ICS65.020.20 CCSB38 5333 怒江州地方标准 DB5333/T32—2024 滇黄精组培苗生产技术规程 TechnicalRegulationsonPropagationofPolygonatum kingianumviaTissueCulture 2024-01-24发布 2024-02-24实施 怒江州市场监督管理局  发布DB5333/T32—2024 I前言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由云南省农业科学院药用植物研究所、怒江昂可达生物科技开发有限公司提出。 本文件由怒江州市场监督管理局归口。 本文件起草单位：云南省农业科学院药用植物研究所、怒江昂可达生物科技开发有限公司。 本文件主要起草人：杨美权、张金渝、起明菊、杨天梅、杨维泽、李后江、许宗亮、左应梅、李纪 潮、黄国敏、张昌平、黄振懿、潘永兴。DB5333/T32—2024 1滇黄精组培苗生产技术规程 1范围 本文件规定了滇黄精组培苗生产的术语和定义、培养准备、外植体采集和处理、接种、驯化、出苗、 包装、标识和运输。 本文件适用于云南怒江境内滇黄精组培苗生产管理。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 NY/T2306花卉种苗组培快繁技术规程 DB5333/T17滇黄精规范化种植种子种苗质量要求 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 滇黄精（Polygonatumkingianumcoll.etHemsl） 百合科黄精属草本植物，其干燥根茎是《中华人民共和国药典》2020年版一部收录的黄精药材的植 物基源之一，为食药两用植物。 3.2 组织培养 利用植物细胞的全能性，采集滇黄精幼嫩叶片或不定芽，通过无菌操作，在人工控制条件下进行培 养以获得再生的完整滇黄精植株。 3.3 外植体 从鲜活植物体上获取的用于植物组织培养的组织或器官。 3.4 驯化 组培苗瓶苗从人工控制的培养条件到自然环境适应的过渡过程。 3.5 DB5333/T32—2024 2缩略语 MS：是植物组培常用的一种基本培养基，由Murashige和Skoog发明的，以两人名字的缩写命名。 6-BA：6-Benzylaminopurine，6-苄氨基腺嘌呤。 NAA：Naphthylaceticacid，萘乙酸。 IBA：Indole-3-butyricacid，吲哚丁酸。 AC：Activecarbon，活性炭。 4培养准备 4.1生产场地与设备 按照NY/T2306中的规定执行。 4.2容器和器械清洗 容器采用650ml组培瓶。清洗按照NY/T2306中的规定执行。 4.3培养基配制 以MS培养基为基本培养基，配制方法见附录A。添加琼脂4.0g/L～4.5g/L，蔗糖30g/L，调节pH 值为5.8；激素的具体用量和比例应根据不同培养基类型、品种特性及其在培养中的表现加以适当调整 和优化。 诱导培养基：MS+6-BA2.0mg/L。 继代增殖培养基：MS+6-BA3.0～4.0mg/L+NAA0～1mg/L。 生根培养：1/2MS+NAA0～1mg/L+IBA0～1mg/L+AC0.5g/L。 4.4灭菌 培养基配制完毕后，分装至组培瓶中，在121℃下高压灭菌15min～20min，并尽快取出使其冷却 备用。 5外植体采集和处理 5.1外植体的选择 长势良好、大小近似的滇黄精不定芽或顶部具叶柄幼嫩叶。 5.2外植体的采集 于晴天清晨或傍晚，用经酒精消毒的医用剪刀剪取，采集后用洁净吸水纸吸去表面水分备用。若30 min内不能处理，则需装入自封袋中，排除空气后密封保存。长途运输需0℃～5℃冷藏保存。 5.3外植体的清洁 外植体在加有适量洗衣粉的自来水中浸泡刷洗后。滴加2滴～3滴吐温-80，震摇10min～15min后 用自来水冲淋60min～80min。 5.4外植体的消毒DB5333/T32—2024 3将洗净的外植体，转移至超净台，用75%酒精消毒20s，后用无菌水涮洗3次～4次。 经酒精消毒后的外植体，用0.1%升汞溶液消毒15min，无菌水涮洗6次～8次。 经升汞消毒的外植体，用无菌滤纸吸去表面水分，同时伤口处切除0.2cm～0.5cm。 5.5消毒废液的处理 使用过的氯化汞溶液按照国家有关剧毒化学品使用的法规进行回收处理。 