ICS 65.020.20 CCS B 05 4412 肇 庆 市 地 方 标 准 DB 4412/T 30—2024 金线莲种苗繁育与设施栽培技术规程 Technical regulations for seedling breeding and facility cultivation of Anoectochilus roxburghii 2024 - 03 - 22 发布 2024 - 04 - 22 实施 肇庆市市场监督管理局 发 布 DB 4412/T 30 —2024 I 前 言 本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由广东省农业科学院作物研究所提出。 本文件由肇庆市农业农村局归口。 本文件起草单位：广东省农业科学院作物研究所、怀集彩毅农业科技有限责任公司、广东省粤科标 准化科学研究有限公司、肇庆市农业科学研究所、肇庆市食品检验所、肇庆市标准化计量协会、广东福 盈农业科技发展有限公司、肇庆市质量技术咨询服务中心。 本文件主要起草人：邱道寿、郑武林、郑颂林、曾冬苗、钟春燕、王茂辉、黄美华、钟瑗、张民、 张钊、袁园、赵湘涛、龙敏仪、赖德锋、张钊溥、李诺轩。 DB 4412/T 30 —2024 1 金线莲种苗繁育与设施栽培技术规程 1 范围 本文件规定了金线莲种苗繁育与设施栽培技术规程的术语和定义、选种和留种、种苗繁育、种苗质 量控制、种植环境、设施栽培、栽后管理、采收与初加工、质量要求、包装、贮藏和运输、生产档案。 本文件适用于金线莲适生地区的种苗繁育与设施栽培。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB 2763 食品安全国家标准 食品中农药最大残留限量 GB 3095 环境空气质量标准 GB 5009.3 食品安全国家标准 食品中水分的测定 GB 5009.4 食品安全国家标准 食品中灰分的测定 GB 5009.5 食品安全国家标准 食品中蛋白质的测定 GB 5009.11 食品安全国家标准 食品中总砷及无机砷的测定 GB 5009.12 食品安全国家标准 食品中铅的测定 GB 5009.15 食品安全国家标准 食品中镉的测定 GB 5009.17 食品安全国家标准 食品中总汞及有机汞的测定 GB 5009.22 食品安全国家标准 食品中黄曲霉毒素B族和G族的测定 GB 5084 农田灌溉水质标准 GB/T 8321 （所有部分）农药合理使用准则 GB 15618 土壤环境质量 农用地土壤污染风险管控标准（试行） GB/T 34343 农产品物流包装容器通用技术要求 GB/T 34344 农产品物流包装材料通用技术要求 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 金线莲 anoectochilus roxburghii (Wall.) Lindl. 为兰科开唇兰属多年生陆生植物。别名金线兰、金线草、金钱草、金丝线、金耳环、鸟人参、金蚕、 树草莲、金石松、金线虎头蕉、金线入骨消等。原植物为兰科开唇兰属（Anoectochilus）植物金线兰 （俗名：花叶开唇兰） Anoectochilus roxburghii Lindl.，包括金线兰（原变种） Anoectochilus roxburghii (Wall.) Lindl.var. roxburghii 和保亭金线兰 （变种） Anoectochilus roxburghii (Wall.) Lindl. var. baotingensis K. Y. Lang。分布于台湾、福建、广东、海南、广西等地。属国家二级保 护植物。民间作珍稀草药，尤喜作药膳。具有清热凉血、祛风利湿等功效。 DB 4412/T 30 —2024 2 4 选种和留种 选种 应选用兰科开唇兰属（Anoectochilus）金线兰（ Anoectochilus roxburghii ）植物的品种。 留种 在金线莲盛花期，选择形态特征典型、株形差异小、长势均匀、生长健壮的植株进行人工授粉，采 用同种异株异花授粉，授粉后母本立即套袋，挂牌标记。待子房膨大时，每株留果2个～3个；蒴果成熟 时，选择饱满的果实采收，并置于4 ℃冰箱保存备用。 5 种苗繁育 无菌播种繁育 5.1.1 繁育过程及培养条件 金线莲种子经无菌播种、 诱导、 增殖、 分化、 壮苗、 生根等系列培养后获得批量组培苗 （见附录A1） 。 