ICS65.020.20 CCSB61 备案号：119441-2025DB4409 茂名市地方标准 DB4409/T64—2024 益智组培技术规程 TechnicalregulationontissuecultureofAlpiniaoxyphylla 2024-12-17发布 2024-12-25实施 茂名市市场监督管理局 发布DB4409/T64—2024 I前  言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由茂名市市场监督管理局提出并归口。 本文件起草单位：茂名市林业科学研究所 本文件主要起草人：彭燕琼、陈龙舟、陈杏婷、王祥、李太钊、曾伟、卜蜜源、吴华青。DB4409/T64—2024 1益智组培技术规程 1范围 本文件规定了益智组培的无菌设施条件、组培、移植、苗木出圃、苗木建档等技术要求。 本文件适用于茂名市益智的组培育苗。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 LY/T2289林木种苗生产经营档案 LY/T2290林木种苗标签 NY/T1474益智种苗 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 益智AlpiniaoxyphyllaMiq. 益智是姜科Zingiberaceae山姜属Alpinia多年生草本植物，为我国四大南药之一。 3.2 外植体explant 在植物组织培养过程中，接种在培养基上的无菌细胞、器官、组织等均称为外植体。 3.3 接种inoculation 将消毒后的外植体在无菌条件下接入培养容器内培养基中的过程。 3.4 继代培养subculture 将培养物通过更换新鲜培养基及不断切割或分离，进行连续多代培养的过程。 3.5 组培苗plantletDB4409/T64—2024 2利用植物组织、器官或细胞等作为材料，通过组织培养方式生产获得的植株。 4组培的无菌设施条件 4.1仪器设备 4.1.1消毒设备 高压灭菌锅、医用小推车、专用托盘、微波炉、电热灭菌器等。 4.1.2洗涤设备 晾瓶架、毛刷等。 4.1.3称量设备 精度为0.1g的电子秤。 4.1.4接种室设备 超净工作台，接种专用工作服，接种专用盘，解剖刀，口罩，鞋套，专用记号笔，脱脂棉/脱脂纱 布，紫外灯，三角烧瓶，烧杯，量筒，组培瓶，组培盖，长镊子，剪刀，容量瓶，移液管，牛皮纸，组 培筐等。 4.1.5培养室设备 空调，高效节能培养架，光谱灯，温湿度计，程控定时器。 4.2污染控制 污染控制的内容包括： a）人员进入组培室前更换干净鞋子和衣服，通过风淋系统消毒后进入组培室； b）每次接种前用紫外灯照射接种室和培养基存放室30min； c）接种前超净工作台的台面、四周、顶面及台面上所有物品用75%酒精喷雾一遍，小方巾擦拭一 遍； d）每接种一瓶母苗需更换接种工具，且手术刀、镊子等用230℃～250℃电热灭菌器灭菌1min 以上； e）接种碟子、手术刀、镊子等接种工具每7d用120℃～125℃高压灭菌25min一次； f）组培室每7d用消毒液拖地一遍，紫外灯照射30min一次。 5组培 5.1灭菌 5.1.1培养基 5.1.1.1培养基配制 培养基按各组织培养阶段培养基配方（见附录A）进行配制。 5.1.1.2培养基灭菌DB4409/T64—2024 3将配好的培养基加入琼脂后加热溶解，趁热分装于350mL组培瓶中，每瓶30mL，在高压灭菌锅中 120℃～125℃灭菌20min。取出冷却后放置培养基存放室7d以上，确认无污染后再使用。 