从液氮罐中取出细管冻精，寻找冻精不得超过10s，停留部位应距颈管上口8cm以下。冻 精取好后放入38±2℃水中，解冻5s～10s，待全部融化后，取出擦干即可，用细管剪剪开不带棉塞的一 端细管冻精封口，剪口应正，断面应齐，将有棉塞的一端装在输精器推杆上，套上外保护套备用。解冻 后的精液应在15min内输精，以防止对精子的第二次冷打击。根据季节的不同，注意输精前输精器的保 温措施，若路程较远，可将准备好的输精器放于贴身衣物内保暖,精液解冻后保存时间不应超过1h。 6.4　冻精质量检查 在显微镜下检查做直线前进运动的精子占整个精子数的35%以上、视为合格，35%以下的弃之，冻精 质量检测应符合GB 4143。 6.5　母牛的保定 经发情鉴定确定输精的母畜，将其牵入配种架内保定好，注意安全措施。 6.6　母牛外阴部的清洁 输精前，带上输精器外套后，并对保定母畜外阴部周围的粪便、污物用温肥皂水清洗干净，然后用 消毒液（高锰酸钾水）清洗一遍。 6.7　输精准备 将剪去封口的细管精液迅速装入输精器管内，输精器进入塑料外套管，管口顶紧外套管中固定圈， 向前推到头，外套管后部与输精器后部螺纹处拧紧，全部结合要紧密备用。 7　输精 7.1　输精时间 最佳输精时间为母牛接收爬跨后的10h～18h。母牛接受爬跨后8h～12h为第一次输精时间，第二次 输精时间为母牛接受爬跨后16h～20h。在发情盛期、后期各输精1次，两次输精的时间间隔为8h～12h。 7.2　输精方法 7.2.1　触摸卵泡法 在卵泡薄、满而软、有弹性和波动明显，成熟葡萄状，有一触即破的感觉，接近成熟排卵时及时输 精。6h-8h后在卵泡未破裂之前，再输精一次。 7.2.2　直肠把握法 母犏牛个体与牦牛接近，生殖器官组织结构主要表现为子宫角发达、子宫体短小,子宫颈长 5cm～ 10cm,外壁直径3cm～6cm，子宫颈口小，内有明显的三个具有许多细小而紧缩的皱璧的子宫颈环，子宫 颈宫口几乎临近角间沟纵隔。输精员将手指甲剪短磨光，左手手臂套上乳胶手套，涂上一层润滑剂，五 指并拢呈锥形，伸入直肠，掏出粪便。动作要轻柔，左手臂进入直肠25cm～30cm，在直肠内触摸并握住 子宫颈，左手稍微下压，使阴门张开，右手持输精管（枪）由阴门缓缓插入，先稍向上斜插，避开尿道DB54/T 0356—2024 5口，然后再向下平插至子宫颈口，将输精器前端插入子宫颈口内3cm-4cm(约经过2个-3个皱襞），若能 确定左右两侧具体卵泡发育位置，可将输精器继续伸向卵泡发育侧输精；若不能确定具体位置，则将输 精器微微后拉再行输精。输精后缓缓将输精器拔出，并适当按摩阴蒂，以防止精液倒流，可有效提高受 胎率。 7.3　输精部位及输精量 将精液输到接近子宫角间沟分岔部的子宫体内，一次输0.25ml，一个情期输精两次。 7.4　注意事项 输精过程要严格按照慢插、适深、轻注、缓出、防倒流的原则进行，直肠检查或输精时母牛努责、 肠道形成空洞时，不要硬性抓捏，防止损伤母犏牛阴道壁、子宫颈口和子宫体。 8　妊娠诊断 妊娠诊断时间一般在输精后第一个发情周期开始到两个月。未妊娠的母牛进行查胎补配，已妊娠的 母牛进行加强饲养管理，做好保胎、防流工作。 8.1　外部观察 母犏牛妊娠后，经过2个-3个情期后，周期性发情停止，食欲增进，营养状况改善，毛色润泽，性 情变得温顺，行为变安稳，体重增加。妊娠中后期腹围增大，甚至可观察到胎动，乳房逐渐肿大。 8.2　直肠检查法 输精后三个情期未发情，通过直肠检查卵巢、子宫角的形状、质地变化来判断是否妊娠。主要根据 子宫角的卵巢黄体的变化进行诊断，妊娠母牛子宫角两侧不对称，孕角侧卵巢比另一侧卵巢大，孕角有 波动感，卵巢有妊娠黄体突出于排卵侧卵巢表面，黄体质地柔软、丰满、顶端触感凸起。 具体方法为先摸到子宫颈，再将中指向前滑动，寻找角间沟，然后将手向前、向下、再向后分别触 摸两个子宫角及卵巢的变化。一般怀孕20d～25d，孕角侧卵巢比另一侧卵巢大，并有黄体，子宫壁较厚， 有弹性；怀孕60d，孕角大小为空角的两倍左右，波动感明显，角间沟变得宽平，子宫向腹腔下垂；怀 孕90d，孕侧子宫角变大，直径8㎝～13㎝，波动明显，角间沟消失，有时可触摸到绿豆大小的子叶。 9　记录 包括配种母牛编号、畜主、输精时间、输精操作人员、冻精号、精子活力、品种、供应商、妊娠检 查、产犊日期见附录B,以及受胎率，繁殖率计算方法见附录C。上述内容可用表格的形式记录。DB54/T 0356—2024 6AA 附 录A （规范性） 表1母犏牛发情表现 期别 发情初期 发情盛期 发情末期 外部表现母犏牛鸣叫不安， 人靠近竖起 耳朵摇头，食欲减退，经常爬 跨其它牛， 但拒绝公牛或者其 他母犏牛的爬跨。母犏牛极度不安，食欲停止， 性欲旺盛，尾巴翘起，接受爬 跨，爬跨其它牛。母犏牛性欲减退，不再爬跨其它牛，由狂躁转为 安静。 生殖器官变化外阴轻微红肿， 阴道粘膜充血， 流出稀薄透明 液体。外阴部明显肿胀，流出粘液增 多，尾部毛发被其他牛趴跨时 翻起来的现象。外阴部肿胀减退，粘液变稠，呈黄白色。 卵泡发育程度直肠检查子宫变软， 卵巢有一 侧增大，有卵泡，无弹性，此 期维持10h左右。直肠检查子宫松软，卵泡体积 增大，直径1～1.5 cm，突出于 卵巢表面，弹性强，有波动感。 此期约维持8～12 h。直肠检查子宫颈变松软，卵泡壁变薄，波动明显， 成熟葡