ICS 07.080 CCS A 40 DB51 四川 省地方标准 DB51/T 3183—2024 医用供体猪 病原微生物监测技术规范 四川省市场监督管理局 发布 2024 - 07 - 09发布 2024 - 08 - 09实施DB51/T 3183 —2024 I 前言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由四川省经济和信息化厅提出 、归口并解释 。 本文件起草单位：中国测试技术研究院生物研究所、成都中科奥格生物科技有限公司、四川省医学 科学院•四川省人民医院、四川泰康医院、南京医科大学附属 苏州医院、海南医学院第二附属医院、 华 中科技大学同济医学院附属同济医院 、空军军医大学第一附属医院、成都达硕实验动物有限公司、成都 爱迪眼科医院、四川省机械研究设计院（集团）有限公司、四川省实验动物学会医用猪专业委员会。 本文件主要起草人：周李华、邢向阳、陈璐、潘登科、叶德萍、邓绍平、蒋子敬、李巅远、张玉兰、 王毅、陈刚、杨恒钰、窦科峰、田伟、钟浩、李鑫、姚晓明、刘明东、庄瑛、莫玲。DB51/T 3183 —2024 1 医用供体猪 病原微生物监测技术规范 1 范围 本文件规定了 医用供体猪生产过程中的代孕母猪、医用供体猪，饮水和日粮，隔离器，使用物品等 医用供体猪及其物品的微生物学监测技术要求。 本文件适用于医用供体猪生产和交付过程中微生物质量控制。 基因修饰动物的 病原微生物监测 可参考本文件。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 14926.1 实验动物 沙门菌检测方法 GB/T 18448.1 实验动物 体外寄生虫检测方法 GB/T 18448.6 实验动物 蠕虫检测方法 GB/T 18448.10 实验动物 肠道鞭毛虫和纤毛虫检测方法 GB/T 18648 非洲猪瘟诊断技术 GB/T 19915. 6 猪源链球菌通用荧光 PCR检测方法 GB/T 34750 副猪嗜血杆菌检测方法 GB/T 36789 动物狂犬病病毒核酸检测方法 NY/T 564 猪巴氏杆菌病诊断技术 NY/T 573 动物弓形虫病诊断技术 NY/T 1186 猪支原体肺炎诊断技术 SN/T 0762 猪瘟病毒荧光 RT-PCR检测方法 SN/T 1181 口蹄疫检疫技术规范 SN/T 1247 猪繁殖与呼吸综合征检疫技术规范 SN/T 1446 猪传染性胃肠炎检疫规范 SN/T 1447 猪传染性胸膜肺炎检疫技术规范 SN/T 1698 伪狂犬病检疫规范 SN/T 1919 猪细小病毒病检疫技术规范 SN/T 2472 日本乙型脑炎检疫技术规范 SN/T 2702 猪水泡病检疫技术规范 SN/T 2708 猪圆环病毒检疫技术规范 SN/T 3307 口岸食源性疾病腺病毒 PCR检测方法 SN/T 3972 猪流感病毒病检疫技术规范 SN/T 3741.1 国境口岸鼠类携带病原体检测方法 第1部分：致病性钩端螺旋体 PCR检测方法 SN/T 3954 国境口岸尼帕病毒 RT-PCR和实时荧光 RT-PCR检测方法 SN/T 4235 猪戊型肝炎检疫技 术规范 SN/T 4748 淋巴细胞性脉络丛脑膜炎检疫技术规范 DB51/T 3183 —2024 2 SN/T 5196 猪轮状病毒感染检疫技术规范 WS/T 269 布鲁氏菌病诊断 YY/T 1596 甲型流感病毒核酸检测试剂盒（荧光 PCR法） 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 医用供体猪 medical donor pigs 通过生物工程技术获得，用于提供医疗用途的活器官或生物材料制备的低免疫原性猪及群体。 4 代孕母猪病原微生物筛查 代孕母猪 应外观健康、无异常 ，未注射猪繁殖与呼吸综合征弱毒疫苗；应排除经胎盘垂直传播的疾 病，包括猪 瘟、猪繁殖与呼吸综合征、猪伪狂犬病、猪细小病毒病 等。 病原筛查方法参照 NY/T679 和 SN/T 1919 执行。 筛查应在胚胎植入前 1周完成。 5 医用供体猪微生物监测 采样 5.1 5.1.1 采样管的准备 宜采用自带 无菌拭子的无菌螺帽盖采样管。也可 自制带螺帽盖离心管和棉签 作为采样工具 。