6接种 6.1初代培养 接种外植体所用培养基为诱导培养基，将外植体经切分处理后接入诱导培养基上，不定芽按极性斜 插入诱导培养基中，叶柄平铺于培养基表层。使其下端和培养基紧密接触。接种材料在培养容器内均匀 分布，接种完毕立即盖好瓶盖并作好标记，注明材料名称、接种日期等事项。 6.2增殖培养 待愈伤组织或不定芽形成后，要将愈伤或不定芽切成0.5cm小块转接至增殖培养基，注意不可过深。 一般45d～50d继代一次，直至增殖小苗达到需要的数量,不宜超过6代。 6.3生根培养 将增殖的不定芽切割成单个完整的幼芽并切去愈伤，将其按极性插入生根培养基中。生根培养40 d～50d发育出完整根系，即可出瓶。 6.4培养条件 培养温度为25℃±2℃，用光强2000lx～3000lx白光光照，每日光照12h。 7驯化 7.1出瓶准备 培养瓶内长出3条以上长2.0cm～3.0cm的不定根时，连瓶移至遮阴率60%～80%的自然光温室大棚 内继续培养3d～4d；后拧松瓶盖继续在温室大棚内培养3d～4d。 7.2出瓶 将滇黄精组培苗从瓶内取出，用清水洗净基部培养基。用稀释500倍的多菌灵浸泡根部2min～3min， 按5cm×10cm的密度，栽植于泥炭土与珍珠岩（1:1）的混合基质中，在苗床上搭建塑料小拱棚或种植 于大棚中。 7.3温湿度要求 7.3.1温度 苗床温度白天温度控㓡在30℃以下，夜间温度控制在15℃以上。 7.3.2空气湿度 DB5333/T32—2024 4开始驯化10d内，完全关闭小拱棚，空气湿度控制在90%以上。驯化后10d～20d，打开小拱棚两 侧，空气湿度控制在50%～80%，驯化20d后，逐步打开小拱棚至完全打开。 7.3.3基质湿度 组培苗驯化期间基质含水量控制在50%～60%。 7.4施肥管理 小拱棚膜完全揭开后开始施肥，首次施肥采用水溶性复合肥（15:15:15），配制成0.1%的浓度喷施， 后浓度逐步增加至0.5%，施肥间隔时间为7d～15d。 7.5病虫害防控 参照附录B进行滇黄精组培苗的主要病虫害防治。 8出苗 8.1出苗要求 根系发育良好，植株生长健壮，无病虫害，无明显机械损伤，具1片及以上叶片，茎基部直径1.0cm 及以上的小块茎时出苗。 8.2种苗分级 符合DB5333/T17中的规定。 9包装、标识和运输 9.1包装 以100苗为单位，用塑料袋包裹根及茎基部，将装袋苗放入包装箱。 9.2标识 外包装贴上标识，注明品种（含品系）、规格、等级、数量、生产者、发货日期等信息。 9.3运输 装车和搬运时勿倒置，运输途中避免日晒、雨淋。DB5333/T32—2024 5AA 附录A （资料性） MS培养基的组分及含量 名称 成分 含量（mg/l） 大量元素20*NH4NO3 1650 KNO3 1900 MgSO4.7H2O 370 KH2PO4 170 CaCl2.2H2O 440 铁盐50*Na2.-EDTA 37.25 FeSO4.7H2O 27.85 有机物100*甘氨酸 2.0 盐酸硫胺素 0.1 盐酸吡哆醇素盐酸毗哆醇素 0.5 烟酸 0.5 肌醇 100 微量元素MnSO4.4H2O 22.3 ZnSO4.7H2O 8.6 H3BO3 6.2 KI 0.83 Na2MoO4.2H2O 0.25 CuSO4.5H2O 0.025 CoCl2.6H2O 0.025 DB5333/T32—2024 6BB 附录B （资料性） 滇黄精组培苗主要病虫害及其防治方法 病虫害名称 危害部位及症状 防治方法 根茎腐病根茎部：症状表现为叶片黄花枯萎，茎基部 或根状茎出现红棕色病斑，严重时缢缩腐烂加强通风，降低基质湿度；病害发生时可 用75%多菌灵可湿性粉剂800倍液或70%恶 霉灵可湿性粉剂4000倍液灌根。 炭疽病叶片：从叶尖或叶缘开始发生，从水渍状褐 色小斑扩展成椭圆形、楔状或不规则轮纹状 斑，潮湿时病斑处出黑色点状病症加强通风，可用80%代森锰锌1000倍液、 25%嘧菌酯1500倍液喷施叶片。 红蜘蛛幼嫩叶，多在叶片背面：刺吸植株体内养分， 叶片上出现失绿斑点，数量多时在叶背形成蛛 网，严重时使叶片变灰白色，最后致焦枯脱落大棚装高密度防虫网；及时清除棚内及棚 外杂草；虫害发生时可用1.8%阿维菌素乳 油3000倍液、73%克螨特乳油3000倍液喷 施叶背。 蛞蝓 子叶叶柄及叶片：从叶柄及叶缘处啃食，造 成缺刻。黎明或傍晚时分观察，可见土表或植 株上具虫体沿驯化棚四周撒施一条生石灰作为隔离 带；蛞蝓发生时用5%四聚乙醛颗粒剂拌土 撒施，或叶面用四聚乙醛粉剂于傍晚喷雾防 治。