ICS 13.100 CCS C 60 50 重庆 市地方标准 DB50/T 1722—2024 人外周血淋巴细胞微核检测 自动分析与剂量估算技术规范 2024-12-23发布 2025-03-23实施 重庆市市场监督管理局 发布 DB50/T 1722 —2024 I 目次 前言 ................................ ................................ ................. II 1 范围 ................................ ................................ ................ 1 2 规范性引用文件 ................................ ................................ ...... 1 3 术语和定义 ................................ ................................ .......... 1 4 一般要求 ................................ ................................ ............ 1 5 实验室 ................................ ................................ .............. 2 6 微量全血培养 ................................ ................................ ........ 3 7 细胞收获 ................................ ................................ ............ 3 8 自动化微核分析 ................................ ................................ ...... 4 9 结果评价 ................................ ................................ ............ 5 10 自动化剂量效应曲线的建立 ................................ ........................... 5 附录A （资料性） 转化和未转化淋巴细胞鉴别要点 ................................ ......... 8 附录B （资料性） 淋巴细胞微核检测原始记录 ................................ ............. 9 附录C （资料性） 淋巴细胞微核检测报告单 ................................ .............. 10 附录D （资料性） 微核剂量估算验证示例 ................................ ................ 11 DB50/T 1722 —2024 II 前言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由重庆市疾病预防控制中心提出。 本文件由重庆市卫生健康委员会归口并组织实施。 本文件起草单位：重庆市疾病预防控制中心。 本文件主要起草人：吴梦云、谭秀洪、张华东、李炜、袁方、赵奇、金楠、胡彬、杜全洪、谢悦峰、 杨涛、周景华、李奎、金京、徐思垚。 DB50/T 1722—2024 1 人外周血淋巴细胞微核检测 自动分析与剂量估算 技术规范 1 范围 本文件规定了人外周血淋巴细胞微核自动分析与剂量估算的一般要求、实验室、微量全血培养、细 胞收获、微核分析、结果评价以及自动化剂量效应曲线的建立。 本文件适用于放射工作人员微核检测和一次较均匀全身核与辐射事故剂量估算。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GBZ 2.1—2019 工作场所有害因素职业接触限值 第1部分：化学有害因素 GBZ/T 248 —2014 放射工作人员职业健康检查外周血淋巴细胞染色体畸变检测与评价 GBZ/T 328 —2023 放射工作人员职业健康检查外周血淋巴细胞微核检测方法与受照剂量估算标准 3 术语和定义 GBZ/T 328 —2023界定的以及下列术语和定义适用于本文件。 自动化分析 automated analysis 利用各种技术手段，通过自动检测、信息处理、分析判断、操纵控制，使机器、设备等按照预定的 规律自动运行，实现预期的目标，或生产过程、管理过程、设计过程等高效自动地完成。 微核 micronucleus 由于基因组 DNA损伤导致细胞分裂后期滞后的染色体断片、一个或多个染色体不能随有丝分裂进 入子细胞，而在细胞质中形成完全与主核分开的圆形或椭圆形小核。 [来源：GBZ/T 328—2023，3.2，有修改 ] 淋巴细胞微核率 lymphocyte micronucleus rate 观察 1000个转化淋巴细胞所见的微核总数。 微核淋巴细胞率 micronucleus lymphocyte rate 观察 1000个转化淋巴细胞所见的含微核的细胞数。 4 一般要求 自动化分析设备要求 4.1.1 仪器必须包含微核分析软件和显微镜硬件。 DB50/T 1722 —2024 2 4.1.2 在明场环境下 可自动查找转化淋巴细胞并定位。 4.1.3 通过自动化分析软件识别淋巴细胞中的微核，记录对应坐标。 4.1.4 自动化分析软件可统计样本转化淋巴细胞数、淋巴细胞微核率和微核淋巴细胞率。 4.1.5 可增加端口，扩展多个系统工作站，同时操作，数据共享。 技术人员 要求 4.2.1 一般要求 实验室应有 两名及以上专业技术人员，专业技术人员能熟练操作各项设备，能制片、复核软件分析 结果以及镜下识别正常和异常淋巴细胞，及时完成检测任务。 4.2.2 人员培训计划 4.2.2.1 上岗前技术人员 应接受专业的理论知识和技能培训，并保留培训记录。 4.2.2.2 在岗期间，实验室应每年组织技术人员进行专业知识学习。技术人员应掌握实验室基本管理 条例和生物安全知识，熟悉相关法律、法规、国家及行业标准，熟悉电离辐射生物效应的基础知识、放 射工作人员健康检查内容等。 4.2.2.3 有条件的实验室可外派技术人员参加专业技术培训。 4.2.3 人员质量控制 4.2.3.1 实验室每年制定技术人员内部质量控制计划，至少包括微核实验考核且合格。 4.2.3.2 技术人员实验操作时 应完成原始记录，及时上传检测结果，保证报告时效性。 5 实验室 配置要求 5.1.1 实验室应 拥有足够的空间，可供实验操作、分析数据、保存数据和样本等。 5.1.2 细胞培养间应配置生物安全柜、恒温培养箱、 -20 ℃冰箱、 4 ℃冰箱、移液器等。 5.1.3 人工细胞收获间应配置排风装置 、水平离心机 、移液器、纯水仪、 水浴锅、灭菌锅，选配涡旋 振荡器、分析天平、吹风机 等设备。 5.1.4 显微镜室应配置微核自动化分析设备和普通光学正置显微镜。 5.1.5 实验室宜选配自动接种仪 、自动收获仪 、自动滴片仪、自动染片机等 。 管理要求 5.2.1 实验室主要仪器和设备应建立档案，并有标准操作程序和使用及维护保养记录。 5.2.2 设备应定期检定或校准，实验室根据检定或校准结果出具验证报告，评估设备是否符合实验技 术要求。 5.2.3 设备储存数据须定期导出并保存。 5.2.4 实验室备案实验仪器使用状况，如正常、停止或报废，备份实验相关设备说明书，留存现行 相 关实验标准。 试剂要求 5.3.1 应按照GBZ/T 248 —2014中C3.1～C3.7的规定和要求配制试剂。 5.3.2 细胞松胞素 B储存：用 2.5 mL二甲基亚砜溶解 5 mg细胞松胞素 B粉末配置成母液， -20 ℃避DB50/T 1722—2024 3 光保存。 4.5 mL生理盐水加入 0.5 mL母液配置成工作液。取 160 μL工作液加入 5 mL培养体系 ， 保证试剂终浓度为 6 μg/mL。液体配置、保存和加入培养体系均需避光。 5.3.3 细胞培养基可购买商业成品。更换试剂厂商和批次，须进行验收实验，并留存验收实验记录。 5.3.4 低渗液配制，可取 50 mL的3 mol/L氯化钾饱和液加蒸馏水稀释成 2 L，配制成 0.075 mol/L的