5.1.2接种工具 长镊子、解剖刀、剪刀等接种所需的一切用具以及无菌水，与5.1.1.2的培养基一起在高压灭菌锅 中120℃～125℃灭菌20min。 5.2外植体 5.2.1选择 采用块状茎芽做外植体，茎芽需饱满、健壮，无畸形、无病虫害、无严重机械损伤等。 5.2.2消毒 于晴天挖取益智未展叶块茎茎芽，去土去根，在块茎茎芽苞片与姜块交界处切断，保湿带回实验室， 置于饱和漂白粉溶液浸泡30min，无菌水洗净，转移至次氯酸钠溶液浸泡15min，无菌水漂洗4次以上， 将漂洗干净的外植体进行第二次切割，剥离块茎茎芽外层苞片，切除接触次氯酸钠溶液的部分，从中轴 纵切成两半，再用无菌滤纸吸干表面水分待用。 5.2.3诱导 5.2.3.1接种 将无菌外植体接种到诱导培养基，接种时芽朝上，每瓶接种2个～3个外植体。接种后，在瓶子下 角用记号笔标记接种材料、培养基、操作人员的编号、接种时间等信息。 5.2.3.2培育条件 培养温度为25℃±2℃，培养前期，暗培养7d～10d，有芽萌发后转入光下培养，光照强度为1000 lx，光照时间8h/d～10h/d。 5.3增殖培养 将获得的密集丛生芽切割为带3个～5个不定芽的组织块，接种至增殖培养基，每培养30d则继代 转接1次。350mL的培养瓶以接种5个芽为宜。接种后，在瓶子下角标记好接种材料编号、继代次数、 操作人员编号、接种日期等信息。培养温度为25℃±2℃，光照强度1500lx，光照时间10h/d～12h/d。 5.4壮苗培养 将获得的健壮丛生芽切割为带3个～5个单芽的组织块，接种至壮苗培养基，培养温度为25℃± 2℃，光照强度1500lx，光照时间12h/d～14h/d，培养30d。 5.5生根培养 将获得的单芽切割分级，高3.0cm～4.0cm的单芽接种至生根培养基，高小于3.0cm的单芽重新接 种至壮苗培养基，培养温度为25℃±2℃，光照强度1500lx，光照时间8h/d。接种15d后，单芽基部 形成粗壮的白色不定根，接种30d后，不定根萌发侧根，形成完整的根系。 6移植DB4409/T64—2024 46.1炼苗 当组培苗长高至2.5cm～4cm，具有3片～4片叶和2条～3条根时，将其带瓶置于温室内进行炼苗， 温室温度为25℃～35℃，在晴天的9:00～16:30，温室覆盖遮光率90%的遮阳网，其余时段遮阳网全开 透光，在阴雨天，温室全天透光。炼苗15d后便可移栽。 6.2移栽 6.2.1洗苗 洗净完成炼苗的组培苗根部的培养基，用多菌灵500倍液+S-诱抗素1500倍液浸泡15min，待移栽。 6.2.2容器与基质 使用72孔穴盘，基质用泥炭土:珍珠岩（体积比8:2）混合均匀。 6.2.3植苗 植苗前一天用敌磺钠500倍液浇透基质，将洗净的组培苗移入穴中央，压实基质，移栽完成后粘着 剂1500倍液喷湿组培苗和基质。 6.2.4移后管理 移后管理的内容包括： a）移栽后覆盖遮光率75%的遮阳网； b）移栽5d后，喷洒萘乙酸•吲哚丁酸1000倍液一次； c）移栽7d后，雾状喷水一次； d）移栽10d后，喷洒咪鲜胺乳油800倍～1200倍液+叶面肥800倍液一次； e）移栽15d后，逐渐增大光照强度，日常喷水。每30d用复合肥200倍～500倍液浇灌一次，若苗 木生长过旺，喷洒丙环唑乳油2500倍液一次。 7苗木出圃 7.1质量分级 益智组培苗木分为一级、二级两个级别，分级指标按照表1的规定执行。 表1益智组培苗木分级指标 分级指标等级 一级 二级 苗高/（cm） ≥ 40 30 茎粗/（cm） ≥ 0.5 0.3 分蘖数/（个） ≥ 5 3 7.2检验检疫 检查苗木生长情况、机械损伤、有无检疫性病虫害等，参照NY/T1474中的4和5规定执行。 7.3标签及证书