ICS65.020.30 CCSB 4354 西 藏 自 治 区 地 方 标 准 DB54/T 0336—2024 西藏黄牛改良人工授精技术规范 2024-04-09发布 2024-05-09实施 西藏自治区市场监督管理局  发 布 DB54/T 0336—2024 I前 言 本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件由西藏自治区畜牧兽医研究所提出。 本文件由西藏自治区农业农村标准技术委员会归口。 本文件起草单位：西藏自治区畜牧兽医研究所 本文件主要起草人：索朗曲吉、巴桑朱扎、旦增洛桑、次仁罗布、赵丽、尼玛仓决、普布曲珍、斯 朗旺姆、格桑卓嘎、嘎玛央宗、扎琼、白玛坚才、扎西罗布、陈景瑞、巴桑、巴桑罗布、白玛旦增。DB54/T 0336—2024 1西藏黄牛改良人工授精技术规范 1　范围 本文件规定了牛冷冻精液人工授精的操作技术要求。 本文件适用于西藏黄牛改良人工授精技术应用。 2　规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB 4143 牛冷冻精液 NY/T 1335 牛人工授精技术规程 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 西藏黄牛改良 父本选择优良性状的中国荷斯坦牛冷冻精液 （细管冻精） ， 母本选用西藏本地黄母牛进行杂交改良。 3.2 冷冻精液 将原精液用稀释液等温稀释、平衡后快速冷冻，在液氮中保存。冷冻精液包括颗粒冷冻精液和细管 冷冻精液。 3.3 冷冻精液解冻 冷冻精液使用前使冷冻精子重新恢复活力的处理方法。 3.4 人工授精 用人工方法采取公牛精液，经检查处理后，输入发情母牛生殖道内，使其受胎的技术。 3.5 发情鉴定 通过外部观察或其他方式确定母牛发情程度的方法。 3.6 受胎率 同期受胎母牛数占同期参加输精母牛数的80%。 4 牛的基本条件 4.1 种公牛和精液品质 应符合NY/T 1335的规定。 DB54/T 0336—2024 24.2 母牛 健康、繁殖机能正常的母牛（要求西藏黄母牛年龄在2.5岁-3.5岁，平均体重达到200Kg以上）。 5 输精准备 5.1 器械清洗和消毒 接触精液和母牛生殖道的输精用器具都应进行清洗和消毒（金属输精器类洗净后，置紫外线消毒 柜内，自然冷却待用）。 5.2 冷冻精液的贮存 冷冻精液应浸泡在液氮生物容器中贮存，液氮生物容器应符合NY/T 1335有关规定。包装好的冷 冻精液由一个液氮容器转换到另一个液氮容器时，在液氮容器外停留时间不得超过5s。 5.3 冷冻精液解冻 预先将保温桶(或杯）的水温调制35-37摄氏度，打开液氮罐口塞子，确定所需细管冻精的位置，用 长镊子迅速取出该细管冻精，迅速将细管投入35-37摄氏度的温水中约10-15s，待冰晶溶解后从水中取 出细管，用无菌脱脂干棉球将细管表面的水擦干，用细管剪距封口端约1cm处将封口段剪断，细管断面 要整齐，以防断面偏斜而导致精液逆流。 5.4 精液质量检查 精液质量应符合GB 4143的要求。 5.5 牛体卫生 输精前，用手掏净母牛直肠缩粪后，再用温水加极少量高锰酸钾清洗母牛外阴部并擦拭干净。 5.6 输精器准备 5.6.1 金属输精器使用 输精枪主要用于细管冷冻精液的输精。剪去细管精液封口，剪口应正，断面应齐。将剪去封口的细 管精液迅速装入输精器管内，步骤为：剪去封口端的为前端，输精器推杆后退，细管装至管内，输精器 管进入塑料外套管，管口顶紧外套管中固定圈，输精器管前推到头，外套管后部与输精器后部螺纹处拧 紧，全部结合要紧密。 6 母牛发情鉴定 6.1 外部观察 通过母牛的外部表现症状和生殖器官的变化判断母牛是否发情和发情程度。（见附录A） 7 输精 7.1 输精时间确定 7.1.1 外部观察法 母牛接受爬跨后6h～ 10h是适宜输精时间。采用两次输精，第二次输精时间为母牛接受爬跨后12h～ 20 h。青年母牛的输精时间宜适当提前。 7.2 直肠把握输精法 输精人员一手五指并握，呈圆锥形从肛门伸进直肠，动作要轻柔，在直肠内触摸并把握住子宫颈，使 子宫颈把握在手掌中，另一手将输精器从阴道下口斜上方约45º角向里轻轻插入，双手配合，输精器对 准子宫颈口，轻轻旋转插进，过子宫颈口螺旋状皱襞1cm～2cm到达输精部位。一头母牛应使用一支输精 器或者一支消毒塑料输精外套管。 7.3 开殖器输精法 用开殖器打开阴门，将输精抢轻插入阴道内，对准子宫颈，快速将精液推至子宫角深部，缓慢地将输 精抢撤开。 7.4 输精部位 使用开殖器时应将输精枪头精液推送到子宫颈口约1/3处，而直肠把握时应到子宫角间沟分岔部的 子宫体部，不宜深达子宫角部位。DB54/T 0336—2024 38 妊娠诊断 8.1 外部观察 妊娠母牛外部表现发情周期停止，食欲增进，性情温和，行为变安稳。怀孕中后期腹围增大，腹壁 一侧突出，乳房胀大。 8.2 直肠检查 输精后二个情期未发情（40d），通过直肠触摸检查子宫，可查出两侧子宫角不对称，孕侧子宫角 较另测略大，且柔软。60d后直肠触摸可查出妊娠子宫增大、胎儿和胎膜。直肠触摸同侧卵巢较另一侧 略大，并有妊娠黄体，黄体质柔软、丰满，顶端能触感突起物。 9 记录 9.1 配种记录表 包括母牛号、母牛发情时间、发情观察鉴定、发情后期流血时间、输精时间、冷冻精液信息（公牛 号）、 输精操作人员。上述内容可以表格的方式记录。（见附录B） 9.2 受胎率 受胎率按如下公式计算： C——受胎率，%； C1——同期受胎母牛数，头； I——同期输精母牛数，头。100IC1C ＝DB54/T 0336—2024 1AA 附 录A （资料性） 发情外部表现症状和生殖器官的变化 附 录B （规范性） 配种记录表 县（乡、村） /养殖场： 序 号母牛号 母牛发情时 间发情鉴定观察发情后期流 血时间输精时间 （复 配时间）冻精号（公牛号） 输精操作人员 期 别 发情初期（不接受爬跨期） 发情盛期（接受爬跨期） 发情未期（拒绝爬跨期） 外观 表现母牛兴奋不安，牟叫，游走，采 食渐少，奶牛产奶量降低，追逐、 爬跨它牛， 而它牛爬跨不予接受， 一爬即跑母牛游走减少，它牛爬跨 时站立不动、后肢张开， 频频举尾，接受爬跨母牛转入平静，它牛爬跨时， 臀部避开，但很少奔跑 生殖器 官变化阴户肿胀、松弛、充血、发亮， 子宫颈口微张，有稀薄透明薪液 流出，阴道壁潮红子宫颈口红润开张，阴道 壁充血，黏液显著增加， 流出大量透明而黏稠的分 泌物黏液量减少，混浊黏稠。子宫 颈口紧闭，有少量浓稠黏液， 阴唇消肿起皱尾根根紧贴阴 门