ICS 07.080 CCS C 04 DB51 四川省 地方标准 DB51/T 3216—2024 人牙来源间充质干细胞质量规范 2024 - 12 - 03发布 2024 - 12 - 29实施 四川省市场监督管理局 发布 DB51/T 3216 —2024 I 目次 前言 ................................ ................................ ................. II 1 范围 ................................ ................................ ............... 1 2 规范性引用文件 ................................ ................................ ..... 1 3 术语和定义 ................................ ................................ ......... 1 4 缩略语 ................................ ................................ ............. 1 5 质量规范 ................................ ................................ ........... 2 6 检测方法 ................................ ................................ ........... 4 7 检验规则 ................................ ................................ ........... 6 8 废弃物处理 ................................ ................................ ......... 6 参考文献 ................................ ................................ .............. 7 DB51/T 3216 —2024 II 前言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由四川省经济和信息化厅提出、归口、解释并组织实施。 本文件起草单位：成都世联康健生物科技有限公司、四川省干细胞技术与细胞治疗协会、四川大学 华西口腔医院、电子 科技大学医学院、四川省细胞库有限公司、四川省天府细胞质量检测与评价中心有 限公司、中山大学光华口腔医院、首都医科大学附属北京口腔医院、西北工业大学、空军军医大学口腔 医院、西南医科大学附属口腔医院、重庆医科大学口腔医院、四川大学生命科学学院、中国测试技术研 究院、成都康景生物科技有限公司、南京医科大学附属口腔医院、昆明医科大学口腔医学院、四川省药 品检验研究院、中南大学湘雅口腔医院、郑州大学第一附属医院、深圳市龙华区人民医院、浙江大学医 学院附属口腔医院。 本文件主要起草人：田卫东、陈国庆、廖立、汤颖峰、张静怡、代施 施、杨超、施松涛、金岩、范 志明、江宏兵、肖金刚、李杰、李中瀚、郭淑娟、周李华、寇大莲、胡成虎、毛学理、陈甜、霍芳军、 隋秉东、刘志、李 蓓、徐永胜、胡磊、李炎、杜新雅、李昆、李锐、黄艳丽、幸倚帆、洪鹏宇、任家银、 马晶、郭维华、杨波、李茂娇、谢利、于湄、张思远、何敏、陈金龙。 DB51/T 3216 —2024 1 人牙来源间充质干细胞质量规范 1 范围 本文件规定了人牙来源间充质干细胞的原辅料要求、细胞关键质量属性、细胞制备过程控制、细胞 质量检验方法、检验规则和废弃物处理要求。 本文件适用 于人牙来源间充质干细胞的制备、检测和质量控制。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 40365-2021 细胞无菌检测通则 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 人牙来源间充质干细胞 human dental -derived mesenchymal stem cells 从人不同发育阶段牙齿组织或其附属组织中分离的间 充质干细胞， 包括牙髓干细胞、 牙周膜干细胞、 牙囊干细胞、脱落乳牙干细胞、根尖牙乳头干细胞等，贴壁生长后呈成纤维细胞样形态，可自我更新， 并具有成骨分化、成脂分化及成神经分化能力的干细胞。 3.2 原材料 raw and processed material 可用于分离人牙来源间充质干细胞的原材料，包括牙髓组织、牙囊组织、牙周膜组织、乳牙牙髓组 织、根尖组织等。 3.3 辅助材料 accessory material 用于人牙来源间充质干细胞分离、培养、传代、冻存、运输、储存等过程中的采集器械、容器、清 洗液、保存液、培养基、生长因子等。 4 缩略语 下列缩略语适用于本文件。 EBV：人类疱疹病毒（ Epstein-Barr Virus ） HBV：乙型肝炎病毒（ Hepatitis B Virus ） HCMV：人巨细胞病毒（ Human Cytomegalovirus ） HCV：丙型肝炎病毒（ Hepatitis C Virus ） HIV：人类免疫缺陷病毒（ Human Immunodeficiency Virus ） HTLV：人类嗜 T细胞病毒（ Human T-lymphotropic Virus ） DB51/T 3216 —2024 2 STR：短串联重复序列（ Short Tandem Repeat ） TP：梅毒螺旋体（ Treponema Pallidum ） SOP：标准操作规程（ Standard Operating Procedure ） 5 质量规范 原材料和辅助材料质量规范 5.1 5.1.1 原材料要求 5.1.1.1 用于人牙来源间充质干细胞分离的原材料来源应符合伦理规范和法律法规。 5.1.1.2 用于人牙来源间充质干细胞分离的原材料供者应签署书面的合法有效的知情同意书；如原材 料供者属未成年人，知情同意书应由供者及其法定 监护人共同签署；知情同意书应包括但不限于：人牙 来源间充质干细胞在合适的条件下潜在的研究及治疗应用、研究成果潜在的商业应用、剩余材料的处置 以及其他相关问题所适用的内容；应有明确的供者（如供者系未成年人，应包括其法定监护人）的个人 隐私保护机制。 5.1.1.3 用于人牙来源间充质干细胞分离的原材料具有相关临床资料，包括但不限于供者一般信息、 既往病史及家族史等。既往病史和家族史应对遗传性疾病相关信息进行详细采集。 5.1.2 辅助材料要求 5.1.2.1 用于人牙来源间充质干细胞分离的采集器械、容器、清洗液、保存液、培养基、生长因子等 辅料应符合相关的质量要 求， 应包括但不限于供应商进行资质审核认证、 产品质量报告和批次检验报告、 质量抽检报告等。 5.1.2.2 用于人牙来源间充质干细胞培养的培养基，应采用无动物源成分的培养基。 5.1.2.3 用于人牙来源间充质干细胞培养的培养基中如含有人源血液成分，应明确其来源、批号及质 量检定合格报告，原则上采用国家批准的相关产品，如使用未经批准的人源血液相关制剂，则应提供相 应的检验检测合格报告。 5.1.2.4 用于人牙来源间充质干细胞培养的培养基，在样本来源于无菌条件的前提下，原则上不添加 抗生素。如样本来源无法严格满足无菌条件，可在原代扩增 阶段使用的培养基中添加抗生素，并在质量 检测中增加相应的抗生素残留检测。在成品制剂中检测抗生素残留，检测方法可选用药典收录的培养法 或酶联免疫法，残留量应低于试剂盒检出限。 5.1.3 供者要求 供者应筛查 HIV、HBV、HCV、HTLV、EBV、HCMV、TP，并记录保存结果。 人牙来源间充质干细胞关键质量指标 5.2 5.2.1 细胞形态 人牙来源间充质干细胞在二维培养条件下，细胞贴壁生长，细胞形态以梭形或纺锤形为主，细胞形 态随细胞密度可略有改变。 5.2.2 细胞表面标志蛋白 人牙来源间充质干细胞高表达 CD105、CD73、CD90，阳性率≥ 90%；表达CD146，阳性率≥ 30%；低表 达CD11b、CD19、CD31、CD34、CD45、HLA-DR，阳性率≤ 2%。 DB51/T 3216 —2024 3 5.2.3 细胞存活率 未经冻存的细胞存活率≥ 90%，冻存后复苏的细胞存活率≥ 80%。 5.2.4 免疫调节功能 人牙来源间充质干细胞经炎症因子 （ IFN-γ或者TNF-α） 诱导后可表达吲哚胺 2,3-双