采样管 应在保质期内的、且包装完好 。宜经过环氧乙烷灭菌处理，或提前 进行高温高压灭菌处理。采样当天放 入屏障设施的传递窗内，并紫外 灭菌 30 min 及以上。 5.1.2 采样管转入隔离器 在确保医用供体猪饲养隔离器传递通道内部密封罩密封状态下，取下传递通道外侧密封罩，将无菌 采样管放入传递通道，密封外侧密封罩。 新鲜配制 1.5 % ～ 2.0 % 的过氧乙酸从传递通道外侧密封罩 上的消毒孔，对传递通道内部空间进行喷雾消毒。喷雾时间不宜低于 5 min。消毒完之后 密封消毒孔， 等待 30 min 及以上。通过医用供体猪饲养隔离器操作手套，从隔离器内部取下传递通道内侧密封罩， 将无菌采样管移 入隔离器内，重新罩上传递通道的内侧密封罩。 5.1.3 样本采集 5.1.3.1 肛拭子采集 采集时将灭菌的棉拭子插入动物肛门中，采取直肠粘液或粪便 后，立即将拭子浸入采样管内的无菌 纯水中，并旋紧螺帽盖。 5.1.3.2 粪便标本采集 猪只自然排便后， 挑取约 3 g～5 g的粪便标本，放于采样管中，并旋紧螺帽盖。 5.1.3.3 鼻拭子采集 DB51/T 3183 —2024 3 用灭菌的棉拭子采集鼻腔分泌物，取分泌物后，立即将拭子浸入采样管内的无菌纯水中，并旋紧螺 帽盖。 5.1.4 采样管转出隔离器 取下传递通道内部密封罩，将采样管 转移至隔离器的传递通道内部，罩好内部密封罩，再打开隔离 器传递通道的外部密封罩，将采样管取出，重新罩上外部密封罩。 按照 5.1.2的要求对传递通道进行再次 消毒。 5.1.5 样本保藏 样本应尽快进行检测，在 24小时内检测的样 本可置于 2℃～8℃保存； 24小时内无法检测的样本则 置于 -80℃或以下保存（如无 -80℃保存条件，则于 -20℃冰箱暂存）。应设立专库或专柜单独保存样本。 微生物监测 5.2 5.2.1 检测方法 医用供体猪的病原微生物检测按表 1所列方法进行。 表1 病原微生物检测目录 检测项目a 检测方法 病毒 非洲猪瘟病毒 GB/T 18648 口蹄疫病毒 SN/T 1181 日本乙型脑炎病毒 SN/T 2472 伪狂犬病毒 SN/T 1698 猪传染性胃肠炎病毒 SN/T 1446 猪繁殖与呼吸综合征病毒 SN/T 1247 猪流感病毒 SN/T 3972 猪水泡病病毒 SN/T 2702 猪瘟病毒 SN/T 0762 猪戊型肝炎病毒 SN/T 4235 猪圆环病毒 SN/T 2708 狂犬病毒 GB/T 36789 淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒 SN/T 4748 猪轮状病毒 SN/T 5196 尼帕 SN/T 3954 甲型流感病毒 YY/T 1596 猪细小病毒 SN/T 1919 猪腺病毒 SN/T 3307 猪血凝性脑脊髓炎病毒 参见附录 A 猪巨细胞病毒 参见附录 B 细菌 布鲁氏菌 WS/T 269 猪巴氏杆菌 NY/T 564 DB51/T 3183 —2024 4 表1 病原微生物检测目录 （续） 检测项目a 检测方法 细菌 副猪嗜血杆菌 GB/T 34750 钩端螺旋体 SN/T 3741.1 沙门氏菌 GB/T 14926.1 猪肺炎支原体 NY/T 1186 猪链球菌 GB/T 19915.6 猪胸膜肺炎放线杆菌 SN/T 1447 寄生虫 弓形虫 NY/T 573 其他蠕虫 GB/T 18448.6 鼠贾第鞭毛虫 GB/T 18448.10 体外寄生虫 GB/T 18448.1 a病原微生物检测目录依据国家相关法律法规及流行病学变迁动态调整。 5.2.2 判定标准 生产过程中 的医用供体猪 20项病毒全项 目均不应检出， 细菌中布鲁氏菌不应检出 ，寄生虫中 弓形虫 不应检出 。交付的医用供体猪表 1所列 32项病原微生物 均不应检出。 5.2.3 监测频率 出生 28天内完成至少 2次的检测。 6 饮水和日粮微生物监测 饮水微生物监测 6.1 6.1.1 采样与培养 无菌条件下，取饮用水 1 mL，经 0.45 μm薄膜过滤法处理，采用 R2A琼脂培养基， 30 ℃～ 35 ℃培 养不少于 5天。 6.1.2 判定标准 需氧菌总数 应不得超过100 CFU /mL。 日粮微生物监测 6.2 6.2.1 采样与培养 按照