主要培养基参考附录B和附录C执行。培养条件：温度（25±2）℃，光照强度1000 lx～2000 lx，光照时 间8 h/d～10 h/d。 5.1.2 蒴果处理 先用软毛刷将蒴果表面在清水中清洗干净，在1 ％洗衣粉液或1 ％洗洁精中振动浸泡10 min，清水 冲洗30 min。 5.1.3 无菌播种 在超净工作台上，用75 ％酒精冲洗蒴果表面1次。 置于0.1 ％ HgCl 2 溶液中浸泡8 min，然后用无菌水冲洗4次。 用镊子夹起蒴果，无菌滤纸吸干表面水分。 镊住果柄一端，用解剖剪轻轻在蒴果顶端剪开一小口。 果口对准组培瓶口轻轻悬空抖动镊子，将种子均匀地播于种子萌发培养基上。 5.1.4 初代培养 播种后的培养瓶转入培养室进行初代培养，约40 d后种子开始膨大、萌发。种子萌发后，转入增殖 培养基可获得大量原球茎或丛生芽，转入壮苗生根培养基可获得实生苗。 5.1.5 增殖培养 将诱导出的原球茎切成小块，转接到原球茎诱导培养基中，增殖培养约20 d后，能分化出新的团块 状丛生形原球茎。丛生形原球茎可再分切、转接，如此不断增殖，可形成一个无性繁殖系。 将初代培养的不定芽切成1.0 cm～1.5 cm的芽段，接种于增殖培养基上，经40 d～50 d继代培养，增 殖不定芽苗。代数不宜超过10代。 5.1.6 分化培养 DB 4412/T 30 —2024 3 原球茎移入分化培养基中，经25 d左右的分化培养，原球茎球体顶部突起变尖分化成小芽，35 d后 可分化成丛生状的芽或带根、茎、叶的小植株。 5.1.7 壮苗生根培养 经增殖培养后，选取顶端完好、生长健壮、带1片～2片叶子、长2 cm以上的继代芽苗，接入壮苗生 根培养基，先暗培养3 d，然后光照培养40 d～50 d，即可长出新根系。 茎段组培繁育 5.2.1 繁育过程及培养条件 金线莲茎段、茎片、顶芽、腋芽、芽尖等外植体经诱导、增殖、分化、壮苗、生根等系列培养后获 得批量组培苗（见附录A2）。主要培养基参考附录B和附录C执行。培养条件：温度(25℃±2)℃，光照 强度1000 lx～2000 lx，光照时间8 h～10 h/d。 5.2.2 外植体获取 选择生长健壮的野生、栽培或组培植株的茎段、茎片、顶芽、腋芽、芽尖等作为外植体。 5.2.3 外植体处理 野生或栽培的金线莲植株先用自来水冲洗干净，清理叶、叶苞鞘、根，用1 ％洗衣粉液或1 ％洗洁 精浸泡20 min，流水冲洗30 min。 再转入超净工作台上，先用75 ％酒精浸泡30 s，然后用0.1％ HgCl 2 溶液浸泡10 min，再用无菌水 洗5次，无菌滤纸吸干水分，将植株切成0.5 cm长带节的茎段或2 mm厚的茎片备用。 无菌瓶苗则可直接在超净工作台上取出，将植株切成0.5 cm长带节的茎段或2 mm厚的茎片，或剪取 顶芽、腋芽或芽尖等外植体材料备用。 5.2.4 原球茎或不定芽诱导培养 将备用外植体接种于原球茎或不定芽诱导培养基中，经诱导培养，形成大量原球茎或丛生芽。 5.2.5 原球茎或不定芽增殖培养 原球茎切成小块，转接到原球茎诱导培养基中，经增殖培养分化出丛生形原球茎。丛生形原球茎经 再分切、转接，形成无性繁殖系。 将不定芽切成1.0 cm～1.5 cm的芽段，接种于增殖培养基上培养40 d～50 d，增殖不定芽苗。代数 不宜超过10代。 5.2.6 原球茎分化培养 同5.1.6。 5.2.7 壮苗生根培养 同5.1.7。 6 种苗要求 种苗要求 DB 4412/T 30 —2024 4 种苗应无污染、无烂茎、无烂根，叶色正常并展开。根系发达，具根1条～2条或以上，株高≥5.0 cm，茎粗≥0.20 cm。 炼苗 生根培养后，选取根系完好、苗高达到4 cm的瓶苗，转移到与栽培环境相近的炼苗大棚进行炼苗。 棚内配双层80 ％的遮阳网，保持自然散射光，并随着炼苗时间增加逐步提高光照度。炼苗环境温度 20 ℃～30 ℃，炼苗时间7 d～15 d。 出瓶 用镊子从培养瓶中轻轻取出组培苗，用清水反复漂洗干净，然后用杀菌液浸根10 min左右。杀菌液 应符合GB/T 8321的规定。 示例：杀菌液配方：用春雷喹啉铜2000倍液或恶霉灵+中生菌素2000倍液。 7 种植环境 环境空气质量应符合 GB 3095 的要求。 农田灌溉水应符合 GB 5084 的要求。 土壤环境质